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.2019年3月;17(3):2334-2340.
doi:10.3892/etm.2019.7211。 Epub 2019年1月29日。

抑制NET-1通过激活PI3K/AKT信号通路抑制肝细胞癌细胞增殖并促进细胞凋亡

附属公司

抑制NET-1通过激活PI3K/AKT信号通路抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡

孙向军等。 实验治疗学. 2019年3月.

摘要

本研究旨在阐明Ras同源基因家族成员神经上皮细胞转化1(NET-1)在肝细胞癌(HCC)中的潜在机制。为了确定NET-1的表达与MHCC97-H细胞的增殖和迁移之间的关系,用NET-1小干扰RNA和si阴性对照转染细胞。NET-1 siRNA转染后,MHCC97-H细胞的增殖率显著降低,凋亡细胞百分比增加。本研究使用肝癌细胞系MHCC97-H,因为与MHCC97-L细胞系相比,其NET-1表达水平增加。测定凋亡相关蛋白的表达水平,包括凋亡调节因子Bax(Bax)、cyclinD1、凋亡调节因子Bcl-2(Bcl-2)和caspase-3。还通过蛋白质印迹测定了磷酸肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)及其磷酸化形式的表达水平。NET-1基因敲除后,Bax和cyclinD1的表达降低,Bcl-2和caspase-3的表达增加,PI3K/AKT信号通路受到抑制。本研究结果表明,抑制NET-1可以通过靶向PI3K/AKT信号通路抑制肝癌的进展。与正常肝细胞相比,肝癌细胞中NET-1的表达水平升高。

关键词:肝细胞癌;神经上皮细胞转化1;磷脂酰肌醇3-激酶;增殖;蛋白激酶B。

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数字

图1。
图1。
NET-1在肝癌细胞系和正常肝细胞中的表达。(A) 采用逆转录定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测了肝癌细胞系MHCC97-L、MHCC97-H和正常肝细胞系L-02中NET-1的相对mRNA表达水平*与L-02细胞相比,P<0.05和**P<0.01。(B) 采用western blotting法检测肝癌细胞系MHCC97-L和MHCC97-H以及正常肝细胞系L-02中NET-1的蛋白表达水平。NET-1,神经上皮细胞转化1;肝癌,肝细胞癌。
图2。
图2。
验证转染效率和细胞增殖试验。(A) 不同处理细胞中NET-1的蛋白和(B)mRNA表达。(C) 转染NET-1 siRNA或siNC后MHCC97-H细胞的OD 490值*与对照组相比,P<0.05,***P<0.001;#与si-NC.NET-1,神经上皮细胞转化1相比,P<0.05;si,小干扰RNA;si-NC,小干扰RNA阴性对照。
图3。
图3。
NET-1基因敲除促进肝癌细胞凋亡。(A) (A)对照组、(b)siNC组和(c)NET-1 siRNA组中MHCC97-H细胞的凋亡百分比。(B) MHCC97-H细胞在(a)对照、(B)siNC和(c)NET-1 siRNA中的细胞周期分布。siRNA,小干扰RNA;siNC,小干扰RNA阴性对照;NET-1,神经上皮细胞转化1。
图4。
图4。
NET-1的敲除影响凋亡相关蛋白的表达和PI3K/AKT信号通路的活性。(A) Bax、cyclinD1、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达。(B) p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT的蛋白表达。(C) 定量Bax、cyclinD1、Bcl-2和caspase-3的蛋白质水平。(D) p-PI3K和p-AKT蛋白水平的量化*与对照组相比P<0.05;#与siNC相比,P<0.05。Bax,凋亡调节因子Bax;凋亡调节因子Bcl-2;PI3K,磷脂酰肌醇3-激酶;AKT,蛋白激酶B;siNC,小干扰RNA阴性对照;siRNA,靶向神经上皮细胞转化的小干扰RNA 1。

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