跳到主页面内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2019年1月；23(1):237-259.
doi:10.1111/jcmm.13914。 Epub 2018年10月28日。

5-氮杂环乙胺和白藜芦醇通过调节线粒体动力学和自噬逆转脂肪干细胞的衰老

卡塔兹娜·科尔尼卡 1, Jolanta Szłapka-Kosarzewska公司 1, 阿格涅斯卡·米塞克 1, Krzysztof Marycz公司 1 2
附属公司

5-氮杂环乙胺和白藜芦醇通过调节线粒体动力学和自噬逆转脂肪干细胞的衰老

卡塔兹娜·科尔尼卡等。 细胞与分子医学杂志. 2019年1月.

摘要

肥胖和内分泌失调已经成为人类和兽医领域的普遍问题。马代谢综合征是一种涉及代谢交替和慢性全身炎症的复杂疾病。研究表明，炎症脂肪组织的不利微环境对其内的脂肪干细胞群（ASC）产生负面影响，显著限制了其治疗潜力。ASC公司邮政特快专递其特征是衰老、凋亡加剧、活性氧（ROS）过度积累、线粒体退化和“自噬通量”。本研究的目的是评估ASCs的治疗邮政特快专递联合使用5-氮杂胞苷（AZA）和白藜芦醇（RES）可以逆转这些细胞的老化表型。为此，我们进行了以下分析：分子生物学（RT-PCR）、显微镜（免疫荧光、TEM）和流式细胞术（JC-1、ROS、Ki67）。我们评估了线粒体状态、动力学和清除以及自噬途径。此外，我们通过测量TET基因的表达和DNA甲基化状态分析，研究了处理细胞中的表观遗传变化。我们已经证明AZA/RES治疗ASC邮政特快专递能够通过调节线粒体动力学，特别是通过促进线粒体融合而非分裂，使这些细胞再生。AZA/RES治疗后，ASCs邮政特快专递其特点是增殖速率增加，凋亡和衰老减少，ROS积累减少。我们的发现为AZA/RES改善干细胞功能障碍的有益作用提供了一种新的方法和潜在的靶点。

关键词：脂肪间充质干细胞；自噬；代谢综合征；线粒体；有丝分裂；干细胞。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
免疫表型和多能性分析。流式细胞术分析的代表性点图（A）。在对照组和AZA公司/皇家经济学会补充培养基。分离细胞的特征是表达光盘90和光盘44，而缺乏光盘45造血标志物（B）。通过三系分化（C）证实了分离细胞的多潜能。为了确认软骨形成过程中蛋白聚糖的形成，用藏红O染色细胞。用油红O观察细胞内脂滴，用茜素红观察成骨过程中矿化基质的形成。放大倍数×100，标尺：250μm。结果表示为平均值±标准偏差将结果与ASC公司CTRL键，与进行比较时作为hashtag（#）ASC公司邮政特快专递. ###P（P） < 0.001
图2
图2
对照组和对照组培养的细胞的生长动力学和形态学AZA公司/皇家经济学会（在两种不同浓度下-ASC公司邮政特快专递 我和ASC公司邮政特快专递 二分别）条件。为了进行分析，细胞培养24小时并进行进一步分析。细胞核染色（Hoechst 33258）和肌动蛋白染色（指骨样蛋白）显示ASC公司邮政特快专递其特征是细胞核增大（黄色箭头，A），细胞体扁平、展开，并有可见的应力纤维（红色箭头，B）。然而，用AZA公司/皇家经济学会减少衰老细胞的发生。扫描电镜分析显示，对照细胞(ASC公司CTRL键)分泌大量的微泡（用黑色箭头表示，A），并显示出称为丝足的形成长细胞骨架突起（用蓝色箭头表示，A）。相反，分泌中压s由ASC公司邮政特快专递被妥协了。值得注意的是，在有AZA公司/皇家经济学会分泌增加中压观察到丝状伪足的形成。使用基于resazurin的分析，培养24小时后建立细胞增殖（B）。CFU（循环流化床）‐E分析显示组（C）之间由50个以上细胞组成的菌落百分比。用流式细胞仪和抗Ki67染色（D）建立细胞增殖。获得的结果证实AZA公司/皇家经济学会治疗显著诱导ASC公司邮政特快专递.放大倍数×100，比例尺：250μm。结果以平均值±表示标准偏差将结果与ASC公司CTRL键，与进行比较时作为hashtag（#）ASC公司邮政特快专递. #,*P（P） < 0.05; ##P（P） < 0.01; ###, ***P（P） < 0.001
图3
图3
阿扎/皇家经济学会逆转衰老和减少细胞凋亡ASC公司邮政特快专递为了评估培养细胞的凋亡，在对照组或实验组中培养24小时(AZA公司/皇家经济学会)条件。接下来，对细胞进行染色程序和RT公司‐聚合酶链反应分析。为了观察培养物中活细胞和死细胞，应用钙蛋白A和碘化丙啶染色（A）。此外，通过β-半乳糖苷酶染色（A）观察培养物中的衰老细胞。此外，对从代表性照片中获得的数据进行了量化（B和C）。显示的结果显示AZA公司/皇家经济学会处理显著减少了死亡和衰老细胞的数量。细胞凋亡的发生率也用RT公司‐聚合酶链反应用于p53（D）、p21（E）和Caspase‐9（F）。细胞周期分析的代表图（G）。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（H）和酶联免疫吸附试验对于p53（I），放大倍数×100，比例尺：250μm。结果表示为平均值±标准偏差将结果与ASC公司CTRL键，与进行比较时作为hashtag（#）ASC公司邮政特快专递. *P（P） < 0.05; ##, **P（P） < 0.01; ###, ***P（P） < 0.001
图4
图4
AZA公司/皇家经济学会治疗改善了线粒体状况并减少了ROS公司在中积累ASC公司邮政特快专递为了研究细胞中的氧化应激，将其在对照或实验条件下培养24小时，并进行进一步分析。基质金属蛋白酶使用JC公司流式细胞术检测1个探针（A）。基质金属蛋白酶去极化ASC公司邮政特快专递年明显逆转ASC公司邮政特快专递 二（B） ●●●●。细胞内ROS公司水平用H2染色加拿大食品药品监督管理局流式细胞仪检测。结果分别显示在直方图（A）中。AZA公司/皇家经济学会治疗显著减少ROS公司生产ASC公司邮政特快专递（C） ●●●●。通过分光光度法测定细胞的抗氧化性能草地活动（D）。ASC公司邮政特快专递 二酶活性增强。使用RT公司‐聚合酶链反应对miR‐24的数量进行了评估（E）。透射电镜分析显示ASC公司邮政特快专递然后它反转AZA公司/皇家经济学会治疗（F）。方框区域被放大并显示在左侧。根据代表性照片，对异常线粒体进行量化（G）。线粒体分裂用RT公司‐聚合酶链反应对于FIS公司（H） 而有丝分裂是通过测量粉红色（一） 和停车场（J） ●●●●。此外，我们确定AZA公司/皇家经济学会Mief1（K）和Mief2（L）表达减少。此外，使用蛋白质印迹量MFF公司,多国部队,粉红色已调查（M）。在处理过的细胞中，AZA公司/皇家经济学会线粒体分裂和有丝分裂均得到缓解。比例尺：1μm。结果表示为平均值±标准偏差将结果与ASC公司CTRL键，与进行比较时作为hashtag（#）ASC公司邮政特快专递. #P（P）<0.05；##**P（P） < 0.01; ###, ***P（P） < 0.001
图5
图5
AZA公司/皇家经济学会治疗减少了自噬体和自溶体的形成ASC公司邮政特快专递为了研究所研究细胞的自噬，将其在对照组或AZA公司/皇家经济学会补充培养基24小时。使用RT公司‐聚合酶链反应，的表达式信用证对3（A）、Beclin（B）、p62（C）和miR‐519d（D）进行评估。自噬体和自溶体的形成用透射电镜成像（用黄色箭头指示）（E）。获得的结果表明，自噬通量ASC公司邮政特快专递与自噬水平相似ASC公司CTRL键线粒体和抗灯2，我们观察了所研究细胞（F）的有丝分裂。合并的照片显示ASC公司邮政特快专递（F） ●●●●。反过来，在AZA公司/皇家经济学会治疗。阳性细胞百分比灯流式细胞术（G）建立2。这些结果得到了无线电发射‐聚合酶链反应对于灯2以及（H）。比例尺：20μm。结果表示为平均值±标准偏差将结果与ASC公司CTRL键，与进行比较时作为hashtag（#）ASC公司邮政特快专递. #, *P（P） < 0.05; ##, **P（P） < 0.01; ###, ***P（P） < 0.001
图6
图6
AZA公司/皇家经济学会降低急诊室中的应力ASC公司邮政特快专递为了评估急诊室在压力下，细胞在对照组或AZA公司/皇家经济学会补充培养基。急诊室形态学使用透射电镜（A） 获得的结果显示急诊室中断ASC公司邮政特快专递（肿胀、碎裂急诊室用黑色箭头指示）。与之相比ASC公司CTRL键,ASC公司邮政特快专递以增强CHOP公司（B） 和PERK公司（C） 尽管如此，表达AZA公司/皇家经济学会减少PERK公司中的表达式ASC公司邮政特快专递 二此外，AZA公司/皇家经济学会治疗增加了红外（D） 英寸ASC公司邮政特快专递 二.获得的结果表明AZA公司/皇家经济学会减少容量急诊室压力和增大红外表达式。比例尺：400纳米。结果表示为平均值±标准偏差将结果与ASC公司CTRL键，与进行比较时作为hashtag（#）ASC公司邮政特快专递. #, *P（P） < 0.05; ##, **P（P） < 0.01
图7
图7
阿扎/皇家经济学会减少细胞凋亡和自噬ASC公司邮政特快专递通过抑制线粒体分裂。为了揭示潜在的机制AZA公司/皇家经济学会对细胞的有益影响，在对照组中培养，AZA公司/皇家经济学会和/或线粒体分裂抑制剂‐MDIVI公司‐，补充培养基。24小时后，培养细胞接受无线电发射‐聚合酶链反应,透射电镜共聚焦分析。使用RT公司‐聚合酶链反应p53（A）、p21（B）、p62（C）、，粉红色（D） 和最惠国待遇（E） 进行了分析。线粒体动力学和线粒体网络的形态通过透射电镜共聚焦显微镜（MitoRed染色）（F）。盒状区域扩大并呈现在线粒体染色下方，以可视化线粒体网络的形状。获得的结果表明AZA公司/皇家经济学会抑制处理细胞中线粒体分裂和调节自噬的结果。比例尺：透射电镜：5μm，共焦：20μm。结果表示为平均值±标准偏差将结果与ASC公司CTRL键，与进行比较时作为hashtag（#）ASC公司邮政特快专递. #, *P（P）<0.05；##**P（P） < 0.01; ###, ***P（P） < 0.001
图8
图8
AZA公司/皇家经济学会治疗使人恢复活力ASC公司邮政特快专递通过后生交替。在对照和AZA公司/皇家经济学会补充培养基，进行流式细胞术、免疫荧光和RT公司‐聚合酶链反应分析。为了评估5mC的水平，使用流式细胞术（A）分析细胞。所得结果表明：AZA公司/皇家经济学会显著减少DNA处理细胞中的甲基化（B）。的表达式TET公司2（C），TET公司3（D）和挪威船级社1（E）由检查RT公司‐聚合酶链反应此外挪威船级社1用免疫荧光（F）检测。比例尺：20μm。结果表示为平均值±标准偏差将结果与ASC公司CTRL键，与进行比较时作为hashtag（#）ASC公司邮政特快专递. *P（P） < 0.05; ##, **P（P） < 0.01; ***P（P） < 0.001
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Thatcher CD、Pleasant RS、Geor RJ等。弗吉尼亚州西南部成年马夏季过度调节的患病率。兽医实习医学杂志，2012年；26:1413‐1418.-公共医学
    1. Morgan RA、Keen JA、Walker BR等。内分泌性椎板炎马的血管功能障碍。《公共科学图书馆·综合》。2016;11:e0163815。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Marycz K、Michalak I、Kornicka K。预防马代谢综合征的先进营养和干细胞方法。研究兽医科学。2018;118:115‐125.-公共医学
    1. Geor RJ，McCue ME，Schultz N.马代谢综合征表型的当前认识。马兽医科学杂志。2013;33:841‐844.
    1. Marycz K、Kornicka K、Szlapka‐Kosarzewska J等。内质网应激与肝脏和脂肪组织中线粒体动力学、有丝分裂和凋亡受损相关，但与EMS马的肌肉无关。国际分子科学杂志。2018;19:165.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语

关联数据