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.2019五月;110(5):1665-1675。
DOI:101111/CAS13989. EPUB 2019 3月23日。

缺氧诱导因子-1α和核因子-κB在表皮生长因子受体突变体调控非小细胞肺癌细胞程序性死亡配体1表达中的作用

附属
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缺氧诱导因子-1α和核因子-κB在表皮生长因子受体突变体调控非小细胞肺癌细胞程序性死亡配体1表达中的作用

戎果等。 癌症SCI. .
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摘要

一些驱动基因突变,包括表皮生长因子受体(EGFR),已被报道参与免疫抑制检查点蛋白程序性细胞死亡配体1(PD-L1)的表达调控,但其潜在机制尚不清楚。我们研究了EGFR突变体在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中PD-L1表达调控中的潜在作用和确切机制。检测8种NSCLC细胞系中EGFR信号传导因子的表达,表明PD-L1过表达与AKT和ERK磷酸化之间有明显的相关性,尤其是磷酸化IκBα(p-κBα)和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的蛋白水平升高。流式细胞仪结果显示,EGFR和PD-L1在EGFR突变体中与WT-EGFR细胞相比具有更强的膜共表达。此外,靶向MEK/ERK、PI3K/AKT、mTOR/S6、IκBα和HIF-1α的EGFR通路抑制剂的异位表达或缺失和EGFR通路抑制剂对NSCLC细胞PD-L1、P-κBα和HIF-1α蛋白表达有较强的一致性。用通路抑制剂进一步抑制裸鼠移植瘤生长和携带EGFR突变的NSCLC细胞的p-κBα、HIF-1α和PD-L1的表达。免疫组化结果显示,EGFR突变体NSCLC组织中P-κBα、HIF-1α和PD-L1蛋白水平明显高于携带WT-EGFR的组织。P-κBα或HIF-1α阳性染色的非小细胞肺癌组织与PD-κBα和HIF-1α阴性的组织相比,PD-L1表达更高。我们的研究结果表明,AKT和ERK的磷酸化激活和NF-κB和HIF-1α在NSCLC EGFR突变体中PD-L1表达调控中的潜在相互作用和协同作用。

关键词缺氧诱导因子-1α;NF-κB;表皮生长因子受体;非小细胞肺癌;程序性细胞死亡配体1。

利益冲突陈述

作者声明没有潜在的利益冲突。

数据

图1
图1
表皮生长因子受体的激活(英文)表皮生长因子受体信号通路和程序化细胞死亡配体1局部放电L1)在非小细胞肺癌中的表达(英文)非小细胞肺癌细胞。八人非小细胞肺癌培养细胞系,提取细胞蛋白,进行蛋白质水平的Western blot分析。表皮生长因子受体磷酸化(P)ERK1/2,ERK1/2,P阿克特阿克特P-ⅠκBα、低氧诱导因子1αHIF1α)局部放电L1(顶部面板)。PⅠκBα蛋白条带HIF1α,以及局部放电L1被量化并归一化为内控肌动蛋白(下盘)。M表皮生长因子受体突变体,W,WT表皮生长因子受体. B、用不同荧光蛋白标记的特异性ABS流式细胞术分析空气污染指数-表皮生长因子受体体育课-局部放电用L1)检测细胞表面的表达。表皮生长因子受体局部放电8的L1非小细胞肺癌细胞系。APC,别藻蓝蛋白,PE,藻红蛋白。各自的同种型控制ABS,体育课小鼠IgG1和空气污染指数以小鼠IgG2b作为对照
图2
图2
表皮生长因子受体的激活或抑制作用表皮生长因子受体细胞程序性死亡配体1的信号通路局部放电L1)在非小细胞肺癌细胞中的表达转染WT的H661细胞表皮生长因子受体(重量)表皮生长因子受体表皮生长因子受体突变表达载体(E19dEL、E19del+ + T790M、L85 8R、L85 8R + + T790M)蛋白磷酸化水平明显升高(P<0.05)。ERKp阿克特p- s6,p-ⅠκBα,缺氧诱导因子1αHIF1α)局部放电L1。*P<γ01比WT表皮生长因子受体转染。B,C比SiRNA(SI)表皮生长因子受体转染诱导显著下调表皮生长因子受体蛋白表达水平明显下降,PERKp阿克特,p- s6,p-ⅠκBα,HIF1α,以及局部放电L1分别在H1975(B)和H1299(C)细胞中。d、H1975细胞接受5种途径抑制物2次治疗(1×3×)。二甲基亚砜以处理过的细胞作为对照。以肌动蛋白为内对照,图中P-ⅠκBα的相对蛋白水平,HIF1α,以及局部放电L1。3个实验连续变量的平均值±SD值。*P<γ01和**P<γ05 vs二甲基亚砜群组
图3
图3
表皮生长因子受体抑制剂表皮生长因子受体信号通路抑制肿瘤生长和程序化细胞死亡配体1局部放电L1)在非小细胞肺癌异种移植小鼠模型中的表达建立荷H1975细胞的异种移植瘤小鼠模型并接受4种途径抑制剂(U0126)的治疗,294002,海湾11比7082,以及军中福利社分别为478)。与对照组相比,4个实验组的肿瘤负荷均明显减少(二甲基亚砜B、C.Western blot分析(B)和免疫组化分析(C)显示磷酸化(P)IκBα、缺氧诱导因子1α的蛋白水平。HIF1α)局部放电L1在所有抑制剂组中均有不同程度的下调。军中福利社478和海湾11~7082显示最强的抑制作用。原始放大倍数,400×。*P<γ01和**P<γ05 vs二甲基亚砜群组
图4
图4
磷酸化(P)IκBα、缺氧诱导因子1α的免疫组化染色HIF1α)和程序化细胞死亡配体1局部放电非小细胞肺癌组织中的L1)蛋白。人非小细胞肺癌组织(n==149)免疫组化检测p-ⅠκBα的表达;HIF1α,以及局部放电L1蛋白。P-ⅠκBα(抗-PⅠκBα)的阳性表达HIF1α(反)HIF1α)局部放电L1(反)局部放电L1)分别在细胞质、细胞核和细胞膜中呈棕褐色染色。无AB处理段作为阴性对照。原始放大倍数,200μm(顶板)和400μm(底面板)
图5
图5
程序化细胞死亡配体1的流程图局部放电L1)表皮生长因子受体的表达调控表皮生长因子受体通过下游信使效应磷酸化的突变体(P)阿克特pERK核因子-κB法国试验标准缺氧诱导因子1α(ακB)HIF1α)。IKK,IκB激酶

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