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.2019年2月；19(2):943-950.
doi:10.3892/mmr.2018.9714。 Epub 2018年12月3日。

浓缩生长因子渗出液在TNF‑α存在下促进人牙周膜细胞增殖

李晓菊 1, 杨惠孝 2, Zijian Zhang（张子建） 三, 中海燕 三, 吕虎龄 2, 张燕（音译） 4, 吴斌（Bin Wu） 1
附属公司

浓缩生长因子渗出液在TNF‑α存在下促进人牙周膜细胞增殖

李晓菊等。 分子医学代表. 2019年2月.

摘要

本研究旨在评估浓缩生长因子渗出液（CGFe）对肿瘤坏死因子（TNF）‑α刺激的人牙周膜细胞（hPDLCs）的影响。从健康献血者的外周血中，孵育7天后根据Sacco方案制备CGFe。通过组织块法培养hPDLC，并用抗波形蛋白和抗细胞角蛋白抗体进行鉴定。细胞接受四种不同的处理：i）对照；ii）肿瘤坏死因子‑α（10 ng/ml）；iii）CGFe（浓度50%）；和iv）CGFe+TNF‑α。用细胞计数试剂盒‑8测定hPDLC的增殖。通过茜素红S染色、碱性磷酸酶活性、蛋白质印迹和逆转录定量聚合酶链反应测定成骨分化和矿化。在TNF‑α诱导的炎症条件下，CGFe增强hPDLC中的细胞增殖并上调ALP活性、矿化水平、成骨相关骨钙素、runt‑相关转录因子2和Osterix基因表达。本研究表明，在TNF‑α‑诱导的炎症存在下，CGFe可增强hPDLC的增殖和成骨分化。由于CGFe可以从患者的静脉血中获得，因此不会产生免疫反应。因此，在临床牙周再生实践中使用CGFe比使用合成生长因子更经济、更有益。

关键词：浓缩生长因子渗出液；肿瘤坏死因子-α；人牙周膜细胞；成骨分化。

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数字

图1。
图1。
初级hPDLC的鉴定和表征。（A） 原代细胞从组织块中生长出来，（B）呈纺锤形。比例尺，200µm。（C） 免疫细胞化学染色显示细胞波形蛋白阳性，（D）细胞角蛋白阴性。比例尺，100µm。人牙周膜细胞。
图2。
图2。
CGFe增加hPDLC的增殖在体外CGFe可促进hPDLCs的增殖活性，但TNF-α可抑制hPDLCs的增殖活性。CGFe减轻了TNF-α的作用*P<0.05，**P<0.01。CGFe，浓缩生长因子渗出液；人牙周膜细胞；肿瘤坏死因子-α；外径，光密度。
图3。
图3。
CGFe增加hPDLC中的ALP活性。培养7或14天后，CGFe组的ALP活性显著高于对照组。与对照组相比，TNF-α组的ALP活性降低**P<0.01。CGFe，浓缩生长因子渗出液；人牙周膜细胞；肿瘤坏死因子-α；碱性磷酸酶；外径，光密度。
图4。
图4。
hPDLC的茜素红S染色。hDPLC培养在（A）MM、（B）MM+TNF-α、（C）MM+CGFe或（D）MM+GCFe+TNF--α（比例尺=200µm）中。在成骨诱导21天后，MM+CGFe组的矿化结节数量远大于其他三组。（E） 矿化结节数在成骨诱导14天后进行量化。与MM+CGFe+TNF-α组和对照组相比，MM+CG铁组矿化结节数量增加，对照（MM）组形成的矿化结节数量多于TNF-β组**P<0.01。MM，矿化诱导介质；CGFe，浓缩生长因子渗出液；人牙周膜细胞；TNF-α、肿瘤坏死因子-α。
图5。
图5。
CGFe增加成骨相关基因的表达。诱导成骨7或14天后，（A）的表达RUNX2（运行2），（B）OSX公司和（C）OCN公司采用逆转录定量聚合酶链反应检测。的表达式RUNX2（运行2）和OSX公司TNF-α组低于对照组。在第4天、第7天和第14天RUNX2（运行2）和OSX公司CGFe组高于对照组。OCN公司第4天，实验组之间的基因表达没有显著差异。到第7天，OCN公司CGFe组的表达开始超过对照组。培养14天后，OCN公司TNF-α的表达低于对照组**P<0.01。CGFe，浓缩生长因子渗出液；肿瘤坏死因子-α；RUNX2（运行2），runt-related转录因子2；OCN公司，骨钙素；OSX公司奥斯特里克斯。
图6。
图6。
CGFe增加RUNX和OSX蛋白表达。（A） 在不同培养条件下处理14天后，对RUNX2和OSX进行Western blot分析。GAPDH用于监测等蛋白样品装载量。（B） RUNX2和OSX蛋白表达的定量分析。RUNX2在CGFe组上调，在CGFe+TNF-α和TNF-β组下调。CGFe+TNF-α组OSX蛋白水平上调，但与对照组相比无显著上调**P<0.01；NS、CGFe+TNF-α组与对照组比较；##CGFe+TNF-α组与对照组比较P＜0.01。CGFe，浓缩生长因子渗出液；肿瘤坏死因子-α；RUNX2（运行2），runt-related转录因子2；OCN公司，骨钙素；OSX公司奥斯特里克斯。
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