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.2019 MAR;17(3):1697—1705。
DOI:1038 92/ET.20187112。 EPUB 2018 12月19日。

miR-183下调对胰腺癌PANC-1细胞生长的抑制作用体外体内增加5-氟尿嘧啶和吉西他滨的药敏性。

附属
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miR-183下调对胰腺癌PANC-1细胞生长的抑制作用体外体内增加5-氟尿嘧啶和吉西他滨的药敏性。

小平杨等。 医学文摘. .
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摘要

胰腺癌(PC)是一种常见的恶性肿瘤,其发病机制尚不清楚。目前,抗PC治疗的疗效是不足的,部分是由于癌细胞的化学抗性。本研究旨在阐明miR-183在人PC细胞对5-氟尿嘧啶和吉西他滨的增殖、凋亡和化疗敏感性中的作用及其相关机制。用microRNA(miR)183抑制剂转染PANC-1细胞,MTT法检测miR-183对细胞增殖的影响。流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布。体内在BALB/c裸鼠中产生PANC-1细胞的异种移植模型,以研究miR183下调对肿瘤生长的影响。此外,通过反转录定量聚合酶链反应和Western blot检测了十号染色体上缺失的磷酸酶和张力素同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白kinase B(Akt)信号通路的成分。最后,用5-氟尿嘧啶或吉西他滨处理PANC-1细胞,转染miR-183抑制剂,MTT法测定细胞活力。结果表明,miR-183的敲除可显著降低PANC-1细胞的增殖和促进细胞凋亡。转染miR-183抑制剂的细胞在G处明显阻滞。相(P<0.01)。miR-183下调导致PI3K、AKT和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达水平显著降低(P<0.001),PANC-1细胞中PTEN和Bcl-2相关蛋白表达显著增加(P<0.001)。敲除miR-183能显著提高PANC-1细胞对5-氟尿嘧啶和吉西他滨的敏感性。这些结果表明miR183的下调可以抑制PC细胞的生长。体外体内通过调节PTEN/PI3K/Akt信号通路,提高细胞对5-氟尿嘧啶和吉西他滨的敏感性。

关键词药物敏感性;微小RN-183;胰腺癌;十号染色体上缺失的磷酸酶和张力素同源物。

数据

图1。
图1。
miR-183敲除抑制胰腺癌细胞增殖。(a)H6C7和PANC-1细胞中miR-183的相对表达。(b)转染后PANC-1细胞中miR-183的相对表达。(c)MTT法测定细胞增殖率。(d)MTT法的代表性图像显示miR183转染对PANC-1细胞增殖的影响(放大倍数×100)。*p<0.01对NC和**p<0.001比NC。miR,microRNA;NC,未转染组;BL,抑制剂对照组;miRNA,miR-183抑制剂组。
图2。
图2。
敲除miR-183促进细胞凋亡,抑制PANC-1细胞周期体外. (a)miR183对PANC-1细胞凋亡的影响。(b)miR183对PANC-1细胞周期的影响。*p<0.01对NC。miR,microRNA;NC,未转染组;BL,抑制剂对照组;miRNA,miR-183抑制剂组。
图3。
图3。
敲除miR-183可延缓肿瘤生长。(a)裸鼠解剖肿瘤的代表性照片。(b)各组肿瘤生长曲线和肿瘤重量。*p<0.01对NC。NC,未转染组;BL,抑制剂对照组;miRNA,microRNA-183抑制剂组。
图4。
图4。
miR183对PANC-1细胞中PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响。用逆转录-定量聚合酶链反应检测(A)PTEN、(B)PI3K、(C)AKT、(D)Bax和(E)Bcl-2的mRNA水平。(f)用Western blot法检测蛋白水平。**P<0.001对NC。十号染色体上缺失的miR、microRNA、PTEN、磷酸酶和张力素同源物;PI3K,磷酸肌醇3激酶;Akt,蛋白激酶B;Bcl-2,B细胞淋巴瘤-2;Bax,Bcl-2相关X蛋白;NC,未转染组;BL,抑制剂对照组;miRNA,miR-183抑制剂组。
图5。
图5。
PTEN是miR-183的直接靶点。(a)PTEN mRNA的3’-UTR被观察到含有与miR183互补的序列,使用米兰达。(b)miR-183的过度表达显著抑制了含有PTEN的WT 3’-UTR的记者的荧光素酶活性,但不包含含有PTEN突变型MT 3’-UTR的记者。*P<0.05对NC。十号染色体缺失的PTEN、磷酸酶和张力蛋白同源物;miR,microRNA;UTR,非翻译区;野生型;MT,突变型;LUC/R- LUC,荧光素酶/雷尼利亚荧光素酶,NC,抑制剂对照转染组,对照组,未转染组。
图6。
图6。
敲除miR-183增加PANC-1细胞对5-氟尿嘧啶和吉西他滨的化疗敏感性体外. (a)5-氟尿嘧啶对转染后PANC-1细胞增殖的影响。(b)吉西他滨对转染后PANC-1细胞增殖的影响。*P<0.05对NC。miR,microRNA;NC,未转染组;BL,抑制剂对照组;miRNA,miR-183抑制剂组。

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