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.2019年6月;157(6):511-523.
doi:10.1530/REP-18-0495。

多次超排卵改变小鼠早期胚胎组蛋白修饰

附属公司

多次超排卵改变小鼠早期胚胎的组蛋白修饰

寿宾堂等。 复制. 2019年6月.

摘要

结果表明,反复超排对小鼠卵巢和卵丘细胞有不利影响。然而,人们对重复超排对早期胚胎的影响知之甚少。表观遗传重编程是早期胚胎发育中的一个重要事件,很容易受到环境的干扰。因此,我们推测多次超排可能对早期胚胎的组蛋白修饰产生不利影响。雌性CD1小鼠随机分为四组:(a)自发发情周期(R0);(b) 一次性超排(R1);(c) 以7天为间隔进行三次超排(R3)和(d)以7天的间隔进行五次超排卵(R5)。我们发现重复超排显著降低了受精率。随着超数排卵次数的增加,早期胚胎发育率下降。囊胚中的超排卵也影响Oct4、Sox2和Nanog的表达。免疫荧光结果显示,小鼠早期胚胎重复超排可显著降低组蛋白4在赖氨酸12(H4K12ac)的乙酰化水平(P<0.01)。随着超排卵次数的增加,原核和胚泡中组蛋白4在赖氨酸16(H4K16ac)处的乙酰化水平也显著降低(P<0.01)。H3K9me2和H3K27me3在四细胞胚胎和囊胚中显著增加。我们进一步发现,重复超排处理增加了早期胚胎中组蛋白脱乙酰化酶Hdac1、Hdac2和组蛋白甲基转移酶G9a的mRNA水平,但降低了组蛋白脱甲基化酶编码基因Kdm6a和Kdm6b的表达水平。总之,多次超排卵会改变早期胚胎的组蛋白修饰。

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数字

图1
图1
多次超排对胚胎发育的影响。(A) 超排时间表;(B) 与雄性交配后从每只老鼠身上取回的平均卵子数量;(C) 第1个PB的卵母细胞发生率;(D) 囊胚的细胞数。R0、R1、R3和R5组的囊胚数分别为67、73、64和74个。(E和F)通过检查基因的表达,如多能性相关基因,也检查了多次超排对胚胎质量的影响10月4日,Sox2系统,纳克和凋亡相关基因Bcl2公司,Bax公司案例3.
图2
图2
的代表性图像在体外-培养的胚胎。在8、24、48、84和108时采集胚胎形态图像培养基h。(A) PN4期原核胚胎;(B) 双细胞期胚胎;(C) 四细胞期胚胎;84岁时的(D和E)囊胚h和108h.箭头表示不同阶段的正常胚胎,黑色箭头表示死亡胚胎,白色箭头表示阻塞的胚胎。比例尺 = 100微米。
图3
图3
早期胚胎中H4K12的乙酰化水平。用共焦显微镜检测早期胚胎中H4K12ac的荧光强度。(A) PN4期的原核胚胎,n个 = 42(R0),n个 = 45(R1),n个 = 44(R3),n个 = 40(R5);(B和C)原核的平均荧光强度;(D) 双细胞期胚胎,n个 = 52(R0),n个 = 50(R1),n个 = 57(R3),n个 = 49(R5);(E) 双细胞期胚胎的平均荧光强度;(F) 四细胞期胚胎,n个 = 39(R0),n个 = 43(R1),n个 = 45(R3),n个 = 41(R5);(H) 囊胚,n个 = 49(R0),n个 = 47(R1)中,n个 = 43(R3),n个 = 45; (G和I)4细胞期胚胎和囊胚的平均荧光强度。比例尺(原核胚胎、四细胞期胚胎、囊胚) = 25μm。比例尺(双细胞期胚胎) = 50μm。数据显示为平均值±s.d.不同字母表示P(P) < 组间0.05。
图4
图4
早期胚胎中H4K16的乙酰化水平。用共焦显微镜检测早期胚胎中H4K16ac的荧光强度。(A) PN4期的原核胚胎,n个 = 44(R0),n个 = 43(R1),n个 = 42(R3),n个 = 42(R5);(B和C)原核的平均荧光强度。(D) 双细胞期胚胎,n个 = 50(R0),n个 = 55(R1),n个 = 52(R3),n个 = 53(R5);(E) 双细胞期胚胎的平均荧光强度;(F) 四个细胞期胚胎,n个 = 37(R0),n个 = 44(R1),n个 = 50(R3),n个 = 47(R5);(H) 胚泡胚胎,n个 = 50(R0),n个 = 46(R1),n个 = 47(R3),n个 = 50;(G和I)四细胞期胚胎和囊胚的平均荧光强度。比例尺 = 25μm。数据显示为平均值±s.d.不同字母表示P(P) < 组间0.05。
图5
图5
早期胚胎中H3K9水平的二甲基化。使用共聚焦显微镜检测早期胚胎中H3K9me2的荧光强度。(A) PN4期的原核胚胎,n个 = 47(R0),n个 = 47(R1),n个 = 49(R3),n个 = 50(R5);(B) 原核平均荧光强度;(C) 双细胞期胚胎,n个 = 51(R0),n个 = 52(R1),n个 = 52(R3),n个 = 54(R5);(D) 双细胞期胚胎的平均荧光强度;(E) 四细胞期胚胎,n个 = 39(R0),n个 = 41(R1),n个 = 44(R3),n个 = 43(R5);(F) 四细胞期胚胎的平均荧光强度;(G) 囊胚,n个 = 47(R0)中,n个 = 47(R1),n个 = 47(R3),n个 = 43; (H) 囊胚的平均荧光强度。比例尺 = 25μm。数据显示为平均值±s.d.不同字母表示P(P) < 组间0.05。
图6
图6
早期胚胎中H3K27水平的三甲基化。用共焦显微镜检测早期胚胎中H3K27me3的荧光强度。(A) PN4期的原核胚胎,n个 = 50(R0),n个 = 50(R1),n个 = 49(R3),n个 = 50(R5);(B) 雌性原核的平均荧光强度;(C) 双细胞期胚胎,n个 = 53(R0),n个 = 54(R1),n个 = 54(R3),n个 = 54(R5);(D) 双细胞期胚胎的平均荧光强度;(E) 四细胞期胚胎,n个 = 44(R0),n个 = 44(R1),n个 = 44(R3),n个 = 43(R5);(F) 四细胞期胚胎的平均荧光强度;(G) 囊胚,n个 = 46(R0),n个 = 47(R1),n个 = 46(R3),n个 = 43; (H) 囊胚的平均荧光强度。比例尺 = 25μm。数据显示为平均值±s.d.不同的字母表示P(P) < 组间0.05。
图7
图7
的表达式Hdac1型,Ddac2型,G9a型,丹麦马克6a丹麦马克6b在早期胚胎中。的表达式Hdac1型,数据采集卡2,G9a型,丹麦马克6a丹麦马克6b使用qRT-PCR检测不同阶段的早期胚胎中。(A) 的表达式Hdac1型Hdac2型PN4期胚胎(150个胚胎,n个 = 3); (B) 的表达式Hdac1型Hdac2型在双细胞期胚胎(130个胚胎,n个 = 3); (C) 的表达式Hdac1型Hdac2型四细胞期胚胎(130个胚胎,n个 = 3); (D) 的表达式Hdac1型Hdac2型囊胚(50个胚胎,n个 = 3) ;(E) 乙酰化酶的表达,如Hat1和Gcn5;(F) 的表达式G9a型,丹麦马克6a丹麦马克6bPN4期胚胎(150个胚胎,n个 = 3); (G) 的表达式G9a型,丹麦马克6aKdm6亿在双细胞期胚胎(130个胚胎,n个 = 3); (H) 的表达式G9a型,丹麦马克6a丹麦马克6b四细胞期胚胎(130个胚胎,n个 = 3); (一) 的表达式G9a型,肯尼亚第纳尔6a丹麦马克6b囊胚(50个胚胎,n个 = 3). 数据显示为平均值±s.d.不同字母表示P(P) < 组间0.05。

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引用人

参考文献

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