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.2018年10月31日：11:7679-7690。
doi:10.2147/OTT。S173378。 2018年eCollection。

16-羟基硬化-3,13-二烯-15,16-内酯诱导人肾癌细胞失巢凋亡：参与局部黏附分解和信号传导

陈玉池 1, 黄步敏 2, 李伟昌 三, Yung-Chia Chen（陈永嘉） 三 4
附属机构

16-羟基cleroda-3,13-dien-15,16-olide诱导人肾细胞癌细胞失巢：参与局灶性粘附分解和信号传导

陈玉池等。 Onco目标Ther. .

摘要

背景：从长叶Polyalthia longifolia本斯&挂钩。f.变量。钟摆被发现是人类白血病、肺癌和结肠癌细胞中潜在的凋亡诱导剂。然而，肾脏系统的分子机制仍不清楚。因此，本研究探讨了CD-诱导透明细胞肾癌（ccRCC）细胞凋亡的调控机制。

材料和方法：通过集落形成试验和细胞周期分析评估细胞增殖。通过免疫荧光染色和Western blot分析检测局灶黏附（FA）相关复合物的蛋白表达。通过伤口愈合和Transwell分析测定肾细胞癌（RCC）细胞的迁移和侵袭能力。

结果：CD抑制细胞集落形成，诱导细胞在G2/M期停滞，并增加786-O和A-498中的亚G1细胞群。在CD治疗期间，观察到“圆形”细胞。磷酸化黏着斑激酶（pFAK）、维库林和帕西林的免疫染色显示FA被分解。此外，CD处理后肌动蛋白应激纤维被破坏。与研究结果一致，CD可下调pSrc、pFAK、FAK、vinculin、vimentin和paxillin的表达。此外，CD可减弱细胞迁移和侵袭活动，并伴有pNF-κB、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9和血管内皮生长因子表达的降低。

结论：CD诱导细胞周期阻滞、FA复合物分解和迁移相关信号通路失活，以诱导ccRCC细胞凋亡。

关键词：长叶Polyalthia longifolia；碾压混凝土；氯烷二萜；焦点粘附；入侵；迁移；肾细胞癌；信号通路。

PubMed免责声明

利益冲突声明

披露作者报告在这项工作中没有利益冲突。

数字

图1
图1
通过克隆形成试验检测CD处理后786-O和A-498细胞的繁殖能力。笔记：所示数字代表了一个实验**P（P）<0.01, ***P（P）与对照组（0µM组）相比<0.001。缩写：CD，16-羟基cleroda-3,13-二烯-15,16-内酯。
图2
图2
用0.1%二甲基亚砜或CD（10–40µM）处理细胞（786-O和A-498）24小时。笔记：用流式细胞术分析细胞周期分布。细胞周期不同阶段的细胞数量以百分比表示。显示流式细胞仪分析的代表性图像。结果显示为12个独立实验的平均值±SD*P（P）<0.05, **P（P）<0.01, ***P（P）与对照组（0µM组）相比<0.001。缩写：CD，16-羟基cleroda-3,13-二烯-15,16-内酯；二甲基亚砜。
图3
图3
(A类)CD-处理的RCC细胞中细胞周期蛋白、CDKs、p21和p53的免疫印迹。内部控制采用GAPDH。(B类)条形图显示了三到五个独立实验的密度测量数据（平均值±SD）。笔记：所示数字代表了一个实验*P（P）<0.05, **P（P）<0.01, ***P（P）与对照组（0µM组）相比<0.001。缩写：CD，16-羟基cleroda-3,13-二烯-15,16-内酯；CDK，细胞周期依赖性激酶；肾细胞癌。
图4
图4
(A类)用指示浓度的CD处理8小时和20小时的RCC细胞的划痕试验。(B类)用0.1%二甲基亚砜、10或20µM和40µM CD处理24小时的RCC细胞的跨阱迁移分析。比例尺=50µm。放大50倍。(C类)用0.1%二甲基亚砜或40µM CD处理24小时的RCC细胞基质侵袭试验。比例尺=50µm。放大100倍。笔记：条形图显示了三个独立实验中通过Transwell膜的细胞数量的量化*P（P）<0.05, **P（P）<0.01, ***P（P）与对照组（0µM组）相比<0.001。缩写：CD，16-羟基cleroda-3,13-二烯-15,16-内酯；二甲基亚砜；肾细胞癌。
图5
图5
用0.1%二甲基亚砜（对照）或40µM CD处理RCC细胞24小时。笔记：(A类)免疫荧光染色检测FA蛋白。应力纤维通过FITC-柱状体蛋白染色测定。(B类)条形图显示了四到八种不同盖玻片的密度测量数据。比例尺=50µm*P（P）<0.05, **P（P）<0.01，以及***P（P）<0.001.缩写：CD，16-羟基cleroda-3,13-二烯-15,16-内酯；二甲基亚砜；FA，焦点粘附；异硫氰酸荧光素；磷酸化黏着斑激酶；肾细胞癌。
图6
图6
(A类)FAK相关信号分子的免疫印迹。所示数字代表了一个实验。(B类)条形图显示了来自三个独立实验的密度测量数据（平均值±SD）。注：*P（P）<0.05, ***P（P）与对照组（0µM组）相比<0.001。缩写：CD，16-羟基cleroda-3,13-二烯-15,16-内酯；FAK，粘着斑激酶；pFAK，磷酸化粘着斑激酶。
图7
图7
(A类)CD-处理的RCC细胞中pNF-κB、MMPs和VEGF的免疫印迹。所示的数字代表了一个实验。(B类)条形图显示了来自三个独立实验的密度测量数据（平均值±SD）。注：*P（P）<0.05, **P（P）<0.01, ***P（P）与对照组（0µM组）相比<0.001。缩写：CD，16-羟基cleroda-3,13-二烯-15,16-内酯；基质金属蛋白酶；肾细胞癌；血管内皮生长因子。
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