Edema Induced by a Crotalus durissus terrificus Venom Serine Protease (Cdtsp 2) Involves the PAR Pathway and PKC and PLC Activation

doi:10.3390/ijms19082405

.2018年8月15日；19(8):2405.

doi:10.3390/ijms19082405。

由土茯苓毒液丝氨酸蛋白酶（Cdtsp-2）涉及PAR通路和PKC及PLC激活

卡罗琳·R·C·科斯塔¹, 玛丽亚娜·诺沃·贝尔彻², 卡罗琳·F·B·罗德里格斯^三, 丹妮拉·德·奥利维拉·富山⁴, 马科斯·德奥利维拉⁵, Danielle P Novaes公司⁶, 马科斯·伊卡里·富山⁷

附属公司

¹巴西圣保罗州立大学（UNESP）生物科学研究所海岸校区，圣保罗11330-900。carolsbert@gmail.com。
²巴西圣保罗州立大学（UNESP）生物科学研究所海岸校区，圣保罗11330-900。belchor.mariana@gmail.com。
^三巴西圣保罗布坦坦研究所，05503-900。cfabri3@gmail.com。
⁴圣保罗州立大学海岸校区生物科学研究所，巴西圣保罗11330-900。gaveira@yahoo.com.br。
⁵巴西圣保罗州立大学（UNESP）滨海校区生物科学研究所，圣保罗11330-900。scaffix@gmail.com。
⁶巴西圣保罗州立大学（UNESP）生物科学研究所海岸校区，圣保罗11330-900。danipnovaes2012@gmail.com。
⁷巴西圣保罗州立大学（UNESP）生物科学研究所海岸校区，圣保罗11330-900。marcoshikaritoyama@gmail.com。

PMID： 30111691
预防性维修识别码： PMC6121655型
内政部： 10.3390/ijms19082405

由土茯苓毒液丝氨酸蛋白酶（Cdtsp-2）涉及PAR通路和PKC及PLC激活

卡罗琳·R·C·科斯塔等。国际分子科学杂志. 2018.

.2018年8月15日；19(8):2405.

doi:10.3390/ijms19082405。

作者

附属公司

¹巴西圣保罗州立大学（UNESP）生物科学研究所海岸校区，圣保罗11330-900。carolsbert@gmail.com。
²圣保罗州立大学海岸校区生物科学研究所，巴西圣保罗11330-900。belchor.mariana@gmail.com。
^三巴西圣保罗布坦坦研究所，05503-900。cfabri3@gmail.com。
⁴巴西圣保罗州立大学（UNESP）生物科学研究所海岸校区，圣保罗11330-900。gaveira@yahoo.com.br。
⁵巴西圣保罗州立大学（UNESP）滨海校区生物科学研究所，圣保罗11330-900。scaffix@gmail.com。
⁶巴西圣保罗州立大学（UNESP）生物科学研究所海岸校区，圣保罗11330-900。danipnovaes2012@gmail.com。
⁷巴西圣保罗州立大学（UNESP）生物科学研究所海岸校区，圣保罗11330-900。marcoshikaritoyama@gmail.com。

PMID： 30111691
预防性维修识别码： PMC6121655型
内政部： 10.3390/ijms19082405

摘要

蛇毒丝氨酸蛋白酶（SVSP）是一类重要的酶毒素，参与血液稳态的多种病理生理效应。一些研究结果表明，这类酶毒素与炎症有关。在本文中，我们从土茯苓（Cdt）毒液，命名为Cdtsp 2，在小鼠模型中显示出显著的促炎作用。此外，我们进行了几项研究，以阐明Cdtsp 2诱导水肿效应的主要途径。酶分析和结构分析（初级结构分析和三维建模）与药理分析密切相关。使用从蛇毒中分离的Cdtsp 2测定水肿活性，并将其应用于蛋白激酶C（PKC）抑制剂、磷脂酶C（PLC）抑制剂、地塞米松（Dexa）、蛋白酶激活受体拮抗剂（PAR）或生理盐水（阴性对照）处理的小鼠。此外，我们还测定了环氧合酶2（COX-2）、丙二醛（MDA）和前列腺素E2（PGE2）的水平。Cdtsp 2的分子量约为27kDa，等电点（pI）为4.5，具有显著的纤溶活性，并具有水解Nα-苯甲酰-l-精氨酸4-硝基苯胺（BAPNA）的能力。其初级和三维结构显示，Cdtsp 2是一种典型的蛇毒丝氨酸蛋白酶，通过花生四烯酸（AA）的代谢诱导显著水肿，涉及PAR、PKC、PLC和COX-2受体，并诱导MDA水平显著升高。我们的结果表明，Cdtsp 2是一种具有显著酶活性的丝氨酸蛋白酶，它可能参与PAR1和PAR2的降解，激活PLC和PKC来动员AA，同时增加氧化应激。在这篇文章中，我们为SVSP的作用提供了一个新的视角，而不仅仅是其对血液稳态的影响。

关键词：环氧化酶-2；土茯苓（Crotalus durisus terificus，Cdt）；MDA；水肿；炎症；氧化应激；蛋白酶激活受体；蛇毒丝氨酸蛋白酶。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
(A类)通过三步尺寸排阻色谱法纯化馏分202（F202）(A类)然后在5C柱中进行反相HPLC(B类)，离子交换(C类)，和C4柱中的反相HPLC(天). 其主要生化特征是使用双向电泳进行的(E类).

图2
氨基酸比对*土茯苓*丝氨酸蛋白酶（Cdtsp-2）和蛇毒丝氨酸蛋白酶的系统发育树，包括其他回转蛋白亚型（毒蛇蛋白酶VSP 17_CRODU-Swiss-Prot:B0FXM3.1，VSP13_CRODU-Swiss-Prot:B0FWM1.1，VSP14_CRODU-Rwiss-Prod:B0F XM2.1，VSP_CRODCOLL-Swiss-Prod:A0A0S4FKT4.1，VSP 21 CRODU-Swiss-Port:Q58G94，VSPF LACMU:Swiss-Pro：P33589，VSP CROATROX-Swiss-Prop:Q8QHK3.1，VSP GRODVEGRA-Swiss-Prot:A0A0A0U2UH64和其他蛇毒丝氨酸蛋白来自的as鳄鱼（VSP_CROADAM-Swiss-Prot:J3S3W5.1和VSP_CLODD-Swiss-Prot:Q2QA04.1）。用红色标记的残留物对应于催化三联体，用绿色标记的残渣对应于底物识别位点。星号表示天门冬氨酸（N）的残留物，它对碳水化合物残留物的结合至关重要，在Cdtsp 2中不存在。箭头代表对蛇毒丝氨酸蛋白酶的生物和生化活性至关重要的氨基酸残基。

图3
二级结构分析和Cdtsp 2的结构模型。(A类)天然Cdtsp 2的圆二色性（CD）光谱剖面。数据采集范围为185-280 纳米。CD光谱以摩尔椭圆度（θcm）的θ机器单位（毫度）表示²/dmols）。(B类)Cdtsp2的三维模型。该结构由灰色缎带表示。来自催化三联体的氨基酸用红色棒子表示。

图4
Cdtsp 2诱导的手掌水肿，以及相应的环氧合酶2（COX-2）表达水平、前列腺素E2（PGE2）和丙二醛（MDA）浓度。(A类)Cdt丝氨酸蛋白酶诱导的水肿体积。绘图(B类–天)分别显示COX-2表达和PGE2和MDA浓度的结果。结果表示为平均值±标准偏差(n个= 5). 显著差异标记为（*）（双向方差分析，Bonferroni作为后验检验；F类=150.0和第页< 0.001).

图5
在存在磷脂酶C（PLC）、蛋白激酶C（PKC）、胞浆磷脂酶A2（cPLA2）抑制剂和蛋白酶激活受体1和2（PAR1/2）拮抗剂的情况下进行手掌水肿试验。(A类)Cdtsp 2在选择性PAR1和PAR2拮抗剂存在下诱导的水肿，在应用蛋白质前30分钟注射。(B类)在蛋白应用前30分钟，在PKC和PLC的选择性抑制剂存在下，注射Cdtsp 2诱发水肿。(C类)在应用Cdtsp 2前30分钟和应用蛋白质后10分钟注射地塞米松（Dexa）治疗足水肿的评估（使用10μg蛋白质和50μg选择性抑制剂）。结果表示为平均值±标准偏差(n个= 5). 显著差异标记为（*）（双向方差分析，Bonferroni作为后验检验；F类=150.0和第页< 0.001).

图6
Cdtsp-2对小鼠组织促炎作用的假设途径。Cdtsp-2通过PAR1和PAR2与G蛋白的酶裂解诱导水肿，随后激活PLC和PKC。因此，cPLA2活性的增加是由AA代谢的增加及其与氧化应激的相互作用触发的。

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

响尾蛇毒液综述。
Phan P、Deshwal A、McMahon TA、Slikas M、Andrews E、Becker B、Kumar TKS。 Phan P等人。毒素（巴塞尔）。2023年12月19日；16(1):2. doi:10.3390/toxins16010002。毒素（巴塞尔）。2023 PMID：38276526 免费PMC文章。审查。
南美响尾蛇（Crotalus durisus terificus）毒液中的丝氨酸蛋白酶回转蛋白对蛋白酶激活受体的酶特异性和作用。
Yonamine CM、Kondo MY、Nering MB、Gouvéa IE、Okamoto D、Andrade D、da Silva JA、Prieto da Silva-AR、Yamane T、Juliano MA、Juliano-L、Lapa AJ、Hayashi MA、Lima-Landman MT。 Yonamine CM等人。有毒。2014年3月；79:64-71. doi:10.1016/j.toxicon.2013.12.002。Epub 2014年1月8日。有毒。2014 PMID：24412460
中美洲响尾蛇Crotalus simus和南美洲Crotalus durisus复合体的蛇毒表明，随着Crotalus在南美洲的扩散，神经毒性是一种适应性的两性畸形趋势。
Calvete JJ、Sanz L、Cid P、de la Torre P、Flores-Díaz M、Dos Santos MC、Borges A、Bremo A、Angulo Y、Lomonte B、Alape-Giron A、Gutiérrez JM。 Calvete JJ等人。蛋白质组研究杂志，2010年1月；9(1):528-44. doi:10.1021/pr9008749。蛋白质组研究杂志，2010年。 PMID：19863078
从钝叶百日咳纯化的8-C-鼠李糖Apigenin抗急性水肿的非临床研究。
Tamayose CI、Romoff P、Toyama DO、Gaeta HH、Costa CRC、Belchor MN、Ortolan BD、Velozo LSM、Kaplan MAC、Ferreira MJP和Toyama MH。 Tamayose CI等人。国际分子科学杂志。2017年9月14日；18（9）：1972年。doi:10.3390/ijms18091972。国际分子科学杂志。2017 PMID：28906474 免费PMC文章。
关于的文献综述土茯苓毒素：从结构生物学和治疗应用的角度来看。
Macedo JM、de Lima AM、Kayano AM、Souza MF、da Silva Oliveira I、Gomez Garay AF、Rocha AM、Zuliani JP、Soares AM。 Macedo JM等人。电流蛋白肽科学。2023年；24(7):536-550. doi:10.2174/1389203724666230607105355。电流蛋白肽科学。2023 PMID：37287292 审查。

查看所有类似文章

引用人

响尾蛇毒液综述。
Phan P、Deshwal A、McMahon TA、Slikas M、Andrews E、Becker B、Kumar TKS。 Phan P等人。毒素（巴塞尔）。2023年12月19日；16(1):2. doi:10.3390/toxins16010002。毒素（巴塞尔）。2023 PMID：38276526 免费PMC文章。审查。
植物类胰蛋白酶Kunitz抑制剂（EcTI）的首次抗蛇咬伤和肝保护特性扭曲肠杆菌；两个灵魂伴侣相遇的案例。
Costa CRC、Belchor MN、Roggero A、Moraes LL、Samelo R、Annunciato I、Bonturi CR、Oliva MLV、Sousa SF、de Oliveira MA、Toyama MH。 Costa CRC等人。制药（巴塞尔）。2023年4月21日；16(4):632. doi:10.3390/ph16040632。制药（巴塞尔）。2023 PMID：37111388 免费PMC文章。
南美洲响尾蛇的生物学和医学方面杜利斯鳄鱼（林奈，1758年）：哥伦比亚的观点。
加利福尼亚州卡纳斯。加利福尼亚州卡纳斯。毒素（巴塞尔）。2022年12月15日；14(12):875. doi:10.3390/toxins14120875。毒素（巴塞尔）。2022 PMID：36548772 免费PMC文章。审查。
蛋白质组分析揭示了响尾蛇毒液对小鼠心脏组织损伤相关蛋白的调节。
Santos WS、Montoni F、Eichler RAS、Arcos SSS、Andreotti DZ、Kisaki CY、Evangelista KB、Calacina HM、Lima IF、Soares MAM、Gren ECK、Carvalho VM、Ferro ES、Nishiyama-Jr MY、Chen Z、Iwai LK。 Santos WS等人。蛋白质组学杂志。2022年4月30日；258:104530. doi:10.1016/j.jprot.2022.104530。Epub 2022年2月17日。蛋白质组学杂志。2022 PMID：35182786 免费PMC文章。
鼓腹咝蝰蛇毒和一种蛇毒丝氨酸蛋白酶Kn-Ba诱导THP-1巨噬细胞产生炎症介质。
梅格尔AA、马格诺利FC、吉多林FR、戈多伊KS、波塔罗FCV、迪亚斯·达·西尔瓦W。 Megale？AA等人。毒素（巴塞尔）。2021年12月16日；13(12):906. doi:10.3390/毒素13120906。毒素（巴塞尔）。2021 PMID：34941743 免费PMC文章。

查看所有“被引用”文章

工具书类

1. De Oliveira D.G.L.、Murakami M.T.、Cintra A.C.O.、Franco J.J.、Sampaio S.V.、Arni R.K.从陆地鳄鱼和共线鳄鱼毒液中分离出的两种纤维蛋白原激活酶的功能和结构分析。生物学报。生物物理学。罪恶。（上海）2009年；41:21–29. doi:10.1093/abbs/gmn003。-内政部-公共医学
1. Boldrini-França J.、Rodrigues R.S.、Santos-Silva L.K.、de Souza D.L.、Gomes M.S.R.、Cologna C.T.、de Pauw E.、Quinton L.、Henrique-Silva F.、de Melo Rodrigue V.等。在毕赤酵母中表达来自鳄鱼毒的新丝氨酸蛋白酶，并与天然酶进行功能比较。申请。微生物。生物技术。2015;99:9971–9986.-公共医学
1. Patiño A.C.、Pereañez J.A.、Gutiérrez J.M.、Rucavado A.哥伦比亚榴莲蛇毒中两种丝氨酸蛋白酶的生化和生物学特性。有毒。2013;63:32–43. doi:10.1016/j.toxicon.2012.11.010。-内政部-公共医学
1. Toyama M.H.、Toyama D.D.O.、Passero L.F.D.、Laurenti M.D.、Corbett C.E.、Tomokane T.Y.、Fonseca F.V.、Antunes E.、Joazeiro P.P.、Beriam L.O.等人。从鳄鱼毒中分离出一种新的L-氨基酸氧化酶。有毒。2006;47:47–57. doi:10.1016/j.toxicon.2005.09.008。-内政部-公共医学
1. Yonamine C.M.、Prieto-da-Silva A.R.、Magalháes G.S.、Rádis-Baptista G.、Morganti L.、Ambiel F.C.、Chura-Chambi R.M.、Yamane T.、Camillo M.A.从鳄鱼毒腺中克隆丝氨酸蛋白酶cDNA，并在COS-7细胞中表达功能性Gyroxin同源物。有毒。2009;54:110–120. doi:10.1016/j.toxicon.2009.03.022。-内政部-公共医学

MeSH术语

行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动

LinkOut-更多资源

[1] De Oliveira D.G.L.、Murakami M.T.、Cintra A.C.O.、Franco J.J.、Sampaio S.V.、Arni R.K.从陆地鳄鱼和共线鳄鱼毒液中分离出的两种纤维蛋白原激活酶的功能和结构分析。生物学报。生物物理学。罪恶。（上海）2009年；41:21–29. doi:10.1093/abbs/gmn003。-内政部-公共医学

[2] De Oliveira D.G.L.、Murakami M.T.、Cintra A.C.O.、Franco J.J.、Sampaio S.V.、Arni R.K.从陆地鳄鱼和共线鳄鱼毒液中分离出的两种纤维蛋白原激活酶的功能和结构分析。生物学报。生物物理学。罪恶。（上海）2009年；41:21–29. doi:10.1093/abbs/gmn003。-内政部-公共医学

[3] Boldrini-França J.、Rodrigues R.S.、Santos-Silva L.K.、de Souza D.L.、Gomes M.S.R.、Cologna C.T.、de Pauw E.、Quinton L.、Henrique-Silva F.、de Melo Rodrigue V.等。在毕赤酵母中表达来自鳄鱼毒的新丝氨酸蛋白酶，并与天然酶进行功能比较。申请。微生物。生物技术。2015;99:9971–9986.-公共医学

[4] Boldrini-França J.、Rodrigues R.S.、Santos-Silva L.K.、de Souza D.L.、Gomes M.S.R.、Cologna C.T.、de Pauw E.、Quinton L.、Henrique-Silva F.、de Melo Rodrigue V.等。在毕赤酵母中表达来自鳄鱼毒的新丝氨酸蛋白酶，并与天然酶进行功能比较。申请。微生物。生物技术。2015;99:9971–9986.-公共医学

[5] Patiño A.C.、Pereañez J.A.、Gutiérrez J.M.、Rucavado A.哥伦比亚榴莲蛇毒中两种丝氨酸蛋白酶的生化和生物学特性。有毒。2013;63:32–43. doi:10.1016/j.toxicon.2012.11.010。-内政部-公共医学

[6] Patiño A.C.、Pereañez J.A.、Gutiérrez J.M.、Rucavado A.哥伦比亚榴莲蛇毒中两种丝氨酸蛋白酶的生化和生物学特性。有毒。2013;63:32–43. doi:10.1016/j.toxicon.2012.11.010。-内政部-公共医学

[7] Toyama M.H.、Toyama D.D.O.、Passero L.F.D.、Laurenti M.D.、Corbett C.E.、Tomokane T.Y.、Fonseca F.V.、Antunes E.、Joazeiro P.P.、Beriam L.O.等人。从鳄鱼毒中分离出一种新的L-氨基酸氧化酶。有毒。2006;47:47–57. doi:10.1016/j.toxicon.2005.09.008。-内政部-公共医学

[8] Toyama M.H.、Toyama D.D.O.、Passero L.F.D.、Laurenti M.D.、Corbett C.E.、Tomokane T.Y.、Fonseca F.V.、Antunes E.、Joazeiro P.P.、Beriam L.O.等人。从鳄鱼毒中分离出一种新的L-氨基酸氧化酶。有毒。2006;47:47–57. doi:10.1016/j.toxicon.2005.09.008。-内政部-公共医学

[9] Yonamine C.M.、Prieto-da-Silva A.R.、Magalháes G.S.、Rádis-Baptista G.、Morganti L.、Ambiel F.C.、Chura-Chambi R.M.、Yamane T.、Camillo M.A.从鳄鱼毒腺中克隆丝氨酸蛋白酶cDNA，并在COS-7细胞中表达功能性Gyroxin同源物。有毒。2009;54:110–120. doi:10.1016/j.toxicon.2009.03.022。-内政部-公共医学

[10] Yonamine C.M.、Prieto-da-Silva A.R.、Magalháes G.S.、Rádis-Baptista G.、Morganti L.、Ambiel F.C.、Chura-Chambi R.M.、Yamane T.、Camillo M.A.从鳄鱼毒腺中克隆丝氨酸蛋白酶cDNA，并在COS-7细胞中表达功能性Gyroxin同源物。有毒。2009;54:110–120. doi:10.1016/j.toxicon.2009.03.022。-内政部-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

您的RSS源

由土茯苓毒液丝氨酸蛋白酶（Cdtsp-2）涉及PAR通路和PKC及PLC激活

附属公司

由土茯苓毒液丝氨酸蛋白酶（Cdtsp-2）涉及PAR通路和PKC及PLC激活

作者

附属公司

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

MeSH术语

物质

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

医学

研究材料

其他

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

MeSH术语

物质

相关信息

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

医学

研究材料

其他