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.2019年2月2日；8(2):117.
doi:10.3390/cells8020117。

CDC42SE1在A431细胞中的过度表达通过抑制Akt通路降低细胞增殖

帕扎尼查米·卡拉伊林加姆 1, 惠兵滩 2, 九一盘 三, 苏亚特·胡恩·坦 4, Thirumaran Thanabalu公司 5
附属公司

CDC42SE1在A431细胞中的过度表达通过抑制Akt通路降低细胞增殖

Pazhanichamy Kalailingam公司等。 单元格. .

摘要

细胞分裂周期42（CDC42）是一种小的Rho-GTPase，在许多细胞过程中起着关键作用，包括细胞增殖和存活。CDC42与9 kDa的小效应蛋白CDC42SE1的CRIB（CDC42-和Rac-interactive binding）域相互作用。我们发现，与匹配的危险对照组相比，CDC42SE1在人类皮肤癌样本中的表达降低。CDC42SE1的外源性表达，但不表达CDC42SER1H38A型A431细胞（A431）（CRIB域内突变）SE1号机组，A431SE1-H38A型)减少细胞增殖。A431抗体芯片分析Ctrl键和A431SE1号机组裂解物表明A431减少SE1号机组细胞增殖是由于Akt途径受到抑制，这一点已被A431中P-Akt和P-mTOR水平的降低所证实SE1号机组与A431相比的电池Ctrl键细胞。这表明CDC42SE1通过与其他效应蛋白竞争结合CDC42来调节CDC42介导的Akt途径。A431型SE1号机组与A431相比，软琼脂中的细胞形成较小的菌落Ctrl键和A431SE1-H38A型细胞。这些发现与裸鼠异种移植试验相关，其中A431SE1号机组与A431形成的肿瘤相比，细胞形成的肿瘤体积显著减少Ctrl键细胞。我们的结果表明，CDC42SE1在皮肤癌中下调以促进肿瘤发生，因此CDC42SE1可能是皮肤癌进展的重要标志。

关键词：Akt通路；CDC42；肌动蛋白细胞骨架；皮肤癌。

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利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
鳞状细胞癌中CDC42SE1的表达降低，CDC42SER1的外源性表达降低了细胞增殖。(A类)定量PCR分析SCC活检中CDC42SE1的表达（n=5）与匹配的周围对照。使用MRPL27的表达进行标准化。(B类)定量PCR分析CDC42SE1在HaCaT、HSC5和A431细胞中的表达。MRPL27的表达用于正常化。(C类)CDC42SE1在A431中表达的定量PCR分析Ctrl键，A431SE1号机组和A431SE1-H38A型细胞（n=3）。MRPL27的表达用于正常化。(D类)具有CDC42绑定的CDC42SE1的结构。(E类)A431中CDC42SE1表达的免疫印迹分析Ctrl键，A431SE1号机组、和A431SE1-H38A型细胞。GAPDH（3-磷酸甘油醛脱氢酶）作为负荷控制（n=3）。(F类)MTT分析和(G公司)A431细胞增殖试验Ctrl键，A431SE1号机组和A431SE1-H38A型细胞（n=3）。总共，将7500个细胞接种在24孔板中，并在37°C和5%CO下培养2培养72小时后，使用细胞进行MTT分析，并使用血细胞仪进行细胞计数。(H（H）)来自A431的蛋白裂解物SE1号机组，A431SE1-H38A序列和A431Ctrl键使用抗CyclinD1进行western blot，并使用GAPDH作为负荷对照（n=3）。注：***对≤ 0.001, **对≤ 0.01, *对≤ 0.05.
图2
图2
CDC42SE1抑制软琼脂中A431细胞的集落形成和生长。(A类)A431电池（A431Ctrl键，A431SE1号机组和A431SE1-H38A型)细胞生长14天，然后用0.05%结晶紫染色并成像。图表表示菌落/孔的平均数量。(B类)A431电池（A431Ctrl键，A431SE1号机组和A431SE1-H38A型)在0.6%琼脂中培养14天，用0.05%结晶紫染色并成像。图表表示菌落数/面积和菌落平均大小的平均值。用5倍物镜拍摄图像，每个样本计算6个视野（n=3）。菌落面积（µm2)使用ImageJ软件进行测量。(***对≤ 0.001, *对≤ 0.05).
图3
图3
CDC42SE1通过Akt途径调节A431细胞的增殖。(A类)A431型SE1号机组和A431Ctrl键使用Kinex™抗体阵列对细胞裂解物进行标记和分析，该阵列询问877个细胞信号蛋白的表达水平或磷酸化状态。维恩图显示，蛋白质表达上调≥1.2倍或下调≤1.2倍。使用Ingenuity Pathway Analysis（IPA）计算表达的折叠变化。(B类)饼图表示基于生物功能的Kinex™抗体阵列的基因本体分类。(C类)热图图表示A431生成的数据中对肿瘤细胞生长的抑制SE1号机组和A431Ctrl键使用IPA软件。(D类)热图图表示Akt途径蛋白质，它们在A431中有差异表达SE1号机组与A431相比的电池Ctrl键如IPA软件预测的那样。
图4
图4
Akt途径在A431中被抑制SE1号机组与A431相比的电池Ctrl键细胞。来自A431的蛋白裂解物SE1号机组，A431SE1-H38A型和A431Ctrl键使用抗体Akt、P-Akt进行western blot分析(A类)、mTOR、P-mTOR(B类)4-EBP1(C类)PTEN、P-PTEN(D类)GAPDH被用作负荷控制（n=3）。使用ImageJ软件对谱带强度进行量化，并使用GAPDH进行归一化并绘制。(**对≤ 0.01, *对≤ 0.05).
图5
图5
CDC42SE1定位于质膜，增强了E-钙粘蛋白在A431膜的定位SE1号机组细胞。(A类)用携带CDC42SE1-GFP、CDC42SER1表达盒的慢病毒感染A431细胞H38A型–GFP和GFP。用装有40倍油物镜的奥林巴斯荧光显微镜观察感染细胞。(B类)A431Ctrl键，A431SE1号机组和A431SE1-H38A型细胞接种在盖玻片上，生长到40%汇合处，固定，然后用抗E-cadherin一级抗体和Alexa488二级抗体进行检测。Alexa568-Phalloidin用于观察细胞中的F-actin。使用40倍物镜拍摄图像。(C类)A431细胞膜上E-钙粘蛋白荧光强度的定量Ctrl键，A431SE1号机组和A431SE1-H38A型细胞。细胞的荧光强度与细胞周长标准化。(D类)来自A431的蛋白裂解物SE1号机组，431美元SE1-H38A型和A431Ctrl键用E-钙粘蛋白抗体进行western blot。GAPDH用作负荷对照。（n=3）(*对≤ 0.05).
图6
图6
CDC42SE1抑制A431细胞扩散和CDC42诱导的A549细胞丝状伪足形成。(A类)A431型Ctrl键，A431SE1号机组和A431SE1-H38A型将细胞接种在纤维粘连蛋白涂层的96孔板上，每隔0、10和20min用显微镜（10倍物镜）对细胞成像。使用图像J（n＝3），使用每个样本30个细胞的图像来计算细胞的面积。(B类)如图所示，用4µg质粒在组合中转染A549细胞。转染36 h后分析细胞丝状体形成情况。使用40×物镜获取图像。(C类)在随机场中选择总共30个转染细胞，并使用Image J软件分析是否存在丝状体。当细胞突起在8–20µm（n=3）之间时，我们用丝状体计数细胞。结果为平均值±标准偏差**对< 0.01, *对< 0.05.
图7
图7
CDC42SE1抑制体内A431衍生肿瘤的生长。(A类,B类)A431型Ctrl键和A431SE1号机组电池（1×106将含有50%基质凝胶的细胞注射到裸鼠皮下（每组6只）。每两天对老鼠拍照一次，照片显示的是注射后21天的老鼠。在裸鼠体内注射A431细胞后的第8、11、15、18和21天，用游标卡尺测量肿瘤大小，并用L X W计算肿瘤体积2/2配方。数据点表示平均肿瘤体积。(C类)注射A431的小鼠组织切片SE1号机组和A431Ctrl键制备细胞并进行H&E染色。H&E着色图像显示A431形成的肿瘤Ctrl键与A431形成的肿瘤相比，细胞组织和分化良好SE1号机组细胞（n=6）。(D类)从A431中分离出总RNACtrl键和A431SE1号机组使用Trizol将肿瘤样本转化为cDNA，并使用CDC42SE1和MRPL27特异性引物进行qPCR。CDC42SE1的相对丰度根据MRPL27标准化（n=3）。(E类)来自A431的蛋白裂解物SE1号机组和A431Ctrl键使用针对Akt、P-Akt，mTOR、P-mTOR，4-EBP1和cyclin D1的抗体对肿瘤进行免疫印迹分析。GAPDH被用作负荷控制（n=3）。(**对≤ 0.01, *对≤ 0.05).
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    1. Sahai E.、Marshall C.J.Rho-gtpases与癌症。Nat.Rev.癌症。2002;2:133–142. doi:10.1038/nrc725。-内政部-公共医学
    1. Jones P.A.，Baylin S.B.癌症的表观基因组学。单元格。2007;128:683–692. doi:10.1016/j.cell.2007.01.029。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Kakiuchi M.、Nishizawa T.、Ueda H.、Gotoh K.、Tanaka A.、Hayashi A.、Yamamoto S.、Tatsuno K.、Katoh H.、Watanabe Y.等人。弥漫型胃癌中rhoa的复发性功能缺失突变。自然遗传学。2014;46:583–587. doi:10.1038/ng.2984。-内政部-公共医学
    1. Hall A.Rho gtpases和肌动蛋白细胞骨架。科学。1998;279:509–514. doi:10.1126/science.279.5350.509。-内政部-公共医学
    1. Sasaki T.、Takai Y.rho小g蛋白家族-rho gdi系统作为细胞骨架控制的时间和空间决定因素。生物化学。生物物理学。Res.Commun公司。1998;245:641–645. doi:10.1006/bbrc.1998.8253。-内政部-公共医学

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