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.2019年3月6:24:1。
doi:10.1186/s11658-018-0127-8。 2019年eCollection。

MiR-106a直接靶向LIMK1抑制口腔癌细胞的增殖和EMT

冰霞石 1, 朝马 2, 刘国林 1, 郭燕军（Yanjun Guo） 1
附属公司

MiR-106a直接靶向LIMK1抑制口腔癌细胞的增殖和EMT

冰霞石等。 细胞分子生物学实验. .

摘要

背景：LIM激酶1（LIMK1）的表达水平与微小RNA（miRNA）的加工密切相关。据报道，在许多癌症的进展过程中，LIMK1水平较高。我们的研究探讨了LIMK1和miR-106a在口腔鳞癌中的相互作用。

方法：采用定量RT-PCR检测OSCC组织和细胞系中LIMK1和miR-106a的水平。评估细胞增殖率和上皮-间充质转化（EMT），以确定miR-106a和LIMK1在OSCC细胞中的生物学功能。采用定量RT-PCR和western blotting检测LIMK1的mRNA和蛋白水平。进行荧光素酶分析以验证LIMK1在OSCC细胞中作为miR-106a靶点。

结果：我们发现，口腔鳞癌组织和细胞系中miR-106a水平显著降低，LIMK1表达显著增加。这些变化之间有着密切的联系。敲除LIMK1可显著抑制OSCC细胞的增殖和EMT。生物信息学分析预测LIMK1是miR-106a的潜在靶基因，荧光素酶报告基因分析证实miR-106b可以直接靶向LIMK1。将miR-106a导入OSCC细胞与LIMK1沉默的效果相似。OSCC细胞中LIMK1的过度表达部分逆转了miR-106a模拟物的抑制作用。

结论：MiR-106a通过直接降低LIMK1的表达抑制OSCC细胞的增殖和EMT。

关键词：上皮-间充质转化；LIM激酶1；MicroRNA-106a；口腔鳞癌；增殖。

PubMed免责声明

利益冲突声明

人体组织研究：本研究经沧州市中心医院伦理委员会批准（CZCH2015052609），符合《赫尔辛基宣言》的指导方针和原则。所有参与者都签署了书面知情同意书。不适用。作者声明，他们没有相互竞争的利益。Springer Nature在公布的地图和机构关联中的管辖权主张方面保持中立。

数字

图1
图1
LIMK1和miR-106a在口腔鳞癌组织和细胞系中的表达。一口腔鳞癌组织中LIMK1和LIMK2表达的定量RT-PCR分析(n个 = 20） 和邻近正常组织(n个 = 10). 转录水平标准化为GAPDH表达。b条通过定量RT-PCR分析GAPDH标准化的三个OSCC细胞株中LIMK1的相对表达(n个 = 6).c（c）OSCC组织和邻近正常组织中miR-106a水平的定量RT-PCR分析。转录水平被标准化为U6。d日三株归一化为U6的OSCC细胞系中miR-106a相对水平的定量RT-PCR分析(n个 = 6).e（电子）Pearson对口腔鳞癌组织中miR-106a相对表达水平和LIMK1相对mRNA水平的相关分析。所有数据均以平均值±SEM表示*第页 < 0.05, **第页 < 0.01, ***第页 < 0.001与正常组织或NHOK
图2
图2
LIMK1沉默对OSCC细胞增殖和EMT的影响。用si-LIMK1或si-NC转染SCC4细胞48小时 小时。一通过定量RT-PCR和western blot检测LIMK1的mRNA和蛋白表达。b条用BrdU-ELISA法评估细胞增殖。c（c）通过定量RT-PCR检测PCNA、CDK2、CDK4、cyclin D1、cyclin-E1、p21和p27的mRNA表达。d日分别通过定量RT-PCR和western blot检测E-钙粘蛋白、N-钙粘素、波形蛋白、SNAIL、SLUG和ZEB1的表达。所有数据均以平均值±SEM表示，n个 = 6#第页 < 0.05,##第页 < 0.01与si-NC
图3
图3
LIMK1是miR-106a的直接靶点。用miR-106a模拟物或抑制剂转染SCC4细胞48 小时。一LIMK1 3'UTR的示意图，显示假定的miRNA靶位点。b条LIMK1-WT和LIMK1-MUT相对荧光素酶活性的分析。c（c）通过定量RT-PCR和western blot检测LIMK1的mRNA和蛋白表达。所有数据均表示为平均值±SEM，n = 6##第页 < 0.01,###第页 < 0.001 vs.miR-NC或anti-miR-NC
图4
图4
miR-106a对OSCC细胞增殖和相关分子的影响。用miR-106a模拟物或抑制剂转染SCC4细胞48 小时。一通过定量RT-PCR检测miR-106a水平。b条用BrdU-ELISA法评估细胞增殖。c（c）通过定量RT-PCR检测PCNA、CDK2、CDK4、cyclin D1、cyclin-E1、p21和p27的mRNA表达。所有数据均表示为平均值±SEM，n = 6#第页 < 0.05,##第页 < 0.01,###第页 < 0.001 vs.miR-NC或anti-miR-NC
图5
图5
miR-106a对OSCC细胞中EMT相关分子表达的影响。用miR-106a模拟物或抑制剂转染SCC4细胞48 h.通过定量RT-PCR和western blot分别测定E-钙粘蛋白、N-钙粘素、波形蛋白、SNAIL、SLUG和ZEB1的mRNA和蛋白表达。所有数据均表示为平均值±SEM，n = 6#第页 < 0.05,##第页 < 0.01,###第页 < 0.001 vs.miR-NC或anti-miR-NC
图6
图6
在miR-106a-过度表达的OSCC细胞中引入LIMK1部分促进了细胞增殖和EMT。用miR-106a模拟物转染SCC4细胞，转染或不转染pcDNA-LIMK1载体。一通过定量RT-PCR和western blot检测LIMK1的mRNA和蛋白表达。b条使用BrdU-ELISA分析评估细胞增殖。c（c）采用定量RT-PCR检测PCNA、CDK2、CDK4、cyclin D1、cyclin-E1、p21和p27的mRNA表达。d日通过定量RT-PCR检测E-钙粘蛋白、N-钙粘素、波形蛋白、SNAIL、SLUG和ZEB1的表达。所有数据均表示为平均值±SEM，n = 6#第页 < 0.05,##第页 < 0.01,###第页 < 0.001与pcDNA3.1 + miR-106氨基
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