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.2018年10月；16(4):2821-2830.
doi:10.3892/etm.2018.6536。 Epub 2018年7月27日。

CYP24A1缺失促进维生素D3对甲状腺癌细胞的抗肿瘤作用

宁虎 1, 张浩（Hao Zhang） 2
附属公司

CYP24A1缺失促进维生素D3对甲状腺癌细胞的抗肿瘤作用

宁虎等。 实验治疗学. 2018年10月.

摘要

已经证明25-羟基维生素-D3-24-羟化酶（CYP24A1）是中和维生素D活性的关键酶，可能具有抗肿瘤作用。因此，本研究的目的是探讨维生素D的活性代谢物1,25-二羟维生素D（1,25-D3）在CYP24A1下调后对甲状腺癌细胞的影响。一项细胞计数试剂盒-8分析表明，CYP24A1敲除增强了1,25-D3对甲状腺癌细胞的抗增殖作用。此外，划痕和Transwell实验结果表明，CYP24A1敲除增强了1,25-D3对细胞迁移的抑制作用。逆转录定量聚合酶链反应和western blot分析的结果表明，1,25-D3和CYP24A1敲除协同增强上皮相关基因E-cadherin的表达，降低间质相关基因N-cadherin和vimentin的表达。在CYP24A1基因敲除和1,25-D3治疗后，与单独使用25-D3的治疗组相比，基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶抑制剂1的表达分别显著降低和增加。此外，与单独接受1,25-D3治疗的组相比，这种协同作用显著降低了蛋白激酶B（Akt）和β-catenin活性。当前研究的结果表明，CYP24A1敲除有助于1,25-D3的抗肿瘤作用，这种作用可能是由于Akt和β-catenin信号通路的失活所致。因此，CYP24A1敲除和1,25-D3治疗可能作为一种新的治疗策略协同用于甲状腺癌患者。

关键词：1,25-二羟维生素D；25-羟基维生素-D3-24-羟化酶；阿克特；抗肿瘤；上皮-间充质转化；β-连环蛋白。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
（A） 用siRNA转染后CYP24A1 mRNA表达的定量分析。**与对照组相比，P<0.01。（B） 用siRNA转染后CYP24A1蛋白表达的测定。*与对照组相比P<0.05。（C） siRNA转染后CYP24A1表达的Western blot分析。β-肌动蛋白用作样本加载对照。（D） 使用细胞计数试剂盒-8测定细胞增殖*与对照组相比，P<0.05、**P<0.01和***P<0.001；#与VD3组相比P＜0.05。对照组，未经处理的细胞；VD3，1,25-D3处理细胞4h；siscr+VD3，用扰乱对照siRNA转染并用1,25-D3处理的细胞；siCYP+VD3，转染CYP24A1 siRNA并经1,25-D3处理的细胞；siscr，用干扰控制siRNA转染细胞；siCYP，用CYP24A1siRNA转染的细胞；小干扰RNA；CYP24D1，25-羟基维生素-D3-24-羟化酶；1,25-D3，1,25-二羟维生素D。
图2。
图2。
（A） 定量分析CYP24A1和VDR mRNA表达*与对照组相比，P<0.05、**P<0.01和***P<0.001。（B） CYP24A1和VDR蛋白表达的Western blotting和（C）定量。以β-actin作为样品装载对照***与对照组相比，P<0.001。对照组，未经处理的细胞；VD3，1,25-D3处理细胞4h；siscr+VD3，用干扰控制siRNA转染细胞并用1,25-D3处理；siCYP+VD3，转染CYP24A1 siRNA并经1,25-D3处理的细胞；siscr，用干扰控制siRNA转染细胞；siCYP，转染CYP24A1siRNA的细胞；小干扰RNA；CYP24D1，25-羟基维生素-D3-24-羟化酶；维生素D受体；1,25-D3，1,25-二羟维生素D。
图3。
图3。
（A） 使用Transwell分析测量细胞迁移。放大倍数，×200。（B） 迁移细胞的相对数量**与对照组相比，P<0.01和***P<0.001；##与VD3组相比，P<0.01。对照组，未经处理的细胞；VD3，1,25-D3处理细胞4h；siscr+VD3，用干扰控制siRNA转染细胞并用1,25-D3处理；siCYP+VD3，用CYP24A1 siRNA转染并用1,25-D3处理的细胞；siscr，用干扰控制siRNA转染细胞；siCYP，转染CYP24A1siRNA的细胞；siRNA，小干扰RNA；CYP24D1，25-羟基维生素-D3-24-羟化酶；1,25-D3，1,25-二羟维生素D。
图4。
图4。
（A） 使用划痕试验评估肿瘤细胞迁移。放大倍数，×100。（B） 各组肿瘤细胞相对伤口宽度**与对照组相比，P<0.01和***P<0.001；#与VD3组相比，P<0.05。对照组，未经处理的细胞；VD3，1,25-D3处理细胞4h；siscr+VD3，用干扰控制siRNA转染细胞并用1,25-D3处理；siCYP+VD3，转染CYP24A1 siRNA并经1,25-D3处理的细胞；siscr，用干扰控制siRNA转染细胞；siCYP，转染CYP24A1 siRNA的细胞；小干扰RNA；CYP24D1，25-羟基维生素-D3-24-羟化酶；1,25-D3，1,25-二羟维生素D。
图5。
图5。
（A和B）Western blot分析测量E-cadherin、N-cadherin和vimentin的表达。以β-actin作为样品装载对照。（C） E-cadherin、N-cadherin和vimentin mRNA的表达。与对照组相比，*P<0.05、**P<0.01和***P<0.001；#P<0.05和##与VD3组相比，P<0.01。对照组，未经处理的细胞；VD3，1,25-D3处理细胞4h；siscr+VD3，用干扰控制siRNA转染细胞并用1,25-D3处理；siCYP+VD3，转染CYP24A1 siRNA并经1,25-D3处理的细胞；siscr，用干扰控制siRNA转染细胞；siCYP，转染CYP24A1siRNA的细胞；小干扰RNA；CYP24D1，25-羟基维生素-D3-24-羟化酶；1,25-D3，1,25-二羟基维生素D。
图6。
图6。
（A和B）Western blot分析测量MMP-2、MMP-9和TIMP1的表达。以β-actin作为样品装载对照。（C） MMP-2、MMP-9和TIMP1 mRNA的表达。与对照组相比，*P<0.05、**P<0.01和***P<0.001；#P<0.05和##与VD3组相比，P<0.01。对照组，未经处理的细胞；VD3，用10nM 1,25-D3处理细胞4h；siscr+VD3，用干扰控制siRNA转染细胞并用1,25-D3处理；siCYP+VD3，转染CYP24A1 siRNA并经1,25-D3处理的细胞；siscr，用干扰控制siRNA转染细胞；siCYP，转染CYP24A1siRNA的细胞；小干扰RNA；CYP24D1，25-羟基维生素-D3-24-羟化酶；1,25-D3，1,25-二羟维生素D；基质金属蛋白酶；金属蛋白酶抑制剂。
图7。
图7。
（A和B）p-Akt和β-catenin表达的Western blot分析。以β-actin作为样品装载对照**与对照组相比，P<0.01和***P<0.001；##与VD3组相比，P<0.01。对照组，未经处理的细胞；VD3，用10nM 1,25-D3处理细胞4h；siscr+VD3，用干扰控制siRNA转染细胞并用1,25-D3处理；siCYP+VD3，转染CYP24A1 siRNA并经1,25-D3处理的细胞；siscr，用干扰控制siRNA转染细胞；siCYP，转染CYP24A1 siRNA的细胞；小干扰RNA；CYP24D1，25-羟基维生素-D3-24-羟化酶；1,25-D3，1,25-二羟维生素D；磷酸化；Akt，蛋白激酶B。
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