Identification of radiation-induced EndMT inhibitors through cell-based phenomic screening

doi:10.1002/2211-5463.12552

.2018年12月6日；9(1):82-91.

doi:10.1002/2211-5463.12552。 eCollection 2019年1月。

通过基于细胞的表型筛选鉴定辐射诱导的EndMT抑制剂

附属机构

¹韩国Seongnam-si Pasteur癌症生物实验室研究所。
²分析开发和筛选研究所韩国巴斯德Seongnam-si Korea。
^三韩国圣南巴斯德药物化学研究所。
⁴韩国放射与医学科学研究所放射效应科韩国首尔。

采购管理信息： 30652076
PMCID公司： PMC6325571型
内政部： 10.1002/2211-5463.12552

通过细胞表型筛选鉴定辐射诱导的EndMT抑制剂

Yeonhwa Song公司等。 FEBS开放式生物. 2018.

.2018年12月6日；9(1):82-91.

doi:10.1002/2221-5463.12552。 eCollection 2019年1月。

附属机构

¹韩国Seongnam-si Pasteur癌症生物实验室研究所。
²分析开发和筛选研究所韩国巴斯德Seongnam-si Korea。
^三韩国圣南巴斯德药物化学研究所。
⁴韩国放射与医学科学研究所放射效应科韩国首尔。

采购管理信息： 30652076
PMCID公司： PMC6325571型
内政部： 10.1002/2211-5463.12552

摘要

辐射诱导的肺纤维化（RIPF）引发生理异常。内皮-间充质转化（EndMT）是内皮细胞向成纤维细胞样细胞的表型转化，参与RIPF。在本研究中，我们建立了一个现象学筛选平台来测量辐射诱导的应力纤维，并优化了使用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）开发靶向RIPF的化合物进行高通量筛选的条件。筛选结果表明，CHIR-99021减少了辐射诱导的纤维化，细胞尺寸增大，肌动蛋白应激纤维和α-平滑肌肌动蛋白表达增加证明了这一点。这些效应在HUVEC中未引起严重毒性，电离辐射（IR）对非小细胞肺癌的细胞毒性作用也增强。这些结果表明，CHIR-99021通过抑制肺癌中辐射诱导的EndMT增强了IR治疗的效果。

关键词：CHIR‐99021；内皮细胞向间充质细胞转化；电离辐射；非小细胞肺癌；辐射诱导的肺纤维化；视觉物候筛查。

PubMed免责声明

数字

图1
辐射引起的形态学变化。（A） HUVEC接受γ射线照射，并用Phalloidin和Hoechst染色以评估形态学变化。左侧显示使用Operetta系统获取的图像，右侧显示由感应电动机软件（韩国京畿道Parsteur研究所，韩国）。（B）应力纤维程度的量化。辐射刺激肌动蛋白微丝的形成。每个误差条代表平均值±SD(**P（P）* < 0.0001). （C）使用内部分析获取的图像感应电动机检测细胞数量和面积以及应力纤维的软件。分割算法根据背景上方对象的强度确定细胞核的数量和大小。测量了从细胞中心向前延伸的肌动蛋白丝，以确定辐照后的独特形态特征。（D）用几个参数测量高低对照板，以评估384孔格式的分析。每个对照组的分布显示了细胞数量、细胞核和细胞面积。比例尺=200μm。

图2
表型筛选结果。根据一个含有622种化合物的文库，对检测灵敏度进行评估，并对其进行重复筛选，以评估再现性。（A）散点图分析显示了集1与集2中应力纤维程度的相关性。每个图表示分析板中的单个化合物。（B）细胞大小和（C）细胞数量的散点图分析。（D）用10 Gy照射H1299细胞，并在照射后3 h用6种指定浓度的hit化合物处理48 h。培养后，用Hoechst对细胞进行染色，并用Operetta系统进行分析。显示了H1299在有或无辐射的情况下细胞存活的剂量-反应曲线。

图3
CHIR‐99021对HUVEC的影响。（A） HUVEC在指定浓度下使用六种命中化合物进行处理。培养48小时后，用Hoechst对细胞进行染色，并用Operetta系统分析细胞数量。（B）用CHIR‐99021处理HUVEC，这是最后的命中化合物，在指定浓度下处理48小时。培养后，用Phalloidin和Hoechst对细胞进行染色。细胞和应力纤维的数量用感应电动机软件。每张图片都显示了HUVEC中的应力纤维。比例尺=200μm。（C） HUVECs和HCAECs在辐射前1小时用CHIR-99021预处理，并用10Gy照射。24小时后，制备细胞进行western blot分析。检测HUVEC和HCAEC中α-SMA（EndMT相关蛋白）的表达。加载β-actin作为对照。根据非红外/CHIR‐99021 0μ米组（下部）。使用学生的t吨‐测试和n个= 3. 每个误差条代表平均值±SD(**P（P）* < 0.05, ***P（P）* < 0.01, *****P（P）*<0.0001，ns：不显著）。

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