跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

点政府

政府意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息,确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https(https)://确保您连接到官方网站,并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2018年11月27日:11:3003-3017。
doi:10.2147/JPR。S183594。 2018年电子采集。

臭氧通过AMPK/mTOR信号通路诱导IL-1β刺激的大鼠软骨细胞自噬

附属公司

臭氧通过AMPK/mTOR信号通路诱导IL-1β刺激的大鼠软骨细胞自噬

徐照等。 疼痛研究杂志. .

摘要

背景:臭氧注射通常用于治疗骨关节炎(OA)等疾病的疼痛。最近的研究表明,软骨细胞自噬减少在OA的发展中起着重要作用。本研究的目的是确定臭氧是否通过诱导OA软骨细胞自噬来治疗OA。

材料和方法:在本研究中,用IL-1β刺激初级软骨细胞24小时以模拟OA软骨细胞模型,然后用臭氧(30µg/mL)处理或在臭氧处理前用3-甲基腺嘌呤或化合物C预处理。然后,用CCK-8试剂盒检测细胞活力,用Western blotting和免疫荧光检测AMPK/mTOR信号通路和自噬。采用实时定量PCR检测IL-6、TNF-α、MMP-13和TIMP-1的mRNA表达水平。最后,通过透射电子显微镜观察软骨细胞中的自噬体。

结果:臭氧提高了IL-1β刺激的软骨细胞的细胞活力。通过激活AMPK/mTOR信号通路,臭氧处理改善了IL-1β刺激软骨细胞自噬水平的降低。此外,臭氧处理可抑制IL-1β刺激的软骨细胞中IL-6和TNF-αmRNA的表达水平。臭氧增加了IL-1β刺激的软骨细胞中TIMP-1的mRNA水平,降低了MMP-13的mRNA水平。

结论:这些结果表明,臭氧通过激活AMPK/mTOR信号通路,改善了IL-1β刺激的软骨细胞自噬水平的降低。此外,臭氧处理可抑制炎症反应,并有助于维持IL-1β刺激的软骨细胞的代谢平衡。

关键词:AMPK;自噬;软骨细胞;mTOR信号通路;骨关节炎;臭氧。

PubMed免责声明

利益冲突声明

披露作者报告在这项工作中没有利益冲突。

数字

图1
图1
大鼠软骨细胞培养及形态学观察。笔记:在体外培养的第3天,软骨细胞生长良好,并在倒置相差显微镜下观察。在倒置相差显微镜下,20×(一个)和40×(B类),软骨细胞附着在培养瓶壁上并扩散。清晰地观察到鹅卵石状外观(B类).
图2
图2
软骨细胞用抗II型胶原(col II)多克隆抗体染色。笔记:95%以上的培养细胞(第三代)在体外显示col II阳性表达。计算每个区域的col II阳性细胞数,并以细胞总数的百分比表示。每个治疗组随机评估至少15张显微照片,每个治疗组一式三份。
图3
图3
3MA或comC降低了IL-1β刺激和臭氧处理后软骨细胞中增加的细胞活力。笔记:(一个)用IL-1β(10 ng/mL)刺激软骨细胞24小时后,用不同剂量的臭氧处理不同的时间段,用30µg/mL臭氧处理30分钟后,CCK-8测定结果显示,IL-1β刺激软骨细胞的细胞活力提高。(B类)在没有或存在3MA(100 nM)的情况下,用臭氧(30µg/mL)处理用IL-1β(10 ng/mL)刺激的软骨细胞24小时,臭氧诱导的细胞活力改善被3MA减弱。(C类)用IL-1β(10 ng/mL)刺激软骨细胞24小时后,在没有或存在com C(5µM)的情况下,用臭氧(30µg/mL)处理软骨细胞,并且用com C减弱臭氧诱导的细胞活力的改善。数据表示为三个独立实验的平均值±SD*P(P)<0.05, **P(P)与对照组相比<0.01;#P(P)<0.05,##P(P)与IL-1β相比,<0.01。
图4
图4
臭氧诱导的自噬在IL-1β(10ng/mL)刺激的软骨细胞中的作用。笔记:用IL-1β处理细胞24小时,用或不用自噬抑制剂3MA(100 nM)预处理12小时。LC3 II水平(A、 C类)和P62(B、 D类)Western blotting和免疫荧光检测。数据以三个独立实验的平均值±标准差表示。
图5
图5
臭氧增加了IL-1β(10 ng/mL)刺激的软骨细胞中的自噬体,3MA和comC可阻断其自噬。笔记:箭头表示自噬体。数据来自三个独立的实验。
图6
图6
臭氧激活了IL-1β(10 ng/mL)刺激的软骨细胞中AMPK/mTOR信号通路,3MA抑制了这种作用。笔记:用IL-1β处理细胞24小时,用或不用自噬抑制剂3MA(100 nM)预处理12小时。p-AMPK水平(一个),p-mTOR(B类)和Beclin-1(C类)Western blotting法检测IL-1β刺激软骨细胞的表达。数据表示为三个独立实验的平均值±SD*P(P)<0.05, **P(P)与对照组相比<0.01;#P(P)<0.05,##P(P)与IL-1β相比,<0.01。
图7
图7
臭氧抑制IL-1β(10 ng/mL)刺激的软骨细胞中的炎症细胞因子。笔记:用IL-1β(10 ng/mL)处理细胞24小时,用或不用自噬抑制剂3MA(100 nM)预处理细胞12小时。IL-6的mRNA表达(一个)和TNFα(B类)用qRT-PCR检测IL-1β刺激软骨细胞的表达。数据表示为三个独立实验的平均值±SD*P(P)<0.05, **P(P)与对照组相比<0.01;#P(P)<0.05,##P(P)与IL-1β相比,<0.01。
图8
图8
臭氧激活了IL-1β刺激的软骨细胞AMPK/mTOR信号通路,这种作用被comC抑制。笔记:用IL-1β处理细胞24小时,用或不用AMPK抑制剂comC(5µM)预处理12小时。p-AMPK水平(一个),p-mTOR(B类)和ULK1(C类)和Bcl2/Bax比率(D类)Western blotting法检测IL-1β刺激软骨细胞的表达。数据表示为三个独立实验的平均值±SD*P(P)<0.05, **P(P)与对照组相比,P<0.01;#P(P)<0.05,##P(P)与IL-1β相比,<0.01。
图9
图9
臭氧诱导IL-1β(10 ng/mL)刺激的软骨细胞自噬,这种作用被comC阻断。笔记:细胞用IL-1β处理24小时,用AMPK抑制剂comC(5µM)预处理或不预处理12小时(A、 B类)和P62(C类)Western blotting和免疫荧光检测。数据表示为三个独立实验的平均值±SD*P(P)<0.05, **P(P)与对照组相比<0.01;#P(P)<0.05,##P(P)与IL-1β相比,<0.01。
图10
图10
臭氧抑制炎症细胞因子并调节软骨细胞代谢,这种作用被comC阻断。笔记:用IL-1β处理细胞24小时,用或不用AMPK抑制剂comC(5µM)预处理12小时。IL-6的mRNA表达(一个),肿瘤坏死因子-α(B类),基质金属蛋白酶-13(C类)和TIMP-1(D类)用qRT-PCR检测IL-1β刺激软骨细胞的表达。数据表示为三个独立实验的平均值±SD*P(P)<0.05, **P(P)与对照组相比<0.01;#P(P)<0.05,##P(P)与IL-1β相比,<0.01。

类似文章

引用人

工具书类

    1. Felson DT,Zhang Y.膝关节和髋关节骨关节炎流行病学的最新进展,以期预防。大黄性关节炎。1998;41(8):1343–1355.-公共医学
    1. Greene MA,Loeser RF。骨关节炎中与衰老相关的炎症。骨关节炎软骨。2015;23(11):1966–1971.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. 于德,徐杰,刘峰,王旭,毛毅,朱忠。骨关节炎软骨下骨变化及其对关节疼痛和关节软骨退变的影响。临床实验风湿病。2016;34(5):929–934.-公共医学
    1. Liu-Bryan R.炎症和细胞内代谢:OA的新靶点。骨关节炎软骨。2015;23(11):1835–1842.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Cawston T.基质金属蛋白酶和TIMP:特性和对风湿性疾病的影响。今天的Mol Med。1998;4(3):130–137.-公共医学