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.2019年4月；17(4):845-859.
doi:10.1158/1541-7786.MCR-18-0638。 Epub 2019年1月4日。

表观抑制SERPINB1促进炎症介导的前列腺癌进展

伊琳娜·勒曼 1, 马晓婷 1, 克里斯蒂娜·塞格 1, 阿尔肯毛湖 2, 玛丽亚·德拉·卢斯·加西亚-赫南德斯 三, 哈维尔·兰杰尔·莫雷诺 三, 杰西卡·阿克曼 4, 肯特·纳斯提克 2, 玛莎·苏西亚乔 5, 斯蒂芬·R·哈姆斯 6
附属公司

表观抑制SERPINB1促进炎症介导的前列腺癌进展

伊琳娜·勒曼等。 摩尔癌症研究. 2019年4月.

摘要

粒细胞髓样浸润和由此产生的中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）活性增强与许多恶性肿瘤的不良预后相关。我们最近发现，人前列腺癌异种移植物和小鼠骨髓浸润细胞中NE的表达和活性较高铂族-前列腺肿瘤无效。我们进一步证明NE直接刺激人类前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭，并抑制NE体内异种移植生长减弱。有趣的是，内源性NE抑制剂SERPINB1的表达减少也与某些癌症的生存率降低相关。因此，我们试图描述SERPINB1在前列腺癌中的作用。我们发现SERPINB1在人类转移性疾病和局部晚期疾病中的表达降低，并预测不良结果。SERPINB1也减少了铂族-与野生型前列腺相比，小鼠前列腺肿瘤为零，而西维来司他（SERPINB1药物模拟物）治疗可抑制肿瘤生长。敲除非恶性前列腺上皮细胞（RWPE-1）中高表达的SERPINB1可增加增殖，减少凋亡，并刺激上皮-间充质过渡标记物的表达。相反，正常低表达前列腺癌细胞（C4-2）中稳定的SERPINB1表达可减少异种移植瘤的生长体内最后，EZH2介导的组蛋白（H3K27me3）甲基化和DNA甲基转移酶介导的DNA甲基化抑制前列腺癌细胞中SERPINB1的表达。癌症基因组图谱和焦磷酸测序分析显示SERPINB1系列前列腺癌启动子与正常组织的比较，启动子甲基化程度与丝氨酸蛋白酶b1mRNA表达。我们的研究结果表明，SERPINB1和NE之间的平衡在前列腺内具有重要的生理意义，可能是前列腺癌的生物标志物和治疗靶点。

PubMed免责声明

利益冲突声明

首席信息官：作者声明没有潜在的利益冲突

数字

图1。
图1中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）抑制降低免疫活性Pten-null小鼠前列腺肿瘤的生长。
A.说明会议期间重要时间点的示意图铂族-零实验。将携带300–500mm3肿瘤的小鼠随机分组，并通过腹腔注射（IP）每日用赋形剂（PBS）或西维来司他（PBS中5mg/kg）进行治疗。B.每两周进行一次超声波测量，测量结果以第0周的体积增加百分比表示。用方差分析法比较肿瘤体积与术后Tukey HSD（n=8代表载剂，n=8表示西维来司他；*p<0.05）。C.在第0周、第4周和第8周使用流式细胞术评估外周血MDSC。使用ANOVA和事后Tukey HSD将第8周的Ly6G+/Ly6C+细胞的百分比与第4周进行比较（载体n=8，西韦莱司他n=8；载体***p<0.001，西韦莱司他p<0.01）。D.Ly6G阳性浸润性粒细胞MDSC和PCNA阳性增殖上皮的代表性免疫荧光染色铂族-显示无前列腺。E.绘制PCNA阳性细胞数与每个视野（FOV）Ly6G阳性细胞数的对比图，以使用双尾皮尔逊相关分析检查相关性（n=20；r=0.7724，p<0.0001）。F.野生型（WT）和铂族-显示无前列腺（n=3，结果相同）。G.野生型前列腺（WT）、Pten-null前列腺和Pten-nall小鼠衍生CaP8细胞系中SERPBIN的Western blot。
图2。
图2 SERPINB1表达降低，预测人类前列腺癌预后不良。
人类前列腺癌SERPINB1系列mRNA表达数据通过NCBI GEO从（A）Varambally等人（Cancer Cell，2005[31]）、（B）Chandran等人（BMC Cancer，2007[30]）和（C）Arredouani等人（Clin Cancer Res，2009[32]）以及（D）Taylor等人（Cancell，2010[33]）获得。使用ANOVA和事后Holm-Sidak在A、B和D中评估组间差异。在C中，使用Student t检验评估差异。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。E.患者表达SERPINB1系列上面（高）和下面（低）的第一个四分位数（左面板）和中间值（右面板）是用Taylor等人的数据通过网络界面Betastasis构建的(http://www.betastasis.com). 使用log-rank（Mantel-Cox）检验评估无复发生存率的差异。通过Western blot检测正常和前列腺癌细胞系中SERPINB1的表达；1:RWPE-1，2:BPH-1，3:LNCaP，4:C4-2，5:DU145，6:PC3，7:22Rv1，8:VCaP，9:LAPC-4。
图3。
图3 SERPINB1缺失刺激正常前列腺细胞的EMT和增殖表型。
A.用非特异性（NSP）和SERPINB1特异性siRNA转染RWPE-1细胞，并用Western blot验证敲除。GAPDH被用作负荷控制。显示了一个具有代表性的斑点。WCL=全细胞裂解状态，CM=完全培养基（分泌的SERPBINB1）。B.mRNA表达SERPINB1系列和EMT标记基质金属蛋白酶9,扭转1,SNAI1公司在使用定量PCR敲除SERPINB1后在RWPE-1细胞中测定，并将其归一化为GAPDH公司将数据归一化为NSP治疗样品，并使用Student t检验评估差异（n=7；*p<0.05，***p<0.0001）。C.使用明胶酶谱法测定SERPINB1敲除后RWPE-1细胞中MMP2和MMP9的表达和活性。图中显示了具有代表性的凝胶。D.使用ImageJ对MMP9和MMP2进行带密度测定，并使用Student t检验评估标准化差异（n=3；**p<0.01，n.s.=不显著）。E.通过PI和膜联蛋白V染色，在用NSP和SERPINB1 siRNA转染后，在RWPE-1细胞中评估细胞凋亡。显示了具有代表性的图。F.凋亡差异（Annexin V+/PI−细胞百分比）通过Student t检验确定（n=3；***p<0.0001）。G.用NSP和SERPINB1 siRNA转染RWPE-1细胞后，通过比色法BrdU掺入法评估细胞增殖。将数据归一化为NSP处理的样本，并使用Student t检验评估差异（n=3；**p<0.01）。
图4。
图4 SERPINB1的表达是通过ERK1/2信号在正常前列腺而非前列腺癌细胞中诱导的。
A.RWPE-1细胞被血清饥饿，并用表皮生长因子（EGF；20 ng/mL）处理4小时。mRNA表达SERPINB1系列,第三阶段、和SLPI公司使用定量PCR测定，并归一化为GAPDH公司将数据归一化为未处理样本，并使用Student t检验评估差异（n=3；**p<0.01，**p<0.001）。B.RWPE-1细胞被血清饥饿，未经处理（UT）或用EGF（20 ng/mL）处理24小时。用Western blot检测SERPINB1的表达。GAPDH被用作负荷控制。图中显示了具有两种处理条件的代表性印迹。将C.PC3细胞进行血清饥饿处理，不处理或用EGF（20 ng/mL）处理4小时。mRNA表达SERPINB1系列,第三阶段、和SLPI公司使用定量PCR测定，并归一化为GAPDH公司将数据归一化为未处理样本，并使用Student t检验评估差异（n=3，n.s.=不显著）。将D.PC3细胞进行血清饥饿处理，并用EGF（20 ng/mL）处理24小时。用Western blot检测SERPINB1的表达。GAPDH被用作负荷控制。显示了每种处理中有两种的代表性斑点。将E.RWPE-1细胞进行血清饥饿处理，并在MEK抑制剂PD0325901（0.25μM）或PI3K抑制剂LY294002（0.25µM）存在下用EGF（20 ng/mL）处理4小时。mRNA表达丝氨酸蛋白酶b1,第三阶段、和SLPI公司使用定量PCR进行测定，并标准化为GAPDH公司将数据归一化为未经处理的样本，并使用ANOVA和事后Tukey评估差异（*****p<0.0001，n.s.=不显著）。将F.RWPE-1细胞进行血清饥饿处理，并在PD0325901（0.25μM）或LY294002（0.25µM）存在下用EGF（20 ng/mL）处理30分钟。Western blot检测pERK1/2和tERK1/2水平。
图5。
图5前列腺癌中SERPINB1受到EZH2介导的组蛋白甲基化和DNMT介导的DNA甲基化的表观遗传抑制。
A.在RWPE-1和C4-2细胞中对SERPINB1启动子上的H3K27me3进行染色质免疫沉淀。数据显示为IgG对照组的折叠富集，并显示了两次实验的平均值。用EZH2抑制剂GSK343（10μM）处理B.C4-2细胞72小时。mRNA表达SERPINB1系列,第三阶段、和SLPI公司使用定量PCR测定，并归一化为GAPDH公司将数据归一化为未处理样本，并使用Student t检验评估差异（n=3；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001）。用DNMT抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷（5-aza，10μM）处理C.C4-2细胞72小时。mRNA表达丝氨酸蛋白酶b1,第三阶段、和SLPI公司使用定量PCR测定，并归一化为GAPDH公司将数据归一化为未处理样本，并使用Student t检验评估差异（n=3；***p<0.001，***p<0.0001）。用GSK343和5-AZA（10μM）处理D.C4-2细胞72小时。用Western blot检测SERPINB1的表达。GAPDH被用作负荷控制。有代表性的印迹显示E.使用焦测序法测量C4-2、LNCaP、22Rv1和RWPE-1细胞中六个CpG位点的启动子甲基化（CpG1是最接近转录起始位点的岛），并使用Student t检验确定差异（n=4，***p<0.001）。F、。SERPINB1系列评估TCGA PRAD中的表达，并使用Student t检验确定差异（****p<0.0001）。G.使用癌症基因组图谱（TCGA）数据集，通过开放的web界面MethHC，对各种恶性肿瘤的正常和癌症样本中SERPINB1启动子处的DNA甲基化进行分析(http://methc.mbc.nctu.edu.tw/php/index.php) [34]. PRAD-前列腺癌、BRCA-乳腺浸润癌、LUAD-肺腺癌、COAD-结肠腺癌、BLCA-膀胱尿路上皮癌和PAAD-胰腺腺癌。使用Student t检验评估差异（*****p<0.0001，n.s.=不显著）。H。SERPINB1系列利用双尾皮尔逊相关分析（r=-0.673，p<0.0001）绘制甲基化与表达的关系图，以检验相关性。
图6。
图6 SERPINB1过度表达可降低体内前列腺癌异种移植瘤的生长。
A.在稳定表达SERPINB1的C4-2细胞（SERPINB1克隆B2和B4）和载体对照（载体克隆A3和B3）的全细胞裂解液（WCL）和浓缩条件培养基（CM）中检测到SERPINB。GAPDH被用作负荷控制。显示了具有代表性的斑点。B.使用Student’s t检验将载体A3和SERPINB1 B2异种移植物皮下注射到裸鼠侧翼，比较两者之间的肿瘤重量（载体n=10，SERPINB n=3；*p<0.05）。实验结束时，使用Western blot在收获的肿瘤中检测到C.SERPINB1。显示了一个具有代表性的斑点。D.使用Student t检验比较皮下注射到无胸腺裸鼠侧翼的Vector B3和SERPINB1 B4异种移植物之间的肿瘤重量（Vector的n＝10，SERPINB1的n＝11；p＝0.149）。在实验结束时，使用蛋白质印迹在收获的肿瘤中检测SERPINB1。显示了一个具有代表性的斑点。F.测量肿瘤内中性粒细胞弹性蛋白酶活性体外使用NE专用光学探头。G.使用ImageJ量化肿瘤内NE活性，并将其归一化为Vector对照。采用Student t检验评估差异（矢量n=8，SERPINB1 n=4；*p<0.05）。
图7。
图7 SERPINB1在正常人前列腺中表达，但在前列腺癌中表达减少。
A.人类前列腺切除标本中SERPINB1的代表性免疫组织化学染色，显示正常、正常和癌症区域，以及仅癌症区域。红色虚线勾勒出正常前列腺附近的癌灶。B.人类前列腺切除术和核心活检标本中SERPINB1的代表性免疫组织化学染色，显示正常和癌症区域。
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    1. Gaudreau PO等人，前列腺癌生物标记物的现状和未来：蛋白质组学、基因组学和免疫学进展。生物标记癌症，2016年。8（补充2）：第15–33页。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Strasner A和Karin M，《免疫浸润与前列腺癌》。Front Oncol，2015年。5：第128页。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Barron DA和Rowley DR，反应性基质微环境与前列腺癌进展。《内分泌相关癌症》，2012年。19（6）：第R187–204页。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Lerman I和Hammes SR，肿瘤微环境中的中性粒细胞弹性蛋白酶。类固醇，2017年。-项目管理咨询公司-公共医学

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