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.2019年2月1日1:11:1177-1187。
doi:10.2147/CMAR。S181058。 2019年eCollection。

miR-600通过下调METTL3的表达抑制肺癌

Wenwen Wei（魏文文） 1, 霍保生 2, 石秀兰 1
附属公司

miR-600通过下调METTL3的表达抑制肺癌

Wenwen Wei（魏文文）等。 癌症管理研究. .

摘要

背景：甲基转移酶样3（METTL3）是一种RNA甲基转移酶，通过N6-甲基腺苷（m6A） 修改。

方法：为了寻找新的肺癌治疗策略并阐明这种现象的机制，我们对人类肺癌细胞系A549和H1299进行治疗，以研究METTL3对肺癌的影响。

结果：我们观察到METTL3的敲低抑制了A549和H1299细胞的存活和增殖。与对照细胞相比，两种细胞系的迁移和增殖均显著减少，并诱导细胞凋亡。METTL3的miRNA转染增加了A549和H1299细胞的Bax/Bcl-2比率，进一步证实了这些结果，这表明线粒体凋亡途径被触发。PI3K/Akt通路与细胞生长和存活有关，我们还观察到METTL3的敲除改变了PI3K信号通路成员蛋白的表达和磷酸化。此外，我们的研究结果表明，miR-600抑制了METTL3的表达，并逆转了METTL3对NSCLC进展的积极作用，表明miR-600/METTL3途径在NSCLC中存在。

结论：这些数据表明，miR-600通过下调METTL3的表达来抑制肺癌，而METTL4的敲除可能是一种新的肺癌治疗策略。

关键词：A549；H1299；METTL3；PI3K途径；细胞凋亡；肺癌；miRNA。

PubMed免责声明

利益冲突声明

披露作者报告在这项工作中没有利益冲突。

数字

图1
图1
miR-600抑制METTL3的表达。注意事项：(A类)转染METTL3-特异性siRNA（METTL3-KD组）的A549和H1299细胞中METTL3的mRNA表达与阴性siRNA（NC组）相比显著降低。(B类)与NC组相比，METTL3-KD组的A549和H1299细胞中METTL3蛋白水平也降低。(C类)METTL3和miR-600的预测结合位点。(天)进行荧光素酶报告基因分析以确认METTL3和miR-600的结合。(E类)用qPCR检测METTL3 mRNA水平。(F类)Western blot检测METTL3蛋白水平。(G公司)带强度的值表示根据GAPDH标准化的每个带的密度测定估计值。此图中的实验均为一式三份(*P（P）<0.05).
图2
图2
m6RNA甲基化水平降低。注意事项：m6在A549中，METTL3-KD组总RNA的含量比NC组显著降低(A类)和H1299(B类)单元格。此图中的实验均为一式三份(*P（P）<0.05).
图3
图3
METTL3的敲除降低肺癌细胞的生存能力。注意事项：(A类)qPCR结果表明，敲低METTL3并不影响A549和H1299细胞中miR600的表达。(B类)用CCK8检测转染METTL3特异性siRNA的A549（左）和H1299（右）细胞的增殖曲线。(C、 D类)平板克隆性测定。此图中的实验均为一式三份(*P（P）<0.05 vs NC；#P（P）与METTL3-KD相比<0.05）。
图4
图4
肺癌细胞的Transwell分析。注意事项：METTL3基因敲除抑制A549的侵袭(A类)和H1299(B类)单元格。此图中的实验均为一式三份(*P（P）<0.05).
图5
图5
METTL3基因敲除诱导肺癌细胞凋亡。注意事项：METTL3基因敲除促进A549细胞凋亡(A类)和H1299(B类)单元格。(C类)Western blot分析凋亡相关蛋白的表达，包括BCL2、活性caspase 3、Bax、pro-和cleaved-PARP。GAPDH起到了装载控制的作用。(天)带强度的值表示根据GAPDH标准化的每个带的密度测定估计值(*P（P）<0.05).缩写：PI，碘化丙啶。
图6
图6
METTL3的敲除通过AKT信号通路诱导细胞凋亡。注意事项：(A类)Western blot分析AKT通路相关蛋白的表达。(B类)带强度的值表示根据GAPDH标准化的每个带的密度测定估计值。此图中的实验均为一式三份(*P（P）<0.05).
图7
图7
METTL3基因敲除降低了其靶基因的表达。注意事项：(A类)Western blot分析EGFR、TAZ和DNMT3A蛋白的表达。(B类)带强度的值表示根据GAPDH标准化的每个带的密度测定估计值。此图中的实验均为一式三份(*P（P）<0.05).缩写：表皮生长因子受体。
图8
图8
miR-600逆转了外源性METTL3对肺癌细胞进展的积极作用。注意事项：A549的增殖(A类)和H1299(B类)细胞经CCK8检测证实。(C–F类)通过Transwell分析确认METTL3和METTL3+miR-600细胞中的细胞侵袭。此图中的实验均为一式三份(*P（P）与NC细胞相比<0.05；#P（P）<0.05 vs METTL3过度表达细胞）。
图9
图9
miR-600通过抑制人肺癌中METTL3的表达抑制细胞生长。注意事项：(A类)CCK8法证实A549细胞增殖。(B、 C类)进行Transwell测定以确认miR-600和miR-600+METTL3-KD细胞中的细胞侵袭。(天)Western blot分析蛋白质表达水平。带强度的值表示根据GAPDH标准化的每个带的密度测定估计值。此图中的实验均为一式三份(*P（P）<0.05). (E类)描述miR-600通过抑制人肺癌中METTL3表达抑制细胞生长的机制的模型。缩写：表皮生长因子受体。
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