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.2019年8月;35(4):387-398.
doi:10.1007/s10565-018-09457-1。 Epub 2019年1月10日。

座头鲸皮肤成纤维细胞的寿命延长及其对脂多糖(LPS)和多氯联苯混合物(Aroclor)的反应

附属公司

座头鲸皮肤成纤维细胞的寿命延长及其对脂多糖(LPS)和多氯联苯混合物(Aroclor)的反应

迈克尔·伯克德等。 细胞生物毒素. 2019年8月.

摘要

海洋哺乳动物,如鲸鱼,体内脂肪的比例很高,因此容易受到亲油性环境污染物的累积和相关有害健康影响。最近,我们从座头鲸成纤维细胞(HuWa)中开发出一种野生型细胞系。哺乳动物野生型细胞的广泛分子评估通常受到有限寿命的限制,细胞最终会衰老。因此,本研究探讨了通过编码猴病毒大T抗原(SV40T)或端粒酶逆转录酶(TERT)的质粒转染防止HuWa细胞系衰老的可能性。SV40转染后未获得稳定表达。另一方面,TERT转染激活了HuWa细胞中端粒酶的表达。在准备原稿时,转染的HuWa细胞(HuWaTERT(地形))在转染后至少59次传代中是稳定的。胡瓦TERT(地形)快速增殖并保持初始细胞特征,如形态和染色体稳定性。胡娃的回应TERT(地形)通过测量细胞内促炎细胞因子白介素-6、白介素-1β和肿瘤坏死因子-α的水平,评估细胞对免疫刺激物(脂多糖(LPS)和免疫毒剂(Aroclor1254)的反应。胡瓦TERT(地形)细胞组成性表达IL-6、IL-1β和TNFα。暴露于LPS和Aroclor1254均不会影响这些细胞因子的水平。总的来说,这项工作支持了HuWa细胞系的多样适用性,因为它们表现出可靠的长期保存性、对外源基因转移的敏感性,并使座头鲸特异性细胞反应机制的研究成为可能。

关键词:细胞系转染;驼背鲸;免疫毒性;炎症细胞因子;新星巨翅目;相对端粒酶活性。

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数字

图1
图1
新菌株的特征:HuWaTERT(地形)。TERT转染细胞具有五种不同的特征。对于形态外观(1),HuWaTERT(地形)随着时间的推移培养细胞,并在1天后评估不同汇合水平的形态学外观(),3天(b)和7天(c(c)). 生长(2)被估计为电镀后1、3、5和7天的细胞数量,并在对数期计算出种群加倍时间(d日). 对于核型(3),HuWa的染色体TERT(地形)G显带显示细胞;显示常染色体(1–21)、性染色体(X,Y)和未识别染色体的染色体对(e(电子)). 端粒酶(4)在呼和浩特地区的表达TERT(地形)转染后不同传代的细胞(F类). 数据表示三次技术复制的平均值,误差条表示10000个细胞当量的标准差。用SEM观察细胞的亚细胞结构(5)(G公司); 插图显示了一个细胞内脂质体的横截面。箭头表示共焦显微镜下观察到的脂质体(H(H)、绿色和箭头)。其他可见的亚细胞结构包括内质网(洋红色)和细胞核(蓝色)
图2
图2
炎症细胞因子在胡瓜中的表达TERT(地形)用LPS刺激或接触Aroclor。对于细胞活力评估,HuWaTERT(地形)用不同浓度的LPS(A.1)和Aroclor(B.1)处理细胞。暴露24小时后,使用AlamarBlue(LPS和Aroclor)测量代谢活性,使用CFDA-AM(仅Aroclor)测量膜完整性。A.1中的数据表示三个技术复制和B.1中三个生物复制的平均值;误差条代表SD,并显示为未处理单元格的百分比。用非细胞毒性浓度(用红色箭头表示)的LPS(10μg/ml)(A.2)或Aroclor(1700μg/l)(B.2)治疗24小时后,测定选定炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、TNFα和HSP70)的细胞表达。数据显示为控制的百分比。箱线图显示了三个独立生物复制的中位数、5%和95%以及最小/最大值。使用单向方差分析和Bonferroni的事后检验,在单个标记和未暴露对照之间未发现统计差异(第页 < 0.05)

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