Tripartite motif-containing 14 (TRIM14) promotes epithelial-mesenchymal transition via ZEB2 in glioblastoma cells

doi:10.1186/s13046-019-1070-x

.2019年2月6日；38(1):57.

doi:10.1186/s13046-019-1070-x。

含三重基序14（TRIM14）通过ZEB2促进胶质母细胞瘤细胞的上皮-间质转化

双峰¹, 蔡晓敏², 李阳阳², 晓光健¹, 张林欣（Linxin Zhang）¹, 李斌（Bin Li）^三

附属公司

¹南京中医药大学附属第三医院脑病科，江苏南京。
²南京医科大学第一附属医院神经外科，江苏南京。
^三南京中医药大学附属第三医院脑病科，江苏南京。libin_njszyy@163.com。

PMID： 30728039
预防性维修识别码：项目经理C6364431
内政部： 10.1186/s13046-019-1070-x

含有14的三元基序（TRIM14）通过ZEB2促进胶质母细胞瘤细胞的上皮-间充质转化

双峰等。实验临床癌症研究杂志. 2019.

.2019年2月6日；38(1):57.

doi:10.1186/s13046-019-1070-x。

作者

双峰¹, 蔡晓敏², 李阳阳², 小光健¹, 张林欣（Linxin Zhang）¹, 李斌（Bin Li）^三

附属公司

¹南京中医药大学附属第三医院脑病科，江苏南京。
²南京医科大学第一附属医院神经外科，江苏南京。
^三南京中医药大学附属第三医院脑病科，江苏南京。libin_njszyy@163.com。

PMID： 30728039
预防性维修识别码：第364431页
内政部： 10.1186/s13046-019-1070-x

缩回

退缩提示：含有三部分基序14（TRIM14）通过ZEB2促进胶质母细胞瘤细胞的上皮-间质转化。
冯S、蔡X、李Y、建X、张L、李B。 Feng S等人。《实验临床癌症研究杂志》2023年3月28日；42(1):74. doi:10.1186/s13046-023-02646-9。《2023年实验与临床癌症研究杂志》。 PMID：36978192 免费PMC文章。没有可用的摘要。

摘要

背景：据报道，三部分基序控制（TRIM）蛋白家族的几个成员是肿瘤发生的重要调节因子。最近的研究表明TRIM 14在多种人类癌症中具有致癌作用；然而，该蛋白在胶质母细胞瘤中的重要性仍有待阐明。

方法：在一系列数据库中分析TRIM14的表达水平，并在多种胶质母细胞瘤细胞系中进行检测。将两个独立的TRIM14 shRNA转染到LN229和U251细胞中，并证实了TRIM14缺失的效果。采用Transwell试验和伤口愈合试验评估TRIM14缺失对胶质母细胞瘤细胞侵袭和迁移的影响。通过Western blotting筛选TRIM14的下游基因。此外，还进行了稳定性分析、泛素化分析和原位异种移植物研究，以研究TRIM14的作用及其与下游基因的关系。获取人胶质母细胞瘤组织，进行免疫组织化学染色，以确认TRIM14的临床意义。

结果：在这项研究中，我们发现TRIM14在人类胶质母细胞瘤标本和细胞系中上调，并与胶质母细胞癌进展和患者生存时间缩短相关。功能实验表明，TRIM14表达降低可减少胶质母细胞瘤细胞的侵袭和迁移。此外，我们确定锌指E-box结合同源盒2（ZEB2）是一种参与上皮-间质转化的转录因子，是TRIM14的下游靶点。进一步研究表明，TRIM14失活显著促进了ZEB2泛素化和蛋白酶体降解，从而导致侵袭和迁移。我们的研究结果为TRIM14在肿瘤侵袭中的特定生物学作用提供了见解。

结论：我们的研究结果揭示了TRIM14在肿瘤侵袭中的特定生物学作用，并提示以TRIM14/ZEB2轴为靶点可能是阻断胶质母细胞瘤的一种新的治疗方法。

关键词：胶质母细胞瘤；入侵；TRIM14；泛化；ZEB2。

PubMed免责声明

利益冲突声明

道德批准和参与同意

所有动物手术均在南京医科大学机构审查委员会和伦理委员会的指导下进行。该研究得到了中国伦理审查委员会的批准，并获得了每位患者的知情同意书。

出版同意书

参与研究的所有患者都同意公布他们的个人数据。

竞争性利益

作者声明，他们没有相互竞争的利益。

出版商备注

Springer Nature在公布的地图和机构关联中的管辖权主张方面保持中立。

数字

图1
TRIM14在GBM组织和细胞系中增加。一用qRT-PCR分析比较正常脑组织（NBT）和不同级别胶质母细胞瘤标本的TRIM14水平*第页 < 0.05; **第页 < 0.01; ***第页 < 0.001.b条不同级别胶质母细胞瘤组织和正常脑组织中TRIM14蛋白表达的Western blot分析。**c（c）**对6个GBM样本和匹配的正常组织中的TRIM14蛋白进行Western blotting分析。(N个 = 正常组织，T =GBM）(d日)qPCR分析TRIM14在6个胶质瘤细胞系和NHA对照中的表达。6个细胞系显示TRIM14蛋白水平显著增加*第页 < 0.05; ***第页 < 0.001,n个 = 3个实验。**e（电子）**用免疫组织化学方法检测TRIM14在江苏省医院正常脑组织和胶质瘤组织（Ⅰ～Ⅳ级）中的表达

图2
TRIM14通过EMT增加GBM细胞的迁移/侵袭。一Western blot分析用shTRIM14–1、shTRIM14-2或对照shRNA转导的LN229和U251细胞中的TRIM14、N-钙粘蛋白、E-钙粘蛋白和波形蛋白。β-肌动蛋白水平证实了等负荷。b条使用转染有指示shRNA的LN229和U251细胞的跨孔侵袭试验的代表性图像。显示了跨孔侵袭分析的量化***第页 < 0.001;n个 = 3实验。**c（c）**-d日使用带有指示shRNA的LN229和U251细胞进行伤口愈合试验的代表性图像。显示伤口愈合试验定量***第页 < 0.001,n个 = 3个实验。**e（电子）**-如果使用带有指示shRNA的LN229和U251细胞进行3D球体BME细胞侵袭检测的代表性图像。显示3D球体BME-细胞侵袭检测定量***第页 < 0.001,n个 = 3个实验

图3
TRIM14过表达通过EMT促进胶质瘤细胞的迁移/侵袭。一用载体或TRIM14转导的HS683和U87细胞中TRIM14、N-cadherin、E-cadherin和Vimentin的Western blot分析。β-肌动蛋白水平证实了等负荷。b条使用转染载体或TRIM14的HS683和U87细胞进行跨孔侵袭检测的代表性图像。显示了跨井侵入分析的定量***第页 < 0.001;n个 = 3实验。**c（c）**-d日使用带有载体或TRIM14的HS683和U87细胞的伤口愈合测定的代表性图像。显示了伤口愈合试验的量化***第页 < 0.001,n个 = 3个实验。**e（电子）**-如果使用带有载体或TRIM14的HS683和U87细胞进行3D球形BME细胞侵袭检测的代表性图像。显示3D球体BME细胞侵袭检测的量化***第页 < 0.001,n个 = 3个实验

图4
ZEB2是TRIM14的下游目标。一对转染shTRIM14–1、shTRIM14-2或对照shRNA的LN229和U251细胞中的TRIM14、EMT相关生物标记（Snail1、Twist1、ZEB1、ZEB2和SLUG）和β-actin进行Western blot分析。b条Western blot分析用所示质粒转导的LN229和U251细胞中的TRIM14、N-钙粘蛋白、E-cadherin、波形蛋白和β-actin。**c（c）**使用用所指示的质粒转染的LN229和U251细胞的transwell侵入测定的代表性图像。显示了跨井侵入分析的定量***第页 < 0.001;n个 = 3实验。d日使用带有所示质粒的LN229和U251细胞进行伤口愈合试验的代表性图像。显示了伤口愈合试验的量化***第页 < 0.001,n个 = 3个实验。**e（电子）**使用带有所示质粒的LN229和U251细胞进行3D球形BME细胞侵袭检测的代表性图像。显示3D球体BME细胞侵袭检测的量化***第页 < 0.001,n个 = 3个实验

图5
ZEB2参与TRIM14的功能。一对转染载体或TRIM14的HS683和U87细胞中的TRIM14、EMT相关生物标记（Snail1、Twist1、ZEB1、ZEB2和SLUG）和β-actin进行Western blot分析。b条用所述质粒转导的HS683和U87细胞中TRIM14、N-钙粘蛋白、E-钙粘蛋白、波形蛋白和β-肌动蛋白的蛋白质印迹分析。**c（c）**使用转染了所示质粒的HS683和U87细胞进行跨孔侵袭试验的代表性图像。显示了跨井侵入分析的定量***第页 < 0.001;n个 = 3实验。d日使用HS683和U87细胞及所示质粒进行伤口愈合试验的代表性图像。显示了伤口愈合试验的量化***第页 < 0.001,n个 = 3个实验。**e（电子）**使用带有所示质粒的HS683和U87细胞进行3D球形BME细胞侵袭检测的代表性图像。显示3D球体BME细胞侵袭检测的量化***第页 < 0.001,n个 = 3个实验

图6
TRIM14的消耗增加了ZEB2多泛素化和蛋白酶体降解。一通过shTRIM14识别TRIM14后，qTR-PCR分析LN229和U251细胞中TRIM14和ZEB2 mRNA水平。耗尽TRIM14不会改变ZEB2 mRNA***第页 < 0.001,n个 = 3个实验。b条在没有或存在10μM MG132的情况下，用指示的shRNA转导的LN229和U251细胞中TRIM14、ZEB2和β-actin的Western blot分析。**c（c）**用环己酰亚胺处理转染shTRIM14的LN229和U251细胞（100μg/ml，预处理15分钟和不同的持续时间），并在指定的时间收集以进行western blot。显示了ZEB2相对于β-肌动蛋白表达的定量。结果显示为平均值 ± 标准偏差。n个 = 3个独立实验。***，*P（P）* < 0.001，双向方差分析测试。d日用HA-UB和指示的shRNA转染的LN229和U251细胞在收获前用MG132处理8小时。ZEB2用抗ZEB2抗体免疫沉淀，用抗HA抗体免疫印迹。**e（电子）**用指示的shRNA转导LN229和U251细胞48小时，用蛋白酶体抑制剂MG132处理6小时，然后进行ZEB2泛素化和IB分析。如果用Myc-TRIM14、Flag-FBXO45或载体对照转导HS683和U87细胞48小时，用蛋白酶体抑制剂MG132处理6小时，然后进行ZEB2泛素化分析和IB分析

图7
TRIM14功能在体内和IHC中得到证实。一将ShCtrl转染和shTRIM14移植的LN229细胞分别计数并移植到原位裸鼠模型中，n个 = 6b条shCtrl-移植或shTRIM14移植颅内异种移植物的存活曲线。***，*P（P）* < 0.001,n个 = 6c（c）如图所示，当天携带对照或TRIM14缺失LN229细胞的原位肿瘤的代表性假彩色生物发光图像。显示肿瘤体积的量化***第页 < 0.001;n个 = 3实验。d日HE分析显示肿瘤细胞结构。**e（电子）**对shCtrl转基因组和shCtrl移植组的四对小鼠提取的TRIM14和ZEB2进行Western blot分析。β-肌动蛋白水平证实了等负荷。如果四个具有代表性的GBM标本中TRIM14和ZEB2的IHC染色

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