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.2019年2月7日；38(1):61.
doi:10.1186/s13046-019-1054-x。

突变型p53和Egr-1激活的组织蛋白酶L促进人非小细胞肺癌电离辐射诱导的EMT

王文娟 1 2, 熊亚杰 1, 鑫源鼎 三 4, 龙王 1, 赵一凡 1, 姚飞 1, 朱颖（音） 1, 小沈 1, 《彩虹谭》 5 6, 梁忠勤 7
附属公司

突变型p53和Egr-1激活的组织蛋白酶L促进人非小细胞肺癌电离辐射诱导的EMT

王文娟等。 实验临床癌症研究杂志. .

摘要

背景：电离辐射（IR）是癌症的主要临床治疗方法之一，尽管它意外地增加了非小细胞肺癌（NSCLC）的上皮-间质转化（EMT）。这种作用的细胞和分子机制尚不完全清楚。

方法：我们使用NSCLC细胞系和78例NSCLC患者的肿瘤标本来评估p53、组织蛋白酶L（CTSL）和EMT表型变化。还利用异种移植模型检测突变型p53（mut-p53）和CTSL在调节非小细胞肺癌IR诱导的EMT中的作用。

结果：具有突变p53（mut-p53）的人非小细胞肺癌组织中CTSL的表达显著增加，p53突变与非小细胞癌患者的转移呈正相关。在人非小细胞肺癌细胞系中，转染各种p53慢病毒载体的H1299细胞中，mut-p53主要通过EMT促进IR下细胞的侵袭和运动。这一EMT过程是通过升高核内CTSL诱导的，CTSL由依赖早期生长反应蛋白-1（Egr-1）激活的mut-p53调节。在皮下肿瘤异种移植模型中，IR通过增加其下游蛋白CTSL的表达和核转换，在mut-p53存在下促进了癌细胞的EMT。

结论：综上所述，这些数据揭示了mut-p53/Egr-1/CTSL轴在调节负责IR诱导EMT的信号通路中的作用。

关键词：组织蛋白酶L；上皮-间充质转化；电离辐射；非小细胞肺癌；p53突变。

PubMed免责声明

利益冲突声明

道德批准和参与同意

根据《赫尔辛基宣言》获得所有患者的知情同意，研究得到江苏大学伦理委员会的决定批准。所描述的动物研究得到了苏州大学伦理委员会的批准。

出版同意书

所有作者都同意这份手稿并同意出版。

相互竞争的利益

提交人声明他们没有相互竞争的利益。

出版商备注

Springer Nature在公布的地图和机构关联中的管辖权主张方面保持中立。

数字

图1
图1
第53页突变促进了非小细胞肺癌的转移，缩短了患者的生存时间。一)的突变频率第53页78个NSCLC组织中的密码子。突变事件第53页密码子b条)和代表性突变c（c）)显示了。d日分析第53页肺癌转移（淋巴结转移和远处器官转移）和非转移组织的突变。e（电子）的相关性第53页(野生型p53基因和mut-p53型)显示有无放疗和非小细胞肺癌患者的总生存时间。使用Kaplan-Meier方法构建生存曲线，并通过log-rank检验进行分析。*，P（P） < 0.05
图2
图2
IR促进细胞运动和EMTmut-p53型体外试验。一进行伤口愈合试验以测试细胞的迁移能力。伤口被放置在三个细胞的汇合层中第53页状态细胞系是否处于IR状态。时间0和24之后的照片 显示h（左侧面板）。红色条，100 微米。右面板显示了伤口宽度的距离。b条的作用第53页在H1299细胞中通过transwell实验证明了IR诱导的侵袭状态（左面板）。红色条，100 微米。显示了迁移细胞的数量（右侧面板）。c（c）用指骨肽染色细胞以检测F-肌动蛋白应激纤维。图像是在蔡司荧光显微镜上拍摄的。红色条，10 微米。d日IR对三种动物E-cadherin和N-cadherin表达的影响第53页通过western-blotting分析确定细胞系的状态。e（电子）免疫荧光法测定EMT相关蛋白的定位。E-钙粘蛋白、N-cadherin、Vimentin和DAPI的共焦显微镜图像为“分离”或“合并”图像。红色条，10 微米。（f）PCR分析了三个受试者EMT相关标志物Zeb1、蜗牛和扭转1的mRNA水平第53页状态细胞系是否处于IR状态。所示结果是三个相同实验的代表*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01***P（P） < 0.001，学生t检验
图3
图3
CTSL关键性地介导了IR-诱导的EMTmut-p53型.一通过western blotting检测三个样本中CTSL和EMT相关转录因子的水平第53页IR下的状态单元格行与否（左侧面板）。显示了相应的蛋白质表达量（右侧面板）。b条细胞通过ChIP分析进行检测，有无IR处理。招聘第53页显示CTSL启动子（上面板）。显示了CTSL启动子表达的相应数量（下面板）。c（c）CTSL在三种动物中的表达和细胞内定位第53页免疫荧光法检测IR下或非IR下细胞系的状态。红色条，10 微米d日)通过western blotting分析，CTSL siRNA和IR对Flag-p53（R273H）H1299细胞中EMT-相关Zeb1和蜗牛蛋白表达的影响。e（电子）)用PCR方法分析带有或不带有IR的Flag-p53（R273H）H1299细胞中Zeb1和蜗牛的mRNA水平。（f）)通过western blotting分析CTSL在各种肺癌细胞中的表达，这些肺癌细胞中相对常见的突变点为175、248和273第53页数据显示为平均值 ± S.D.公司。，n个 = 3, *P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01, ***P（P） < 0.001，学生t检验
图4
图4
这个mut-p53型通过在IR下激活Egr-1调节CTSL的转录。一在不同时间点（0、6、12、24）用/不用IR处理细胞 h） ●●●●。采用western blotting法检测CTSL和Egr-1水平。显示了相应的蛋白质表达量（下面板）。b条如上所述处理细胞并采集用于ChIP分析，以验证Egr-1和CTSL启动子在IR下/或非IR下的相互作用（上图）。显示了CTSL启动子表达的相应数量（下面板）。c（c）分析ChIP分析以验证第53页Egr-1的启动子第53页有或无IR处理的状态细胞系。招聘第53页显示Egr-1启动子（上面板）。显示Egr-1启动子表达的相应数量（下面板）。d日在IR下用三个Egr-1 si-RNA序列转染标记p53（R273H）细胞，并用所示抗体通过western blotting分析总细胞裂解物中的Egr-1和CTSL。e（电子）在IR下用Egr-1 si-RNA序列转染Flag-p53（R273H）细胞，并采集用于ChIP分析，以验证两者之间的相互作用第53页CTSL的促进者（上面板）。显示了CTSL启动子表达的相应数量（下面板）。数据显示为平均值 ± S.D.公司。，n个 = 3, *P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01, ***P（P） < 0.001，学生t检验
图5
图5
CTSL与第53页NSCLC患者的突变和肿瘤恶性程度。一CTSL和EMT标记的表达在mut-p53型非小细胞肺癌组织(n个 = 35）和野生型p53基因非小细胞肺癌组织(n个 = 43）采用免疫组织化学方法（左侧显示有代表性的图像）。显示了相应的蛋白质表达量（右侧面板）。b条分别从野生型p53基因组和突变型p53CTSL、Egr-1和EMT标记物的western blotting分析组（左侧面板）。蛋白质的带强度被量化，相对变化为mut-p53型与。野生型p53基因显示（右侧面板）。c（c）CTSL表达的Western blotting分析在肿瘤组织和配对邻近组织之间存在差异。d日CTSL在鳞状细胞癌中的表达随着恶性程度的增加而逐渐增加，但在腺癌中的免疫印迹分析结果不明显。e（电子）免疫组化染色检测CTSL在Ⅰ～Ⅳ级恶性肺癌组织中的表达（左图为代表性图像）。CTSL与恶性分级之间的相关性如右图所示。数据显示为平均值 ± S.D.，编号 = 3中*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01, ***P（P） < 0.001，学生t检验
图6
图6
CTSL促进IR-induced EMTmut-p53型体内试验。一和b条)无论照射与否，使用Flag、Flag-p53和Flag-p52（R273H）细胞建立皮下肿瘤异种移植模型。测量肿瘤体积，每2天称重一次裸鼠，直至小鼠死亡。分别显示了曲线。c（c）收集并处理肿瘤进行E-cadherin、N-cadherin和CTSL的Western blot分析（左面板）。显示了相应的蛋白质表达量（右侧面板）。d日免疫组织化学染色验证CTSL和波形蛋白在肿瘤组织中的表达和细胞定位。数据显示为平均值 ± 标准偏差，n = 3, *P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01, ***P（P） < 0.001，学生t检验
图7
图7
CTSL通过细胞因子促进IR诱导的肺癌EMT的机制示意图mut-p53型/Egr-1信号通路。仅变异第53页在IR下刺激Egr-1的表达。然后，突变第53页和Egr-1协同刺激CTSL转录。最后，核CTSL直接上调EMT基因以增强肿瘤的侵袭和转移mut-p53型肺癌细胞
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参考文献

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