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.2018年11月9日；37(1):272.
doi:10.1186/s13046-018-0935-8。

衣霉素通过抑制N-糖基化特异性加重内质网应激并克服多药耐药胃癌细胞的耐药性

吴健 1, 盛晨（Sheng Chen） 1, 郝刘 1, Zhe Zhang（张哲） 1, 甄妮 1, 陈杰（音译） 1, 杨志平 1, 聂永战 2, 戴明风扇 3
附属公司

衣霉素通过抑制N-糖基化特异性加重内质网应激并克服多药耐药胃癌细胞的耐药性

吴健等。 实验临床癌症研究杂志. .

摘要

背景：多药耐药仍然是胃癌患者成功治疗的主要障碍。最近，糖基化被证明在获得多药耐药性中起着重要作用。作为一种有效的糖基化抑制剂，衣霉素（Tu）在多种癌症中显示出显著的抗肿瘤活性。在本研究中，我们试图确定Tu对GC耐药性的确切影响。

方法：通过细胞活性测定评价药物对GC细胞的细胞毒作用，并通过流式细胞术检测细胞凋亡。采用PCR、western blot分析、免疫荧光染色和典型抑制剂来确定Tu对多药耐药（MDR）GC细胞特异性作用的潜在机制。

结果：我们首次发现，MDR GC细胞比亲本细胞对Tu诱导的细胞死亡更敏感，并且敏感性增加可能与基底内质网（ER）应激有关。此外，Tu通过引起GC细胞，尤其是MDR细胞的内质网应激，显著增加化疗诱导的凋亡。进一步的研究表明，这些作用高度依赖于Tu的糖基化抑制，而不是其作为典型ER应激诱导剂的作用。此外，Tu可显著触发自噬，阻断自噬可增强Tu和化疗对MDR GC细胞的联合作用。

结论：我们的结果表明，肿瘤靶向糖基化抑制可能是逆转GC患者化疗耐药性的可行策略。

关键词：自噬；内质网应激；胃癌；糖基化；多药耐药；土霉素。

PubMed免责声明

利益冲突声明

道德批准和参与同意

不适用。

出版同意书

不适用。

竞争性利益

作者声明，他们没有相互竞争的利益。

出版商备注

Springer Nature在公布的地图和机构关联中的管辖权主张方面保持中立。

数字

图1
图1
衣霉素对MDR GC细胞具有强烈的细胞毒性作用，这与基础内质网应激有关。一CCK-8检测Tu处理48 h后的细胞存活率。Tu，衣霉素。未治疗组的值被确定为基线，即100%生存率。b条未经治疗的细胞内质网应激相关蛋白的表达。β-actin作为负荷控制。所有蛋白质均归一化为β-肌动蛋白。内质网；7901、SGC7901；ADR，SGC7901/ADR；录像机，SGC7901/VCR；823，BGC823；45，MKN45；GES，人永生化胃上皮细胞系
图2
图2
衣霉素通过诱导内质网应激，以时间/剂量依赖的方式优先导致MDR GC细胞死亡。一CCK-8检测Tu处理24/48/72 h后GC细胞的存活率。ns，不显著*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01***P（P） < 0.001, ****P（P） < 0.0001（绿色，VCR对7901；红色，ADR对7901.）。b条Tu处理48 h后GC细胞内质网应激相关蛋白的表达。所有蛋白质均归一化为β-肌动蛋白。c（c）Tu（0.8μg/ml）治疗48h后，用免疫荧光（IF）检测SGC7901和SGC7901/ADR中Bip和CHOP的表达。（400×；比例尺，50μm）
图3
图3
霉素通过加重内质网应激和增强细胞凋亡来增加化疗诱导的细胞死亡。一单药（Adr）或双药（Adr-Tu）治疗48小时后，用CCK-8测定GC细胞存活率。阿霉素；Tu浓度为0/0.2/0.4/0.8μg/ml.ns，无显著性差异*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01, ***P（P） < 0.001, ****P（P） < 0.0001（绿色，+Tu 0.2与标准；红色，+Tu0.4与标准；蓝色，+Tu0.8与标准）。b条流式细胞术检测凋亡细胞。细胞在凋亡检测前48 h接受单药治疗（Adr，SGC7901和SGC7901/Adr分别为0.25/8μg/ml）或双药治疗（Adr，与前者相同；Tu，两者均为0.8μg/ml）。ns，不显著***P（P） < 0.001, ****P（P） < 0.0001. 相应的FCM图如附加文件7：图S6所示。c（c）通过PCR阵列检测SGC7901/ADR中UPR相关基因的变化（双治疗组与单治疗组）。A&T组，Adr（8μg/ml）和Tu（0.8μg/ml；组（A），Adr（8μg/ml）单药治疗48 h，对照组。彩色圆点代表过表达或表达不足的基因；黑点代表不变的基因。P（P） < 0.05.d日WB测定SGC7901和SGC7901/ADR中UPR和凋亡信号相关蛋白的表达。在提取蛋白之前，细胞接受与上述相同的处理（3b）。所有蛋白质均归一化为β-肌动蛋白。e（电子）单药或双药治疗48小时后，IF检测SGC7901/ADR中CHOP、Cl-PARP和Cl-caspase 3的表达水平。药物浓度与3c相同。（400×；比例尺，50μm）
图4
图4
Thapsigargin不能模拟衣霉素对MDR GC细胞的作用。一经Tg或Tu（宽剂量范围）处理48 h的GC细胞浓度-存活曲线。Tg，thapsigargin公司。b条WB测定Tg处理（2μg/ml）48 h后GC细胞中UPR-相关蛋白的表达。所有蛋白质均归一化为β-肌动蛋白。c（c）Tg处理48小时后对GC细胞化学敏感性的影响。ns，不显著*P（P） < 0.05, **P（P） < 0.01, ***P（P） < 0.001, ****P（P） < 0.0001（绿色/红色，与标准值相比分别为+Tg 0.5/2）
图5
图5
Tu诱导的自噬可拮抗Tu对MDR GC细胞的化学增敏作用。一WB检测到Tu（0.8μg/ml）处理48 h后GC细胞中LC3 II和P62的表达。所有蛋白质均被标准化为β-肌动蛋白。b条用IF检测Tu（0.8μg/ml）处理48 h后GC细胞中LC3 II的表达。（400×；比例尺，50μm）c（c）CCK-8检测自噬阻断对GC细胞存活的影响。HCQ，羟基氯喹；Tu，0.8μg/ml；HCQ，25μM；Adr，7901为0.25μg/ml，Adr为8μg/ml。在CCK-8试验之前，细胞接受48小时的处理****P（P） < 0.0001.d日流式细胞术测定自噬阻断对GC细胞凋亡的影响。治疗方法与5c相同****P（P） < 0.0001.e（电子）处理48小时后GC细胞自噬和凋亡信号相关蛋白的表达水平。治疗方法与5c相同。所有蛋白质均归一化为β-肌动蛋白
图6
图6
示意图说明了Tu在MDR GC细胞中作用的假设机制。如前所述，糖基化异常导致化疗耐药。例如，MDR细胞中某些类型的糖基化上调[13，14]。此外，糖基化失调导致MDR GC细胞的基础内质网应激。Tu通过抑制N-糖基化进一步加剧内质网应激，内质网过度应激随后激活凋亡信号，在一定程度上降低了MDR细胞的耐药性。然而，内质网应激引发的自噬部分抑制了Tu的诱导凋亡作用
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