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.2019年2月4日;9(1):1172.
doi:10.1038/s41598-018-37793-z。

胚胎肾的重建确定了移植后供体细胞对肾血管系统的贡献

附属公司

胚胎肾脏的重建确定了移植后供体细胞对肾血管系统的贡献

村上洋一等。 科学代表. .

摘要

肾脏具有高度组织化的血管系统,这是其过滤功能所必需的。虽然干细胞生物学的最新进展已经使肾脏组织的体外生成成为可能,但至少在一定程度上,复杂血管结构的重演仍然是一个巨大的挑战。在此,我们开发了一种利用分离和分选的小鼠胚胎肾细胞在体外重建肾脏及其血管结构的方法。移植后,小动脉网络重新建立,穿过分支输尿管芽之间的间隙,最终进入肾小球。使用该系统,我们发现供体衍生的内皮细胞对移植后形成的小动脉和肾小球毛细血管有显著贡献。出乎意料的是,供体胚胎肾中的典型内皮细胞几乎完全耗尽,这表明存在未经鉴定的供体或衍生内皮前体细胞,这些前体细胞对典型内皮标记物呈阴性,但对移植中的血管系统仍有重要贡献。因此,我们的方案将作为一个有用的平台,用于鉴定肾内皮前体并从多能干细胞中诱导这些前体。

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利益冲突声明

作者声明没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
肾外和肾内血管系统框架由E15.5建立(A类,B类)E12.5处的动脉(A类)和E13.5(B类)从CD31免疫染色的连续切片中重建。箭头:肾动脉从主动脉萌芽(ao);箭头:连接肾动脉和髂总动脉的侧支动脉。(C类,D类)E11.5处动脉(Cx40)和肾脏(NP:Sall1和/或UB:CK8)的整体染色。(C类)背面视图。肾脏位于髂总动脉(ci)的腹侧。(D类)右肾右斜视图。(D’)数字图像(D类). 未观察到明显的肾动脉连接。ao:主动脉。(E类H(H))E12.5动脉(Cx40)和肾脏(UB:CK8)的整体染色(E类,F类)和E13.5(G公司,H(H)). 右肾背视图如图所示。(F',H')的数字化图像(F类,H(H))分别为。箭头:肾动脉从主动脉(ao)萌芽并侵入肾脏;箭头:连接肾动脉和髂总动脉的侧支动脉。E13.5时,侧支动脉消失。()E15.5处动脉(Cx40)的整体染色。右肾的背视图如图所示。箭头:形成肾动脉的单一柄。(J)与肾小球(肾素)相连的肾内小动脉(Cx40)的全数染色。(J’)数字图像(J). 每个阶段检查三只小鼠,并显示代表性图像。比例尺:100微米。
图2
图2
内皮细胞在E11.5侵入肾脏(A类)E11.5野生型肾脏的流式细胞术分析。大多数CD31+细胞是Flk1。显示了三个独立实验的代表性数据。(B类D类)E11.5 Flk1-GFP肾脏周围GFP+EC的整体染色(NP:Six2;UB:E-cadherin)。背部放大图像(C类)和腹侧(D类)图中还显示了肾脏在不同Z平面上的侧面。(E类)E11.5 Tie2Core的流式细胞术分析;td番茄肾脏。CD31的大多数+细胞为tdTomato+。(F类H(H))E11.5肾脏周围tdTomato+EC的全悬置染色(NP:Six2;UB:CK8)。背部放大图像(G公司)和腹部(H(H))图中还显示了肾脏在不同Z平面上的侧面。箭头:EC沿着UB柄侵入肾脏,从Wolffian导管(WD)的丛(钻石)侵入;箭头:围绕NP的EC;星号:髂总动脉。比例尺:100微米。显示了每种基因型的三只小鼠的代表性图像。
图3
图3
重建的肾脏器官中的血管发育受到限制体外(A类)肾脏器官重建和培养方案体外E11.5的三种类型的肾祖细胞(NPs、SP和Hoxb7-GFP+UBs)在有或无EC的情况下聚集过夜。随后在气-液界面培养类有机物2-6天(第3-7天)。(B类)EC、NP和SP的排序。CD31+和/或Flk1+细胞被分类为EC(左),CD31−/Flk1−组分(左)中的细胞被进一步分类为Itga8+NP和Pdgfra+SP组分(右)。(C类F类)肾脏类有机物与内皮细胞聚集并培养指定天数的整体染色。GFP+UB分支和CD31+血管形成(C类,D类)以及肾素+肾小球形成(E类)观察到。无Cx40+小动脉(F类)观察到。(G公司)肾小球切片染色(nephrin)。肾小球中未检测到CD31+EC。(H(H)L(左))整体安装(H(H)K(K))或节(L(左))肾脏类有机物染色聚集,无内皮细胞,培养指定天数。有机物与(C类G公司)和没有(H(H)L(左))观察到内皮细胞。比例尺:100微米(C类F类,H(H)K(K)); 10微米(G公司,L(左)). 显示了三个独立实验中三个有机物的代表性图像,每个有机物都有和没有EC。
图4
图4
移植肾器官形成小动脉网和带血管的肾小球(A类)肾脏器官移植方案。类器官如图所示生成。3A,在第3天移植,并在移植后7天收获。(B类)器官样体从移植前第3天到移植后第7天的大小增长。尺寸表示为短轴(mm)×长轴(mm)**第页 < 0.01;n.s.:不显著(n = 5). (C类)移植后7天用EC对类器官进行整体染色。(C')放大图像(C类). (C“)(C')的数字图像。观察到Cx40+小动脉穿过分支UB之间的间隙。(D类)Cx40+EC与肾素+肾小球相连。(D’)数字图像(D类). (E类)切片染色显示CD31+EC整合到肾素+肾小球。(F类H(H))整体安装(F类,G公司)或节(H(H))移植后7天无内皮细胞的类器官染色。类有机物与(C类E类)和没有(F类H(H))观察到内皮细胞。显示了两个独立移植实验中两个器官样体的代表性图像,每个器官样体都有和没有内皮细胞。比例尺:100微米(C、 D类,F类,G公司); 10微米(E类,H(H)).
图5
图5
供体来源的内皮细胞在移植后对大多数肾血管系统起作用(A类)利用Tie2Core的肾脏器官移植方案;td番茄肾脏。Tie2Core的NP和SP;td番茄E11.5肾脏与Hoxb7-GFP UBs聚集,有或没有来自Tie2Core的EC;td番茄肾脏。(B类)含EC的有机物培养3-7天体外形成td番茄+供体或衍生血管。(C类)移植后7天出现EC的器官。观察到分枝UB和tdTomato+EC的广泛分布。(D类)无EC的有机物培养3-7天体外td番茄+血管形成有限。(E类)移植后7天无内皮细胞的类器官。观察到td番茄+EC的广泛分布。(F类)切片染色显示移植后7天td番茄+供体细胞对小动脉和肾小球毛细血管的贡献。(F类,G公司)具有EC;(H(H),)无EC。(J,K(K))移植后7天器官类CD31与td番茄的流式细胞术分析。tdTomato+供体细胞在CD31+EC中的百分比如(K(K)). 在含有和不含EC的类有机物之间未观察到显著差异 = 0.14; n个 = 5). 显示了来自三个独立移植实验的五个有机物的代表性图像,每个有机物都有和没有内皮细胞。比例尺:100微米(B类E类); 10微米(F类).

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    1. 田口A等。重新定义后肾肾单位祖细胞的体内起源可以从多能干细胞生成复杂的肾脏结构。细胞干细胞。2014;14:53–67. doi:10.1016/j.stem.2013.11.010。-内政部-公共医学
    1. Takasato M等人。来自人类iPS细胞的肾脏类器官包含多个谱系并模拟人类肾脏发生。自然。2015;526:564–568. doi:10.1038/nature15695。-内政部-公共医学
    1. Morizane R等。来源于人类多能干细胞的肾单位类有机物模拟肾脏发育和损伤。自然生物技术。2015;33:1193–1200. doi:10.1038/nbt.3392。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Takebe T等。通过间充质细胞驱动的冷凝作用从不同组织中获得血管化和复杂器官芽。细胞干细胞。2015;16:556–565. doi:10.1016/j.stem.2015.03.004。-内政部-公共医学
    1. Takebe T等。完全由人类多能干细胞产生的肝芽的大规模和可复制生产。Cell Rep.2017;21:2661–2670. doi:10.1016/j.celrep.2017.11.005。-内政部-公共医学

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