Salvianolic Acid B Promotes the Survival of Random-Pattern Skin Flaps in Rats by Inducing Autophagy

doi:10.3389/fphar.2018.01178

.2018年10月23日：9:1178。

doi:10.3389/fphar.2018.01178。 2018年eCollection。

丹酚酸B通过诱导自噬促进大鼠随机型皮瓣的存活

金体林^1 2 三, 林仁进（Renjin Lin）^1 2 三, 李世亨^1 2 三, 吴洪强^1 2 三, 建鼎^1 2 三, 广亨祥^1 2 三, 史丽^1 2 三, 王一如⁴, 林定生^1 2 三, 魏阳高^1 2 三, 孔建忠^1 2 三, 徐华子^1 2 三, 周开良^1 2 三

附属公司

¹温州医科大学附属第二医院和育英儿童医院骨科，温州，中国。
²浙江省骨科重点实验室，温州，中国。
^三温州医科大学第二临床医学院，中国温州。
⁴温州中医院神经内科，温州，中国。

PMID： 30405410
预防性维修识别码： PMC6206168型
内政部： 10.3389/fphar.2018.01178

丹酚酸B通过诱导自噬促进大鼠随意型皮瓣存活

金体林等。前沿药理学. 2018.

.2018年10月23日：9:1178。

doi:10.3389/fphar.2018.01178。 2018年eCollection。

作者

金体林^1 2 三, 林仁锦^1 2 三, 李世亨^1 2 三, 吴洪强^1 2 三, 建鼎^1 2 三, 广亨祥^1 2 三, 史丽^1 2 三, 王一如⁴, 林定生^1 2 三, 魏阳高^1 2 三, 孔建忠^1 2 三, 徐华子^1 2 三, 周开良^1 2 三

附属公司

¹温州医科大学附属第二医院和育英儿童医院骨科，温州，中国。
²浙江省骨科重点实验室，温州，中国。
^三温州医科大学第二临床医学院，温州，中国。
⁴温州中医院神经内科，温州，中国。

PMID： 30405410
预防性维修识别码： PMC6206168型
内政部： 10.3389/fphar.2018.01178

摘要

随机化皮瓣移植是整形外科和重建外科常用的方法。然而，皮瓣的远端经常由于局部缺血而坏死。本研究评估丹酚酸B（Sal B）对皮瓣存活的影响，并探讨其潜在机制。7天后，Sal B改善了存活面积，减少了组织水肿，增加了皮瓣中的微血管数量，而自噬抑制剂（3-甲基腺嘌呤）逆转了Sal B诱导的皮瓣存活率增加。此外，Sal B刺激血管生成，抑制凋亡，减少氧化应激，上调缺血区域的自噬。此外，Sal B对血管生成、凋亡和氧化应激的影响通过自噬抑制被逆转。总的来说，我们的研究结果表明，Sal B通过刺激自噬而具有促血管生成、抗凋亡和抗氧化应激作用，从而提高了随机模式皮瓣的存活率。

关键词：血管生成；细胞凋亡；自噬；氧化应激；随意皮瓣；丹酚酸B。

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数字

图2
Sal B促进缺血随意皮瓣的血管生成。于术后第7天处死大鼠，取皮瓣区II中部的样本进行分析。**（A，C）**对照组和Sal B组皮瓣VEGF和钙粘蛋白5表达的IHC（原始放大倍数：200×；比例尺：50μm）。**（B）**,D）血管内皮生长因子（VEGF）和钙粘蛋白5（cadherin 5）的光密度值直方图。**（E）**–G）对照组和Sal B组皮瓣MMP9、VEGF和钙粘蛋白5水平的Western blotting，以GAPDH作为内部对照进行校正。凝胶在相同的实验条件下运行。原始图像见补充图S1A。**（H）**–J）通过蛋白质印迹测定的两组MMP9、VEGF和钙粘蛋白5的光密度值的直方图。^∗第页<0.05和^∗∗第页与对照组相比<0.01。数据为平均值±SEM(n个=每组6人）。

图3
Sal B抑制随机皮瓣的凋亡。于术后第7天处死大鼠，取皮瓣区II中部的样本进行分析。**（A）**Caspase 3在对照组和Sal B组皮瓣中的表达，通过IHC进行评估（原始放大倍数：200×；比例尺：50μm）。**（B）**IHC法检测Caspase 3表达的光密度值直方图。**（C）**–E）Bax、CYC和caspase 3蛋白水平的Western blotting分别由GAPDH校正为内部对照。凝胶在相同的实验条件下运行。原始图像见补充图S1B。**（F）**–H）通过Western blotting测定的Bax、CYC和caspase 3的光密度值直方图。^∗第页<0.05和^∗∗第页与对照组相比<0.01。数据为平均值±SEM(n个=每组6人）。

图4
Sal B可减少随意皮瓣的氧化应激。于术后第7天处死大鼠，取皮瓣区II中部的样本进行分析。**（A）**通过IHC评估对照组和Sal B组皮瓣中SOD1的表达（原始放大倍数：200×；比例尺：50μm）。**（B）**IHC测定的SOD1光密度值直方图。**（C–E）**SOD1、eNOS和HO1蛋白水平的Western blotting分别由GAPDH校正为内部对照。凝胶在相同的实验条件下运行。原始图像见补充图S1C。**（F–H）**通过Western blotting测定的SOD1、eNOS和HO1的光密度值直方图。**（一）**黄嘌呤氧化酶法测定总SOD活性。**（J）**改进的5,5′-二硫代双[2-硝基苯甲酸]法测定GSH水平。**（K）**改良硫代巴比妥酸试验测定MDA水平。^∗第页<0.05和^**第页与对照组相比<0.01。数据为平均值±SEM(n个=每组6人）。

图5
Sal B激活随机皮瓣中的自噬。于术后第7天处死大鼠，取皮瓣区II中部的样本进行分析。**（A）**采用LC3II免疫荧光染色法检测皮瓣自噬水平：各组Ⅱ区真皮自噬体（绿色）；细胞核用DAPI（蓝色）复染（标尺：15μm）。**（B）**LC3II阳性细胞的频率直方图。**（C）**通过IHC表达CTSD（原始放大倍数：200×；比例尺：50μm）。**（D）**Western印迹法估计随机皮瓣的CTSD水平。**（E、F）**Beclin1、LC3II、CTSD、VPS34和p62水平分别通过Western blotting检测，并由GAPDH校正为内部控制。凝胶在相同的实验条件下运行。原始图像见补充图S1D。**（G）**通过Western blotting测定的Beclin1、LC3II、CTSD、VPS34和p62表达的光密度值直方图。^∗第页<0.05和^∗∗第页与对照组相比<0.01。数据为平均值±SEM(n个=每组6人）。

图6
抑制自噬可逆转Sal B在随机皮瓣中的作用。于术后第7天处死大鼠，取皮瓣区II中部的样本进行分析。**（A）**用LC3II免疫荧光染色法测定皮瓣自噬水平：各组Ⅱ区真皮中自噬体（绿色）；细胞核用DAPI（蓝色）复染（标尺：15μm）。**（B）**真皮中LC3II阳性细胞的频率直方图。**（C）**Beclin1、VPS34、CTSD、LC3II和p62水平以及MMP9、VEGF和钙粘蛋白5水平的Western blotting，由GAPDH校正为内部对照。凝胶在相同的实验条件下运行。原始图像见补充图S2A、B。**（D）**通过Western blotting评估自噬（Beclin1、VPS34、CTSD、LC3II和p62）和血管生成（MMP9、VEGF和钙粘蛋白5）相关蛋白的光密度值直方图。**（E）**Bax、CYC和caspase 3水平以及SOD1、eNOS和HO1水平的Western blotting，由GAPDH校正为内部对照。原始图像见补充图S2C、D。**（F）**通过Western blotting测定的凋亡-（Bax、CYC和caspase 3）和氧化应激相关蛋白（Bax，CYC，和caspase-3）的光密度值直方图。**（G）**黄嘌呤氧化酶法测定总SOD活性。**（H）**用改良的5,5′-二硫代双[2-硝基苯甲酸]法测定GSH水平。**（一）**改良硫代巴比妥酸试验测定MDA水平。^∗第页<0.05和^∗∗第页与对照组相比<0.01。数据为平均值±SEM(n个=每组6人）；NS，不显著。

图7
抑制自噬可逆转Sal B对皮瓣活力的影响。**（A）**术后第3天和第7天，对照组和Sal B组皮瓣存活的数字照片（比例尺：2 cm）。**（B）**术后第7天皮瓣存活面积百分比的直方图。**（C）**术后第7天各组皮瓣内侧的数字照片显示水肿程度（比例尺：2 cm）。**（D）**皮瓣组织含水量百分比直方图。**（E）**LDBF成像显示术后第7天皮瓣的血管流动和血供（比例尺：2 cm）。**（F）**血液供应面积百分比直方图。**（G）**皮瓣Ⅱ区微血管H&E染色（原始放大倍数：200×；比例尺：50μm）。**（H）**H&E染色确定的MVD直方图。**（一）**皮瓣Ⅱ区CD34的IHC（原始放大倍数：200×；比例尺：50μm）。**（J）**CD34阳性血管密度直方图。^∗第页<0.05和^∗∗第页与对照组相比<0.01。数据为平均值±SEM(n个=每组6个）。

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