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.2019年3月;17(3):1649-1655。
doi:10.3892/etm.2019.7147。 Epub 2019年1月2日。

腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因治疗联合更昔洛韦诱导肝癌细胞凋亡

附属公司

腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因治疗联合更昔洛韦诱导肝癌细胞凋亡

张海涛等。 实验治疗学. 2019年3月.

摘要

本研究旨在检测腺病毒(ADV)介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(ADV-TK)联合更昔洛韦(GCV)对肝细胞癌患者组织的凋亡作用,为该基因治疗方案的开发提供理论依据。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法检测细胞凋亡,并比较实验组和对照组的细胞凋亡指数;和对照组。此外,用免疫组织化学染色法检测病理标本中caspase-3、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(Bax)和核因子-κB的蛋白表达水平。Bax/Bcl-2比值与细胞色素释放c(c)用western blot分析检测。结果表明,与对照组相比,ADV-TK和GCV联合治疗显著增加了凋亡细胞的数量(P<0.05)。免疫组织学分析显示,ADV-TK和GCV治疗显著增加caspase-3阳性细胞的数量,降低Bax/Bcl-2比率和NF-κB表达水平,促进细胞色素的释放c(c)与对照组比较(P<0.01)。总之,本研究结果表明,ADV-TK和GCV联合治疗通过凋亡信号通路发挥作用。

关键词:凋亡机制;基因治疗;肝细胞癌。

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数字

图1。
图1。
腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶和更昔洛韦联合治疗可诱导肝细胞凋亡。(A) TUNEL分析显示凋亡阳性肝细胞呈绿色染色。蓝色DAPI染色标记完整的DNA(放大倍数,×400)。(B) 计算凋亡指数。数据表示为平均值±标准偏差。TUNEL,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记;DAPI,4′6-二氨基-2-苯基吲哚。
图2。
图2。
通过免疫组织化学染色和蛋白质印迹分析检测肝细胞癌患者组织中凋亡相关蛋白的表达。(A) ADV-TK和GCV联合治疗组和对照组中阳性染色细胞的图像及其定位。对ADV-TK和GCV联合治疗组和对照组进行(B)caspase-3、(C)Bax/Bcl-2比值和(D)NF-κB分析。(E) western blot分析的代表性图像。(F) 相对蛋白表达分析直方图。数据表示为平均值±标准偏差**与对照组相比,P<0.01。腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶;GCV,更昔洛韦;核因子-κB;Bcl-2、B细胞淋巴瘤;Bax,B细胞淋巴瘤相关蛋白X;细胞色素Cc(c); 细胞,胞浆;线粒体。

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