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.2019年1月;29(1):54-66.
doi:10.1038/s41422-018-0104-9。 Epub 2018年11月13日。

植物HP1蛋白ADCP1将多价H3K9甲基化读数与异染色质形成联系起来

附属公司

植物HP1蛋白ADCP1将多价H3K9甲基化读数与异染色质形成联系起来

赵帅(Shuai Zhao)等。 单元格Res. 2019年1月.

摘要

异染色质蛋白1(HP1)通过其保守的色域识别组蛋白H3赖氨酸9甲基化(H3K9me),并维持从裂变酵母到哺乳动物的异染色素。然而,在拟南芥中,类异染色质蛋白1(LHP1)识别并与H3K27me3共定位全基因组,是Polycomb蛋白的功能同源物。这就提出了一个问题,即植物中是否存在真正的HP1同源物。在此,我们报道了在拟南芥中发现的ADCP1,一种植物特异性三串联Agenet蛋白,作为多价H3K9me读取器,并通过调节H3K9和DNA甲基化水平确定ADCP1对异染色质形成和转座子沉默至关重要。结构研究揭示了串联Agenet对ADCP1进行H3K9me特异性识别的分子基础。与人类HP1α和苍蝇HP1a类似,ADCP1介导异染色质相分离。我们的结果表明,尽管ADCP1具有不同的结构域组成,但它在植物中收敛地进化为HP1等效蛋白来调节异染色质的形成。

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数字

图1
图1
ADCP1的域结构和绑定属性。与H3K9me2肽结合的“王室”蛋白质的表面等离子体共振成像分析。200s-500s为联想期;500s-800s为解离相。b条ADCP1的域体系结构。c(c)H3(1-15)K9me1/2/3肽的ITC拟合曲线滴定到ADCP1的三个串联Agenet结构域。d日不同位点甲基化组蛋白肽的ITC拟合曲线滴定到ADCP1的三个串联Agenet结构域。e(电子)磷酸化组蛋白肽滴定到ADCP1三个串联Agenet结构域的ITC拟合曲线
图2
图2
ADCP1识别H3K9me2修改的结构基础。与H3(1-15)K9me2肽复合物中ADCP1-Agenet 3/4结构域的整体结构。b条ADCP1-Agenet 3/4结构域与H3(1-15)K9me2肽复合物的静电表面图。c(c)H3(1-15)K9me2肽与ADCP1-Agenet 3/4结构域的结合细节。d日ADCP1-Agenet结构域中H3K9me1/2修饰的结合囊。e(电子)H3(1-15)K9me2肽与ADCP1野生型和突变型Agenet结构域的ITC拟合曲线。N.D.,未检测到
图3
图3
ADCP1与H3K9me2异染色质直接相关。用pADCP1:ADCP1:GFP转基因植物对间期细胞核进行免疫染色。颜色显示DNA用DAPI(蓝色)、ADCP1-GFP(绿色)和H3K9me2(红色)复染。酒吧 = 2μm。b条ADCP1(黑色)和H3K9me2(红色)在5中的分布拟南芥染色体。灰色方框表示每条染色体的着丝粒周围区域。左y轴表示对数2ADCP1-GFP ChIP-seq信号与Col-0和右y轴的比值表示对数2Col-0中H3K9me2与H3 ChIP-seq信号的比率。用两个生物复制品的平均值绘制数据,并使用GraphPad Prism的LOESS方法进行平滑处理。c(c)选定染色体臂(chr3:9600-9800)和着丝粒周围区域(chr1:13900-14500)中ADCP1和H3K9me2信号的快照。H3K9me2和GFP ChIP-seq信号显示为每千基每百万映射读取数(RPKM)。列0中的GFP ChIP-seq显示为阴性对照。d日H3K9me2和ADCP1-ChIP-seq在ADCP1结合位点(顶部)和H3K9me2结合位点(底部)富集的热图。每行代表一个以峰值中点为中心的6-kb窗口。ADCP1和Col-0显示为日志2(GFP ChIP/输入),H3K9me2显示为对数2(H3K9me2/H3)。e(电子)H3K9me2标记区域ADCP1 ChIP-seq信号的Metaplots。(f)ADCP1富集峰中H3K9me2水平的Metaplot。g-h(克-小时)TEs中ADCP1 ChIP-seq信号的Metaplots()在蛋白质编码基因中(小时). 所有metaplot均用平均值绘制,阴影表示两个生物复制品的标准偏差
图4
图4
异染色质形成需要ADCP1。野生型Col-0的DAPI染色细胞核中去凝聚、部分去凝聚(中间)或野生型色心的相对频率,自动数据处理程序突变体和ADCP1/ADCP1M互补植物。N个 = 150.左侧显示了DAPI染色的典型核凝结状态。酒吧 = 2微米。b条35的瞬时表达S: ADCP1:GFP或35S: ADCP1M:Col-0原生质体和suvh456型.14之后原生质体转化h,观察到GFP信号(绿色显示,DAPI为蓝色)。酒吧 = 2微米。c(c)H3K9me2在Col-0和adcp1型突变体。d日Col-0中的H3K9me2免疫染色,自动数据处理程序突变体和ADCP1/ADCP1M互补植物。酒吧 = 2微米。e(电子)小组中H3K9me2免疫染色的定量d日,强度归一化为核区域。N个 = 50.黑线代表平均值±红色圆圈和灰色圆圈是两个独立的实验。P(P)报告了单向方差分析的值。对所有数据进行三次生物复制
图5
图5
ADCP1调节H3K9me2和CHG/CHH甲基化水平以及TE沉默。TEs(左)中H3K9me2水平和Col-0中蛋白质编码基因(PCG,右)的Metaplotadcp1-1阴影是指两个生物复制品的标准偏差。b条d日CG甲基化的Metaplots(b条),CHG公司(c(c))和CHH(d日)在TEs中。e(电子)上调TEs中H3K9me2水平的Metaplot。所有元图都用平均值绘制。阴影是指两个生物复制品的标准偏差。(f)三个选定转座子元件的所有测序数据的快照。ChIP-seq和RNA-seq信号显示为RPKM,DNA甲基化显示为甲基化胞嘧啶与所有胞嘧啶的比率。,小时验证Col-0中选定的上调TEs,自动数据处理程序RT-qPCR检测突变体和ADCP1/ADCP1M互补植株。用AT3TE6809引物和负RT(-RT)模板进行PCR,作为阴性对照。到的相对表达式UBC公司GAPDH公司该基因被归一化为Col-0中的基因。数据显示为日志2(折叠变化 + 1) 。误差线表示6个重复的标准偏差,包括2个生物重复和3个技术重复。圆圈代表原始数据。统计分析采用单因素方差分析,P(P) < 0.0001(****)
图6
图6
ADCP1驱动多价H3K9me3核小体阵列相分离。ADCP1全长、Agenet结构域1-4和Agenet域3-6蛋白的相分离 = 20微米。b条native,H3K9me3和H3K9 me3S10A NA,bar的电子显微镜图像 = 100纳米。c(c)HP1A、HP1α与H3K9me3 NA形成的液滴。HP1A和HP1α用Alex 568标记,而NA用DAPI拉紧。酒吧 = 20微米。d日ADCP1与H3K9me3 NA的相分离。ADCP1用Alex 488标记,NA用DAPI拉紧。酒吧 = 20微米。e(电子)相分离的浓度依赖性。酒吧 = 20微米。显示Alex 488荧光和DAPI染色的合并图像。(f)液滴的FRAP。用488激光漂白五个液滴,并记录回收率。对五个液滴中的一个进行了成像,以显示动态。Aurora B用ADCP1处理H3K9me3 NA和H3K9 me3S10A NA的相分离。酒吧 = 20微米。小时极光B治疗前后H3K9me3 NA的蛋白质印迹

中的注释

  • ADCP1:一种新型植物H3K9me2阅读器。
    Harris CJ、Jacobsen SE。 Harris CJ等人。 Cell Res.2019年1月;29(1):6-7. doi:10.1038/s41422-018-0119-2。 2019年细胞研究。 PMID:30514899 免费PMC文章。 没有可用的摘要。

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