跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2019年3月7日；14（3）：e0212991。
doi:10.1371/journal.pone.0212991。 2019年eCollection。

内皮细胞源GDNF促进HGF诱导的小管生成

中崎Masao Nakasatomi 1, 高桥顺介 1, 托鲁·萨凯里 1, Hidekazu Ikeuchi先生 1, Yoriaki Kaneko先生 1, Keiju Hiromura公司 1, 野岛义久 1, 明仁前岛 1
附属公司

内皮细胞源GDNF促进HGF诱导的小管生成

中崎Masao Nakasatomi等。 公共科学图书馆一号. .

摘要

肾小管发生是指上皮细胞组织成管状结构，是肾脏器官发生以及损伤后肾小管再生过程中的重要步骤。在本研究中，使用体外人类肾小管生成系统检测了调节肾小管形成的内皮细胞衍生因子。当人肾近端小管上皮细胞（RPTEC）在凝胶中培养时，在肝细胞生长因子（HGF）的存在下诱导具有管腔的管状结构。水通道蛋白1定位于这些肾小管结构的顶膜，表明这些结构在形态学上与活体肾小管相当。与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）共培养或在HUVEC-条件培养基（HUVEC-CM）存在下，HGF诱导的小管形成显著增强。在缺乏HGF的情况下，与HUVEC共培养不会诱导管状结构。磷酸受体酪氨酸激酶阵列显示，HUVEC-CM显著增强了HGF诱导的肾小管结构中胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）受体Ret的磷酸化，与没有HUVEC-CM的肾小管状结构相比。HUVECs产生GDNF，RPTECs表达Ret和GDNF家族受体α1（共受体）。添加GDNF显著增强了HGF诱导的小管形成。有趣的是，不仅HGF而且GDNF显著诱导HGF受体Met的磷酸化。这些数据表明，内皮细胞衍生的GDNF增强了HGF的小管生成特性，并可能在肾小管生成过程中的上皮-内皮串扰以及损伤后的小管再生中发挥关键作用。

PubMed免责声明

利益冲突声明

提交人声明，不存在相互竞争的利益。

数字

图1
图1。通过与HUVEC共培养或在HUVEC-衍生条件培养基（HUVEC-CM）中培养，增强HGF诱导的小管形成。
A： 三维凝胶培养系统图解。B： 在不含或含HGF（100 ng/ml）的凝胶中与HUVEC培养5天的RPTEC的形态（放大倍数，×100和×400）。箭头表示管状结构的管腔。C： （左面板）培养9天后HGF诱导的管状结构的周期性酸-希夫（PAS）染色切片。放大倍数，×200。（中面板）HGF诱导的管状结构中AQP1在管腔顶端的定位。AQP1（绿色）、DAPI（蓝色）。棒材，10μm。（右图）AQP1在大鼠肾小管中的定位。AQP1（绿色）。（放大倍数，×400）D：小管形成的定量分析。RPTEC在含有或不含HUVEC的HGF（100 ng/ml）的凝胶中培养5天。数值为平均值±SE（n=6）**P<0.001 E：在不含或不含HGF（100 ng/ml）的凝胶中培养5天的RPTEC的形态（放大倍数，×100）。F： HUVEC-CM对HGF诱导的小管形成的影响。RPTEC在含有或不含HUVEC-CM的HGF（100 ng/ml）的凝胶中培养5天。数值为平均值±SE（n=7）*P<0.05 G：定量分析每个管状结构的分支数。数值为平均值±SE（n=5）。
图2
图2。Ret和GDNF家族配体/受体在RPTEC和HUVEC中的表达。
A： 用RT-PCR（n=3）检测单层培养的RPTEC中Ret、GFR-α1、GFR--α2、GFR-A-3和GFR-β4 mRNA的表达。显示了具有代表性的图像。B： Ret在单层培养5天或凝胶培养8天的RPTEC中的表达。红色（绿色），DAPI（蓝色）。C： 用RT-PCR检测单层培养的HUVECs中GDNF、NRTN、ARTN和PSPN的mRNA表达（n=3）。D： western blot分析检测单层培养的HUVEC（n=4）或RPTEC（n=4）中GDNF的产生。P、 阳性对照（大鼠脑）。
图3
图3。在GDNF存在下促进HGF诱导的小管形成。
A： 在不含或含有HGF（50 ng/ml）和GDNF（100 ng/ml。箭头表示管状结构的管腔。B： 小管形成的定量分析。RPTEC在含有指示因子的凝胶中培养5天。数值为平均值±SE（n=3）*P<0.05。C： 定量分析每个管状结构的分支数。数值为平均值±SE（n=5）。
图4
图4。通过GDNF实现Met的磷酸化。
A： 用western blot分析检测在用HGF（50 ng/ml）、GDNF（50 ng/ml）或HGF加GDNF处理的单层培养的RPTEC中磷酸化Met和总Met蛋白的产生。给出了三个独立实验的代表性结果。B： 磷酸化Met的定量分析标准化为总Met。数值为平均值±标准偏差。*P<0.05，**P<0.01 vs.0 min。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

工具书类

    1. Lubarsky B，Krasnow MA。试管形态发生：制造和成型生物试管。单元格。2003;112(1):19–28. .-公共医学
    1. Affolter M、Bellusci S、Itoh N、Shilo B、Thiery JP、Werb Z。管与非管：通过分支形态发生重塑上皮组织。发育细胞。2003;4(1):11–8. .-公共医学
    1. Hogan BL，Kolodziej PA。器官发生：小管发生的分子机制。《自然》杂志评论遗传学。2002;3(7):513–23. 10.1038/nrg840。-DOI程序-公共医学
    1. Ramasamy SK，Kusumbe AP，Adams RH.内皮细胞衍生信号对组织形态发生的调节。细胞生物学趋势。2015;25(3):148–57. 2016年10月10日/j.tcb.2014.11.007-DOI程序-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Adler M、Ramm S、Hafner M、Muhlich JL、Gottwald EM、Weber E等，《体外筛选肾毒性化合物的定量方法》。《美国肾脏病杂志》。2016;27(4):1015–28. 10.1681/ASN.2015010060-DOI程序-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

赠款和资金

这项工作得到了日本教育、文化、体育、科学和技术部（MEXT）向AM提供的科学研究资助（C）（20590946）和日本教育、文部、体育、科技部向MN提供的青年科学家资助（B）（17K16069）的支持。资助者在研究设计、数据收集和分析、决定出版或编写手稿方面没有任何作用。