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.2019年1月25日12:233-245。
doi:10.1016/j.omtm.2019.01.006。 eCollection 2019年3月15日。

静脉注射AAV-PHP。编码人酸α-葡萄糖苷酶的B载体对Pompe病小鼠肌肉和中枢神经系统缺陷的修复作用

Jeong-A Lim公司 1, 易海清（Haiqing Yi） 1, 高凤琴 1, 尼娜·拉本 2, Priya S Kishnani公司 1, 孙保东 1
附属公司

静脉注射AAV-PHP。编码人酸α-葡萄糖苷酶的B载体对Pompe病小鼠肌肉和中枢神经系统缺陷的修复作用

Jeong-A Lim公司等。 分子疗法临床开发. .

摘要

蓬贝病是一种严重且常致命的神经肌肉疾病，由溶酶体酶酸性α-葡萄糖苷酶（GAA）缺乏引起。这种疾病的特点是在心脏、骨骼肌和中枢神经系统中积累过量糖原。目前批准的酶替代疗法或实验性腺相关病毒（AAV）介导的基因治疗对中枢神经系统矫正效果甚微。在这里，我们演示了新开发的AAV-PHP。B载体能在GAA基因敲除（GAAKO）小鼠的中枢神经系统和骨骼肌中强烈转导。单次静脉注射AAV-PHP。在巨细胞病毒（CMV）增强子-鸡β-肌动蛋白（CB）启动子控制下表达人GAA的B载体进入2周龄GAAKO小鼠，导致受影响组织中广泛表达GAA。大脑和心脏中的糖原含量降低到野生型水平，AAV治疗使骨骼肌中的糖元含量显著降低。组织学检测显示，AAV治疗小鼠的大脑和脊髓的任何区域都没有可见的糖原。在这项研究中，我们描述了一组行为测试，可以检测到未经治疗的GAAKO小鼠中枢神经系统中大量溶酶体糖原积累相关的早期神经功能缺陷。此外，我们证明该疗法有助于防止这些异常的发生。

关键词：AAV-PHP。B矢量；中枢神经系统；庞贝病；酸性α-葡萄糖苷酶缺乏；基因治疗；糖原储存；神经系统缺陷。

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数字

图1
图1
GAAKO小鼠脑内年龄依赖性糖原积累用希夫试剂（见材料和方法）对不同年龄的GAAKO鼠脑内石蜡包埋的矢状截面进行染色，以检测糖原。这些图像取自以下不同的大脑区域：嗅球（1）、大脑皮层（2和3）、中脑（4）、小脑（5）和后脑（6）。插图中的箭头指向神经胶质细胞（G）和神经元（N）。PAS染色显示，糖原（紫色）在嗅球肾小球层、浦肯野细胞层、小脑白质以及后脑神经元和胶质细胞中进行性积累。ML，分子层；WM，白质；GL，颗粒层；P、 浦肯野细胞。
图2
图2
GAAKO小鼠脊髓中年龄依赖性糖原积累用Schiff试剂染色检测不同年龄GAAKO鼠脊髓石蜡包埋切片中糖原的含量。背角和腹角的图像显示，糖原在胶质细胞（G）和神经元（N）中逐渐积累，尤其是在灰质（GM）中。
图3
图3
AAV-PHP。B-GAA增加GAAKO小鼠AAV-PHP各种组织中的GAA活性并减少糖原。将B-GAA静脉注射到2周龄GAAKO小鼠（AAV）体内，剂量为5×1012vg/kg。注射14周后分析组织。使用年龄匹配的未经治疗的GAAKO小鼠（UT）作为对照。（A） 用hGAA引物qPCR检测AAV基因组拷贝数。该图显示了各种组织中的相对拷贝数。数据表示平均值±SD（n=3）。（B） 使用抗hGAA抗体的Western blot证实GAA在所有检测组织中的表达；β-肌动蛋白作为负荷对照。（C和D）治疗增加了所有组织中的GAA活性（C），降低了糖原水平（D）。CB，小脑；CTX，大脑皮层；四头肌；胃，腓肠肌；UT，未经处理；AAV、AAV-PHP。B-GAA处理的小鼠。数据代表平均值±标准偏差。*p<0.05，***p<0.001。大脑和心脏的WT（n=3）、GAAKO-UT（n=7）和GAAKO-AAV（n=5）；骨骼肌和肝脏的WT（n=4）、GAAKO-UT（n=8）和GAAKO-AAV（n=8）。
图4
图4
AAV-PHP的影响。B-GAA对GAAKO小鼠中枢神经系统中糖原储存的影响未经治疗的WT（GAAKO-UT）和AAV-PHP大脑（A）和脊髓（B）PAS染色切片的代表性图像。B-GAA处理的GAAKO小鼠（GAAKO-AAV）。在嗅球的肾小球层、浦肯野细胞层、小脑白质以及脊髓的神经元和胶质细胞中未发现糖原积聚。L1，第1层；L2-3，第2-3层；G、 胶质细胞；N、 神经元；P、 浦肯野细胞；ML，分子层；GL，颗粒层；WM，白质；GM，灰质。
图5
图5
AAV-PHP的影响。B-GAA对GAAKO小鼠肌肉中糖原存储的研究WT、未经处理（GAAKO-UT）和AAV-PHP肌肉PAS染色切片的代表性图像。B-GAA处理的GAAKO小鼠（GAAKO-AAV）。在心脏和舌头中没有糖原积聚。在腓肠肌中观察到糖原积累减少。黑色箭头指向腓肠肌中的自噬堆积区域。AAV-PHP隔膜中偶尔可见PAS阳性结构。B-GAA处理的小鼠。
图6
图6
AAV-PHP的影响。B-GAA对GAAKO小鼠骨骼肌自噬的研究（A）来自未经处理（GAAKO-UT）和AAV-PHP的单个肌纤维的代表性图像。B-GAA处理的GAAKO小鼠（GAAKO-AAV）；从腓肠肌中分离出纤维，并用自噬标记物LC3（绿色）和溶酶体标记物LAMP1（红色）染色。白色箭头指向未经治疗的GAAKO小鼠肌纤维中典型的自噬堆积。GAAKO-AAV的纤维中可见LC3-阴性和LAMP1-阳性的点状结构；这种图案是野生型纤维的一个常见特征。，测量溶酶体的大小并用图表表示。数据表示平均值±标准偏差。***p<0.001；对于GAAKO-UT光纤，n=30；对于GAAKO-AAV光纤，n=50。（B） 用所示抗体对全肌肉裂解物进行western blot分析的代表性图像。与免疫染色结果一致，AAV-PHP中LC3和p62（SQSTM）（自噬底物）水平显著降低。B-GAA处理的腓肠肌。β-肌动蛋白作为负荷对照。
图7
图7
AAV-PHP的影响。B-GAA对GAAKO小鼠行为缺陷运动协调和平衡的影响通过圆柱体（A；另见视频S1和S2）、光束行走（B；另见录像S3和S4）、旋转木马（C）和足迹测试（D和E）进行评估。与GAAKO-UT小鼠相比，GAAKO-AAV小鼠在圆柱体试验中的单前爪接触百分比、穿越光束的潜伏期以及足迹试验中前爪（红色）和后爪（蓝色）之间的距离显著降低（达到WT水平）。从旋转体上落下的潜伏期增加到WT水平，并且与未经处理的动物相比，经过处理的小鼠的潜伏期明显更高。（F） 通过冯-弗雷试验对感觉缺陷进行评估。GAAKO小鼠的后爪撤退阈值显著增加，但在AAV-PHP感染后恢复到WT水平。B-GAA治疗。（G） 认知障碍通过物体识别记忆测试进行测量。这幅漫画展示了实验设计。与WT小鼠相比，GAAKO小鼠与新物体相处的时间百分比显著降低；GAAKO-AAV小鼠的性能得到改善。所有性能测试均在4个月大时进行。数据表示平均值±标准偏差。每个点表示一只老鼠*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。UT，未经处理；AAV、AAV-PHP。B-GAA处理。
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工具书类

    1. Hirschorn R.，Reuser A.J.McGraw-Hill；2001.糖原贮积病II型：酸性α-葡萄糖苷酶（酸性麦芽糖酶）缺乏：遗传病的代谢和分子基础；第3389–3420页。
    1. van der Ploeg A.T.，Reuser A.J.Pompe病。柳叶刀。2008;372:1342–1353.-公共医学
    1. Pauly D.F.、Fraites T.J.、Toma C.、Bayes H.S.、Huie M.L.、Hirschorn R.、Plotz P.H.、Raben N.、Kessler P.D.、Byrne B.J.酸性α-葡萄糖苷酶病毒衍生前体形式的细胞间转移可纠正遗传性心肌病Pompe病的酶缺乏。嗯，基因疗法。2001;12:527–538.-公共医学
    1. van den Hout H.M.、Hop W.、van Diggelen O.P.、Smeitink J.A.、Smit G.P.、Poll-The B.T.、Bakker H.D.、Loonen M.C.、de Klerk J.B.、Reuser A.J.、van der Ploeg A.T.婴儿庞贝氏病的自然病程：20例原始病例与133例文献对照。儿科。2003;112:332–340.-公共医学
    1. Kishnani P.S.、Hwu W.L.、Mandel H.、Nicololin M.、Yong F.、Corzo D.，婴儿发病蓬贝病自然史研究组：关于婴儿发病蓬帕病自然史的回顾性、多国、多中心研究。《儿科杂志》。2006;148:671–676.-公共医学