跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2019年2月：21:101120。
doi:10.1016/j.redox.2019.101120。 Epub 2019年1月23日。

Mst1抑制通过逆转Parkin相关的有丝分裂减少非酒精性脂肪肝

陶周 1, 玲珑（Ling Chang） 2, 伊洛 1, 瀛洲 三, 张建军 4
附属机构

Mst1抑制通过逆转Parkin相关的有丝分裂减少非酒精性脂肪肝

陶周等。 氧化还原生物. 2019年2月.

勘误表in

摘要

肥胖相关非酒精性脂肪肝（NAFLD）与线粒体应激和肝细胞凋亡有关。Parkin相关的有丝分裂维持线粒体稳态和肝细胞活性。然而，Parkin相关的有丝分裂在NAFLD中的作用和调节机制尚不完全清楚。巨噬细胞刺激1（Mst1）是一种新型的有丝分裂上游调控因子，通过抑制有丝分裂活性而抑制心脏和癌症的凋亡。我们研究的目的是探讨Mst1是否通过干扰Parkin相关的有丝分裂而参与NAFLD。使用高脂饮食（HFD）在野生型（WT）小鼠和Mst1基因敲除（Mst1-KO）小鼠中生成NAFLD模型。通过棕榈酸（PA）处理原代肝细胞进行细胞实验。我们的研究结果表明，在HFD治疗的肝脏中，Mst1显著上调。Mst1基因消融可减轻HFD介导的肝损伤并维持肝细胞活性。功能研究表明，Mst1敲除逆转了Parkin相关的有丝分裂，后者保护线粒体和肝细胞免受HFD攻击。此外，我们进一步发现Mst1通过AMPK途径调节Parkin表达；阻断AMPK可抑制Parkin相关的线粒体吞噬，并使肝细胞线粒体凋亡。总之，我们的数据确定NAFLD与Mst1上调导致Parkin相关的有丝分裂缺陷密切相关。这一发现可能为脂肪性肝病的新治疗模式铺平道路。

关键词：线粒体损伤；Mst1；非酒精性脂肪肝；帕金相关的有丝分裂。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
Mst1在HFD治疗的肝组织中上调，并有助于NAFLD的发展。A.低脂肪饮食（LFD）处理小鼠或高脂肪饮食（HFD）处理小鼠肝脏中Mst1的转录水平。B-C.LFD治疗小鼠或HFD治疗小鼠肝脏中Mst1的蛋白表达。D-E.公司。在体外，用PA处理原代肝细胞，western blotting检测Mst1蛋白表达。F.测量体重以探讨Mst1在体重增加中的作用。G.测量WT小鼠和Mst1-KO小鼠的血糖水平。H-K.用ELISA法测定WT小鼠和Mst1-KO小鼠血液中的甘油三酯、总胆固醇、ALT和AST水平。实验重复三次，数据显示为平均值± 扫描电镜（SEM.n） = 每组6只小鼠*P（P） < 0.05之间。
图2
图2
Mst1基因消融可减轻HFD治疗小鼠的肝损伤。A.在WT小鼠和Mst1 KO小鼠中测量肝脏重量。B.取肝脏，进行HE染色，观察Mst1基因敲除的HFD治疗肝脏的结构变化。C.WT小鼠和Mst1-KO小鼠肝脏的天狼星红染色。红色区域表示肾纤维化。D-G.qPCR分析PPARα、ACCA1、SREBP1c和FAS1等产脂基因的变化。从WT小鼠和Mst1-KO小鼠的肝组织中分离出H-J蛋白。然后，进行western blotting观察纤维化相关信号通路的变化。实验重复三次，数据显示为平均值± 扫描电镜（SEM.n） = 每组6只小鼠*P（P） < 0.05之间。
图3
图3
Mst1敲除抑制HFD介导的肝脏氧化应激和炎症反应。收集A-D.肝脏，分离蛋白质，通过ELISA分析氧化应激标记物。采集WT小鼠和Mst1-KO小鼠的E-G血；然后，通过ELISA检测血清TNFα、IL-6和MCP-1。采用H-K.Western blotting分析炎症因子的蛋白表达。实验重复三次，数据显示为平均值± 扫描电镜（SEM.n） = 每组6只小鼠*P（P） < 0.05之间。
图4
图4
Mst1抑制减少PA诱导的肝细胞线粒体凋亡。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3和9的A-B免疫荧光分析体内caspase-3和caspase-9的荧光强度在慢性HFD治疗中显著增加，并通过Mst1敲除而降低。在WT小鼠和Mst1-KO小鼠中分离到C-F蛋白；然后进行western印迹分析凋亡蛋白的表达。G-H公司。体外，用PA处理原代肝细胞，然后用TUNEL染色定量凋亡细胞。为了抑制Mst1的表达，在PA刺激之前将针对Mst1的siRNA（si-Mst1）转染到细胞中。I.采用MTT法测定肝细胞存活率。实验重复三次，数据显示为平均值± 扫描电镜（SEM.n） = 每组6只小鼠*P（P） < 0.05之间。
图5
图5
Mst1通过抑制Parkin表达而使有丝分裂活性失活。空军。体外用PA处理原代肝细胞，从细胞中分离蛋白质，用western blotting观察线粒体吞噬相关因子的变化。G-H.有丝分裂免疫荧光分析。Tom-20和LAMP1分别用于标记线粒体和溶酶体。然后记录有丝分裂次数。I-J.Western blotting用于检测Mst1敲除后Parkin的表达。使用两个独立的Parkin siRNA（si1-Parkin和si2-Parkin）抑制Parkin表达。通过western blotting验证了敲除效率。实验重复三次，数据显示为平均值± 扫描电镜（SEM.n） = 每组6只小鼠*P（P） < 0.05之间。
图6
图6
Parkin相关的有丝分裂维持线粒体内稳态。A-B.公司。体外用PA处理原代肝细胞，然后用JC-1探针观察线粒体电位。使用两个独立的Parkin siRNA（si1-Parkin和si2-Parkin）抑制Parkin表达。采用流式细胞术分析线粒体活性氧（mROS）。使用抗Parkin的siRNA抑制Parkin表达。检测到mPTP开放率，并且通过依赖Parkin相关有丝分裂的方式，Mst1敲除可以抑制PA介导的mPTP打开。细胞色素c染色的E-F.免疫荧光测定。DAPI标记细胞核。G.通过检测caspase-9活性来检测线粒体凋亡。实验重复三次，数据显示为平均值± 扫描电镜（SEM.n） = 每组6只小鼠*P（P） < 0.05之间。
图7
图7
Mst1通过AMPK途径调节Mst1。A-C.公司。体外用PA处理原代肝细胞，然后从细胞中分离蛋白质。Western blotting分析AMPK和Parkin的表达。在细胞培养基中加入AMPK抑制剂化合物C（CC）以抑制AMPK的激活。Parkin和p-AMPK的D-F.免疫荧光测定。采用G-H.TUNEL法观察细胞凋亡情况。记录Mst1敲除和CC孵育后TUNEL阳性细胞的数量。实验重复三次，数据显示为平均值± 扫描电镜（SEM.n） = 每组6只小鼠*P（P） < 0.05之间。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. 周华，杜伟，李毅，石C.，胡宁，马S.，王伟，任J.褪黑素对脂肪性肝病的影响：NR4A1/DNA-PKcs/p53通路的作用，线粒体分裂和有丝分裂。2018年松果研究杂志；64（1）-公共医学
    1. Li R.，Xin T.，Li D.，Wang C.，Zhu H.，Zhou H.Sirtuin 3改善非酒精性脂肪性肝病的疗效：ERK-CREB途径和Bnip3-介导的有丝分裂的作用。氧化还原生物。2018;18:229–243.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Simoes I.C.M.、Fontes A.、Pinton P.、Zischka H.、Wieckowski M.R.非酒精性脂肪肝患者的线粒体。国际生物化学杂志。细胞生物学。2018;95:93–99.-公共医学
    1. 周华、朱平、王杰、朱华、任杰、陈勇。心脏缺血再灌注损伤的发病机制与CK2alpha通过抑制FUNDC1相关的有丝分裂而增强线粒体内稳态有关。细胞死亡不同。2018;25(6):1080–1093.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Blazquez Castro A.直接（1）O2光激发：氧化还原生物学的工具。氧化还原生物。2017年；13:39–59.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型