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.2019年4月;17(4):4034-4043.
doi:10.3892/ol.2019.10025。 Epub 2019年2月7日。

低氧诱导因子-1信号通路影响HCC827细胞对吉非替尼的敏感性

附属公司

低氧诱导因子-1信号通路影响HCC827细胞对吉非替尼的敏感性

钱进等。 Oncol Lett公司. 2019年4月.

摘要

尽管EGFR-tyrosine kinase inhibitors(EGFR-TKIs)对非小细胞肺癌(NSCLC)的初期有显著和快速的反应,但大多数伴有激活表皮生长因子受体(EGFR)突变的非小细胞癌患者仍不可避免地进展到阶段。先前的研究表明,缺氧可能与EGFR突变阳性NSCLC对EGFR-TKIs的耐药性有关。因此,本研究调节缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路的活性,以观察其是否能够改变肺癌细胞对吉非替尼的敏感性。本研究选择3-(5'-羟甲基-2'-呋喃基)-1-苄基吲哚唑(YC-1)和二甲基草酰甘氨酸(DMOG)分别作为HCC827细胞HIF-1信号通路的抑制剂和激活剂。用不同的处理方法培养细胞,培养时间不同:空白对照组、DMOG、吉非替尼或DMOG与吉非替宁联合培养36和48小时;然后将空白对照YC-1、吉非替尼或YC-1与吉非替尼联用16和28小时。进行western blot分析以评估HIF-1α和磷酸化肝细胞生长因子受体(p-MET)的蛋白表达水平,采用MTT分析测定细胞增殖,用集落形成试验检测细胞的克隆形成能力,用伤口愈合试验检测细胞迁移能力。此外,采用Pearson相关分析评估p-Met和HIF-1α表达水平之间的相关性。最后,与单独使用吉非替尼相比,吉非替尼和DMOG联合使用显著提高了HCC827细胞的生长和细胞迁移能力。当吉非替尼和YC-1联合使用时,与对照细胞相比,对HCC827细胞生长和细胞迁移能力的抑制作用显著增强。Pearson相关分析显示p-Met表达水平与HIF-1α表达水平呈强正相关。因此,可以得出结论,HIF-1信号通路影响HCC827细胞对吉非替尼的敏感性。p-Met和HIF-1α表达水平之间的正相关可能是HIF-1信号通路影响HCC827细胞对吉非替尼敏感性的潜在机制。

关键词:3-(5′-羟甲基-2′-呋喃基)-1-苄基咪唑;吉非替尼;低氧诱导因子-1;草酰甘氨酸;磷酸化肝细胞生长因子受体。

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数字

图1。
图1。
不同DMOG和吉非替尼处理HCC827细胞HIF-1α的表达。(A) Western blot分析检测不同处理(空白对照、DMOG、吉非替尼、DMOG-吉非替尼联用36和48小时)HCC827细胞HIF-1α水平。DMOG和吉非替尼的使用浓度分别为2 mM和20 nM。(B) 从斑点密度扫描得到的条形图。误差线表示三个独立实验的平均值±标准偏差*P<0.05和**P<0.01。HIF-1α,低氧诱导因子-1;DMOG,二甲基草酰甘氨酸。
图2。
图2。
DMOG和吉非替尼不同处理HCC827细胞的MTT检测。采用MTT法检测不同处理(DMOG、吉非替尼、DMOG和吉非替尼联用36和48小时)的HCC827细胞的细胞增殖情况。DMOG和吉非替尼的使用浓度分别为2 mM和20 nM。误差线表示三个独立实验的平均值±标准偏差**P<0.01。DMOG,二甲基草酰甘氨酸。
图3。
图3。
DMOG和吉非替尼不同处理的HCC827细胞集落形成分析。(A) 通过集落形成分析,评价不同处理(空白对照、DMOG、吉非替尼、DMOG-吉非替尼联用36和48小时)HCC827细胞的集落形成能力。DMOG和吉非替尼的使用浓度分别为2 mM和20 nM。(B) 量化了三个独立实验的结果。误差线表示三个独立实验的平均值±标准偏差*P<0.05和**P<0.01。DMOG,二甲基草酰甘氨酸。
图4。
图4。
用DMOG和吉非替尼不同处理的HCC827细胞的伤口愈合测定。(A) 采用伤口愈合试验测定不同处理(空白对照、DMOG、吉非替尼、DMOG-吉非替尼联用36 h)的HCC827细胞的细胞迁移能力。受伤后24小时和48小时拍摄的代表性图像(放大倍数,×100)描述了细胞迁移。DMOG和吉非替尼的使用浓度分别为2 mM和20 nM。(B) 定量分析受伤后24小时和48小时HCC827细胞的愈合率。误差条表示三个独立实验的平均值±标准偏差。(C) 采用伤口愈合试验评价不同处理(空白对照、DMOG、吉非替尼、DMOG-吉非替尼联用48 h)HCC827细胞的细胞迁移能力。受伤后24小时和48小时拍摄的代表性图像(放大倍数,×100)描述了细胞迁移。DMOG和吉非替尼的使用浓度分别为2 mM和20 nM。(D) 定量分析受伤后24小时和48小时HCC827细胞的愈合率。误差条表示三个独立实验的平均值±标准偏差*P<0.05和**P<0.01。DMOG,二甲基草酰甘氨酸。
图5。
图5。
不同YC-1和吉非替尼处理HCC827细胞HIF-1α的表达。(A) 采用Western blot分析评估不同处理(空白对照、YC-1、吉非替尼、YC-1和吉非替尼联用16和28小时)的HCC827细胞中HIF-1α蛋白的表达水平。YC-1和吉非替尼的使用浓度分别为40µM和20 nM。(B) 斑点的定量密度扫描。误差线表示三个独立实验的平均值±标准偏差**P<0.01。HIF-1α,低氧诱导因子-1;YC-1,3-(5′-羟甲基-2′-呋喃基)-1-苄基吲哚唑。
图6。
图6。
YC-1和吉非替尼不同处理HCC827细胞的MTT检测。采用MTT法评估不同处理(YC-1、吉非替尼、YC-1和吉非替尼联用16和28小时)的HCC827细胞的细胞增殖。YC-1和吉非替尼的使用浓度分别为40µM和20 nM。误差线表示三个独立实验的平均值±标准偏差*P<0.05。YC-1,3-(5′-羟甲基-2′-呋喃基)-1-苄基吲哚唑。
图7。
图7。
YC-1和吉非替尼不同处理HCC827细胞的集落形成分析。(A) 进行集落形成分析,以确定不同处理(空白对照、YC-1、吉非替尼、YC-1和吉非替尼联用16和28 h)的HCC827细胞的集落形成能力。YC-1和吉非替尼的使用浓度分别为40µM和20 nM。(B) 量化了三个独立实验的结果。误差线表示三个独立实验的平均值±标准偏差*P<0.05和**P<0.01。YC-1,3-(5′-羟甲基-2′-呋喃基)-1-苄基咪唑。
图8。
图8。
YC-1和吉非替尼不同处理HCC827细胞的伤口愈合试验。(A) 采用伤口愈合试验测定不同处理(空白对照、YC-1、吉非替尼、YC-1和吉非替尼联用16 h)的HCC827细胞的细胞迁移能力。描述了受伤后24小时和48小时拍摄的代表性图像(放大倍数,×100)。YC-1和吉非替尼的使用浓度分别为40µM和20 nM。(B) 定量分析受伤后24小时和48小时HCC827细胞的愈合率。误差线表示三个独立实验的平均值±标准偏差。(C) 采用伤口愈合试验评价不同处理(空白对照、YC-1、吉非替尼、YC-2和吉非替尼联用28 h)HCC827细胞的细胞迁移能力。在受伤后24小时和48小时拍摄代表性图像(放大倍数,×100)。YC-1和吉非替尼的使用浓度分别为40µM和20 nM。(D) 定量分析受伤后24小时和48小时HCC827细胞的愈合率。误差线表示三个独立实验的平均值±标准偏差*P<0.05和**P<0.01。YC-1,3-(5′-羟甲基-2′-呋喃基)-1-苄基吲哚唑。
图9。
图9。
HIF-1α和p-Met在不同处理的HCC827细胞中的表达。(A) Western blot分析测定不同处理(空白对照、DMOG、吉非替尼、DMOG-吉非替尼联用36和48小时)HCC827细胞中HIF-1α和p-Met的水平。DMOG和吉非替尼的使用浓度分别为2 mM和20 nM。(B) Western blot分析评估不同处理(空白对照、YC-1、吉非替尼、YC-1和吉非替尼联用16和28小时)HCC827细胞中HIF-1α和p-Met的水平。YC-1和吉非替尼的使用浓度分别为40µM和20 nM。(C) 斑点的定量密度扫描。误差线表示三个独立实验的平均值±标准偏差*P<0.05和**P<0.01。HIF-1α,低氧诱导因子-1;p-Met,磷酸化肝细胞生长因子受体;DMOG,二甲基草酰甘氨酸;YC-1,3-(5′-羟甲基-2′-呋喃基)-1-苄基吲哚唑。
图10。
图10。
不同处理HCC827细胞HIF-1α水平与p-Met水平的相关性。Pearson相关分析显示,不同处理的HCC827细胞中p-Met水平与HIF-1α水平呈显著正相关(r2=0.978,P<0.01)。HIF-1α,低氧诱导因子-1;p-Met,磷酸化肝细胞生长因子受体。

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