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.2018年11月;18(5):4477-4485.
doi:10.3892/mmr.2018.9472。 Epub 2018年9月10日。

富含血小板的纤维蛋白渗出物促进人牙周膜细胞体外增殖和成骨分化

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富含血小板的纤维蛋白渗出物促进人牙周膜细胞体外增殖和成骨分化

李晓菊等。 摩尔医学代表. 2018年11月.

摘要

本研究旨在评估富血小板纤维蛋白(PRF)渗出液对体外培养的人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖、成骨分化和矿化的影响。在本研究中,PRF是在获得许可的情况下从健康供体的外周血中获得的,并在培养的第7天收集PRF渗出物。从健康前磨牙中获得hPDLC,通过组织块法培养,并用抗波形蛋白和抗细胞角蛋白抗体进行鉴定。将不同浓度的PRF渗出液添加到hPDLC中,以评估细胞增殖和成骨分化。用比色法测定hPDLC的增殖。通过茜素红染色、碱性磷酸酶活性(ALP)、免疫印迹和逆转录定量聚合酶链反应检测成骨分化和矿化。PRF渗出液的加入促进了细胞增殖,也促进了矿化基质结节的形成,上调了ALP活性和成骨细胞相关的骨钙素、runt相关转录因子和osterix基因表达水平。由于这些刺激作用以剂量依赖性的方式发生,因此可以得出结论,高浓度的PRF渗出液在体外hPDLC的增殖、成骨分化和矿化中起着重要作用。本研究表明,PRF渗出液促进hPDLC增殖,诱导hPDLC体外成骨分化为矿化组织形成细胞,因此可能为牙周组织工程提供潜在益处;有助于牙周组织再生的初级过程。从经济学和生物学的角度来看,PRF比类似的生长因子具有更大的临床效益。

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图1。
图1。
PRF渗出物的产生。(A) 离心后,血液样本形成三层。上层含有PPP,底层由RBC组成,中间层为PRF凝块。(B) PRF凝块从红细胞层上部分离。(C) PRF凝块在两块无菌纱布之间挤压形成PRF膜。(D) 将PRF膜添加到α-最小必需培养基中。血小板缺乏血浆;红细胞,红细胞;PRF,富含血小板的纤维蛋白。
图2。
图2。
hPDLCs(A)的特征和鉴定原代细胞从组织外植体中生长出来。(B) 初级hPDLC呈纺锤形。(C) 免疫细胞化学染色波形蛋白阳性。(D) 细胞角蛋白免疫细胞化学染色阴性。对于(A)和(B):比例尺,200µm。对于(C)和(D):比例尺,100µm。hPDLC,原代人牙周膜细胞。
图3。
图3。
PRF渗出液对hPDLC增殖的影响在体外PRF分泌物以剂量依赖的方式促进hPDLSCs的增殖活性。E1,100%,E2,20%;E3,4%PRF渗出物*P<0.05和**P<0.01。人原代牙周膜细胞hPDLC;富含血小板的纤维蛋白;外径,光密度。
图4。
图4。
PRF渗出液对人牙周膜细胞ALP活性的影响。培养7天后,E2和E3组的ALP活性与对照组相比显著增加。此外,与对照组相比,E1组的ALP活性也升高,尽管差异不显著**与相应对照组相比,P<0.01。碱性磷酸酶;富含血小板的纤维蛋白;外径,光密度。
图5。
图5。
牙周膜细胞茜素红染色和矿化结节的半定量。四种介质:控制介质、E1、MM和E1+MM。比例尺,200µm。(A) 诱导成骨14天后,E1+MM组矿化结节的数量远大于MM组。此外,与对照组相比,E1组的矿化结节数量增加。(B) 与MM组相比,E1+MM组的相对矿化结节含量增加。此外,与对照组相比,相对矿化结节含量也有所增加**P<0.01;富含血小板的纤维蛋白;MM,矿化诱导介质;E1,100%PRF渗出培养基。
图6。
图6。
三种成骨相关基因的逆转录定量聚合酶链反应结果,华侨城RUNX2OSX公司.(A)RUNX2(运行2)和(B)OSX公司PRF治疗组与相应对照组相比均上调。(C)OCN公司表达上调的速度比RUNX2(运行2)OSX公司暴露于PRF渗出液后。RUNX2(运行2),runt相关转录因子1;OCN公司,骨钙素;OSX公司,奥斯特里克斯;PRF,富含血小板;MM,矿化诱导介质*与相应的对照组相比,P<0.05和**P<0.01。
图7。
图7。
在用各种培养条件处理3、5或7天后RUNX2的蛋白质表达。(A) 通过western blotting检测的RUNX2蛋白水平的代表性图像和(B)半定量。β-actin用于监测等蛋白负荷。PRF,富含血小板;MM,矿化诱导介质;CON,控制*与相应的对照组相比,P<0.05和**P<0.01。

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