Establishment and Characterization of Four Novel Thyroid Cancer Cell Lines and PDX Models Expressing the RET/PTC1 Rearrangement, BRAFV600E, or RASQ61R as Drivers

doi:10.1158/1541-7786.MCR-18-1026

.2019年5月；17(5):1036-1048.

doi:10.1158/1541-7786.MCR-18-1026。 Epub 2019年2月7日。

以RET/PTC1重排、BRAFV600E或RASQ61R为驱动因子的四种新型甲状腺癌细胞系和PDX模型的建立与鉴定

附属公司

¹科罗拉多州奥罗拉市科罗拉多大学安舒茨医学院内分泌、糖尿病和代谢科医学系。rebecca.schweppe@ucdenver.edu。
²科罗拉多大学癌症中心，科罗拉多大学安舒茨医学院，科罗拉多州奥罗拉。
^三科罗拉多州奥罗拉市科罗拉多大学安舒茨医学院内分泌、糖尿病和代谢科医学系。
⁴科罗拉多州奥罗拉市科罗拉多大学安舒茨医学院肿瘤内科。
⁵科罗拉多州奥罗拉市科罗拉多大学安舒茨医学院病理学系。
⁶科罗拉多州奥罗拉市科罗拉多大学安舒茨医学院外科。
⁷科罗拉多州奥罗拉市科罗拉多大学安舒茨医学校区斯卡格斯药学和药物科学学院药物科学系。
⁸纽约州纽约市斯隆-凯特琳纪念癌症中心人类肿瘤和发病机制项目。

PMID： 30733375
预防性维修识别码： PMC6711777型
内政部： 10.1158/11541-7786毫米口径-18-1026毫米

以RET/PTC1重排、BRAFV600E或RASQ61R为驱动因子的四种新型甲状腺癌细胞系和PDX模型的建立与鉴定

丽贝卡·施韦佩等。摩尔癌症研究. 2019年5月.

.2019年5月；17(5):1036-1048.

doi:10.1158/1541-7786.MCR-18-1026。 Epub 2019年2月7日。

附属公司

¹科罗拉多州奥罗拉市科罗拉多大学安舒茨医学院内分泌、糖尿病和代谢科医学系。rebecca.schweppe@ucdenver.edu。
²科罗拉多大学癌症中心，科罗拉多大学安舒茨医学院，科罗拉多州奥罗拉。
^三科罗拉多州奥罗拉市科罗拉多大学安舒茨医学院内分泌、糖尿病和代谢科医学系。
⁴科罗拉多州奥罗拉市科罗拉多大学安舒茨医学院肿瘤内科。
⁵科罗拉多州奥罗拉市科罗拉多大学安舒茨医学院病理学系。
⁶科罗拉多大学安舒茨医学院外科，科罗拉多州奥罗拉。
⁷科罗拉多州奥罗拉市科罗拉多大学安舒茨医学校区斯卡格斯药学和药物科学学院药物科学系。
⁸纽约州纽约市斯隆-凯特琳纪念癌症中心人类肿瘤和发病机制项目。

PMID： 30733375
预防性维修识别码： PMC6711777型
内政部： 10.1158/1541-7786.MCR-18-1026

摘要

肿瘤细胞系是研究肿瘤进展和治疗反应的关键模型。2008年，我们发现大约50%的甲状腺癌细胞系是多余的或不是甲状腺癌来源。因此，我们使用在体外和饲养细胞方法，并对这些模型进行了描述在体外和体内我们开发了四种甲状腺癌细胞系，其中两种来源于2名不同的乳头状甲状腺癌（PTC）胸腔积液患者、CUTC5和CUTC48；一个来自间变性甲状腺癌（ATC）患者，CUTC60；其中一个来自滤泡性甲状腺癌（FTC）患者CUTC61。还开发了一个PDX模型（CUTC60-PDX）。短串联重复序列（STR）基因分型显示，每个细胞系和PDX都是唯一的，并且与原始患者组织相匹配。CUTC5和CUTC60细胞有BRAF（V600E）突变，CUTC48细胞株表达RET/PTC1重排，CUTC61细胞有HRAS（Q61R）突变。中到高水平的PAX8系列和可变级别NKX2-1型在每个细胞系和PDX中检测到。CUTC5和CUTC60细胞系在原位和侧面异种移植物小鼠模型中形成肿瘤。含义：我们已经建立了第二个表达RET/PTC1的PTC衍生细胞系，这是研究RET信号的一个重大进展。我们进一步将所有细胞系与原始患者联系起来，提供了一套新的、经验证的甲状腺癌细胞系和PDX模型，用于研究晚期甲状腺癌。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有潜在的利益冲突。

数字

图1。 — **图1 CUTC细胞系的甲状腺特异性基因表达、形态和生长特征。**
A）PAX8和*NKX2-1型*通过qRT-PCR测定。PAX8的mRNA表达（pg）或*NKX2-1型*显示了标准化为18s rRNA（ng）。B）放大10倍的CUTC细胞系的亮场图像。图中显示了CUTC5 p17、CUTC48 p14、CUTC60 p28和CUTC61 p20。C）通过每天24小时连续96小时的ViCell计数来测定CUTC细胞系的生长。所示数据为三次独立实验的平均+/-SEM。根据1C的生长数据确定加倍时间。D）软琼脂中CUTC5和CUTC60细胞系的生长。显示电镀的电池数量。16天后，使用图像J对菌落形成进行量化。结果显示的是一次实验的平均+/-标准偏差，该实验分为3到4个技术重复。CUTC48和CUTC61细胞在软琼脂中没有形成菌落。

图2。 — **图2.的表达式*RET/PTC1*在CUTC48单元中。**
A）qRT-PCR用于筛选是否存在*RET/PTC公司*重新安排。外显子12-13与外显子10-11的表达*房地产税*如图所示。外显子12-13与10-11的高表达表明*RET/PTC1*TPC1细胞作为阳性对照，HTh74细胞作为阴性对照。显示的数值是pg RET mRNA表达归一化为ng rRNA。B） *RET/PTC1*使用融合位点两侧的引物通过qRT-PCR评估表达。mRNA水平按2A标准化。C）用TPC1细胞作为阳性对照，HTh74细胞作为阴性对照，肺癌细胞系Calu6、DMS053和H889通过Western blotting评估RET/PTC1蛋白表达，以比较全长RET表达。

图3。 — **图3..CUTC5体内肿瘤生长。**
A）将50万个CUTC5细胞注射到SCID和NRG小鼠的右侧甲状腺内，43天后评估肿瘤体积。结果显示SCID和NRG小鼠肿瘤最终体积的平均+/-SD。B）图示原位原发肿瘤的H&E染色代表性图像。气管用（T）表示，箭头表示侵犯。C）图示肺转移瘤的H&E染色组织学分析（箭头所示）。如图所示，图像以4倍、10倍或20倍显示。D）将CUTC5细胞注射到NSG小鼠侧翼，在42天内测量肿瘤生长，并计算最终肿瘤体积。原发肿瘤的代表性图像(E）和**（F）**肺转移。在三分之三的小鼠中观察到转移。

图4。 — **图4.CUTC60肿瘤生长体内.**
将CUTC60细胞（500000）直接注射到裸鼠的右甲状腺中。A）通过28天的每周生物发光成像监测肿瘤生长，并计算最终肿瘤体积。进行组织学分析，并对原发肿瘤进行代表性H&E染色**（B）**和肺转移（箭头所示）**（C）**如图所示。气管（T）也显示出来。D）将CUTC60细胞注射到裸鼠侧翼，通过每周卡尺测量监测肿瘤生长，持续42天。显示最终肿瘤体积。E）侧翼肿瘤的典型H&E染色图像如图所示。在CUTC60侧翼模型中未观察到肺转移。

图5。 — **图5 CUTC60患者衍生异种移植物（PDX）模型的生成。**
肿瘤组织（3 mm^三)通过套管针注射将患者60的骨髓直接植入NSG小鼠的两侧。肿瘤在mF3代时传至裸鼠的侧翼。A）每周测量CUTC60-PDX的生长，持续7周。最终肿瘤体积是10个肿瘤的平均+/-SD。患者肿瘤的代表性图像**（B）**和PDX侧翼肿瘤**（C）**如图所示。

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