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.2018;16(2):1529~1537。
DOI:1038 92/ET.20186290。 EPUB 2018 6月12日。

激活蛋白激酶Cα/血红素氧合酶-1信号通路改善内毒素激活的NR838细胞线粒体动态

附属
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激活蛋白激酶Cα/血红素氧合酶-1信号通路改善内毒素激活的NR838细胞线粒体动态

李祥云等。 医学文摘. .
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摘要

线粒体功能和形态受融合和分裂的动态调控。血红素氧合酶-1(HO-1)可能通过蛋白激酶Cα(PKC-α)上调,通过控制融合和裂变之间的平衡来改善线粒体动力学。体内体外. 然而,PKCα/HO-1信号通路是否是调节脂多糖(LPS)激活的巨噬细胞线粒体动态的一个基本机制仍然是难以捉摸的。为了探讨这一点,用PKCα抑制剂GO696/PKCα激活剂佛波-12-肉豆蔻酸-1-乙酸酯预处理30分钟,然后用LPS刺激24小时。接着,检测PKCα、HO-1、丝裂霉素1(MFN1)和丝裂霉素2(MFN2)、视神经萎缩1(OPA1)、动态蛋白相关蛋白1(DRP1)和裂变1(FIS1)的表达。探讨PKCα/HO-1信号通路在脂多糖诱导的NR838细胞中的可能作用。结果表明,PKCα/HO-1信号通路的激活增加了超氧化物歧化酶活性和呼吸控制率(RCR),降低了丙二醛、活性氧(ROS)、DRP1和FIS1的水平,同时提高了MFN1、MFN2和OPA1的水平。与之相反,PKC-α抑制剂降低了NR838细胞中RCR、MFN1、MFN2和OPA1的表达,增加了MDA和ROS的表达。结果表明,PKCα/HO-1信号通路的激活对巨噬细胞线粒体动力学和氧化应激的平衡是必要的,这为探索脓毒症和其他疾病状态的有害影响的新策略提供了线索。

关键词血红素氧合酶-1;线粒体动力学;蛋白激酶Cα。

数据

图1。
图1。
PKCα在脂多糖诱导NR838细胞HO-1 mRNA和蛋白表达中的作用逆转录-定量聚合酶链反应分析(A)PKCα和(B)HO-1的mRNA水平,Western blot分析(C)PKCα和(D)HO-1蛋白水平。代表性的Western印迹图像显示在下面板。LPS处理后,PKCα和HO-1的mRNA和蛋白水平升高,GO697 6减弱,PMA的存在增强。*P<0.05 vs对照,γP<0.05 vs LPS组;方差分析,Dunnett后验试验(n=5)。血红素加氧酶;脂多糖;脂多糖;PMA,佛波醇-12-肉豆蔻酸-1-乙酸酯;PKC,蛋白激酶C;二甲基亚砜,二甲基亚砜。
图2。
图2。
NR838细胞氧化应激的诱导(a)LPS刺激后NR838细胞株MDA、(B)ROS含量、(C)SOD活性和(D)RCR水平。*P<0.05 vs对照,γP<0.05 vs LPS组;方差分析,Dunnett后验试验(n=5)。丙二醛(MDA)、丙二醛(RDA)、活性氧(SOD)、超氧化物歧化酶(SOD)、超氧化物歧化酶(ROS)、呼吸控制率(PMA)、佛波醇-12-肉豆蔻酸-1-乙酸酯(DMSO)、二甲基亚砜(LMPS)、脂多糖(LPS)、脂多糖(LPS)。
图3。
图3。
PKCα/HO-1信号通路对NR838细胞内LPS应答的线粒体融合/裂变蛋白的影响为了评价PKCα/HO-1信号通路对LPS对线粒体动态标记物的影响,用10μg/ml LPS孵育24小时,用5μm GO697 6和100 nm PMA预处理NR838 3细胞,线粒体动态标记物(A)MFN1,(B)MFN2,(C)OPA1蛋白水平。(d)DRP1和(E)FIS1通过Western blot分析进行评估。*P<0.05 vs对照,γP<0.05 vs LPS组;方差分析,Dunnett后验试验(n=5)。PMA,佛波醇-12-肉豆蔻酸-1-乙酸酯;DMSO,二甲基亚砜;脂多糖,脂多糖;DRP1,动力相关蛋白1;FIS1,裂变1;MFN,线粒体融合蛋白;OPA1,视神经萎缩1。
图4。
图4。
pKPK-α/HO-1信号通路对脂多糖诱导NR838细胞线粒体融合/裂变标志物mRNA水平的影响为了评价PKC-α/HO-1信号通路对线粒体动态标记物的影响,在10μg/ml LPS孵育24小时前,用5μm GO697 6和100 nm的佛波-12-肉豆蔻酸13-乙酸乙酯预处理NR838 3细胞,线粒体动态标记物(A)MFN1,(B)MFN2,(C)OPA1的mRNA水平。(d)DRP1和(E)FIS1通过逆转录-定量聚合酶链反应分析进行评估。*P<0.05 vs对照,γP<0.05 vs LPS组;方差分析,Dunnett后验试验(n=5)。LPS,脂多糖;DRP1,动态相关蛋白1;FIS1,裂变1;MFN,线粒体融合蛋白;OPA1,视神经萎缩1。

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