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.2018年10月；18(4):3751-3759.
doi:10.3892/mmr.2018.9363。 Epub 2018年8月8日。

ASCL2表达通过下调miR223和诱导EMT参与胃癌的迁移和侵袭

左庆松 1, 王杰（音译） 1, 赵晨 1, 张勇（音） 1, 电旭峰 1, 赵荣华 1, 滕晨 1
附属公司

ASCL2表达通过下调miR223和诱导EMT参与胃癌的迁移和侵袭

左庆松等。 分子医学代表. 2018年10月.

摘要

乙酰胆碱酯酶同源物2（ASCL2）是一种碱性螺旋-环-螺旋转录因子，在成人肠道干细胞的维持和胃癌（GC）的生长中发挥重要作用。然而，ASCL2在胃癌转移中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨ASCL2表达对胃癌转移的影响。采用免疫组织化学和免疫印迹技术检测32例胃转移瘤及其相关原发肿瘤中ASCL2蛋白的表达。这些数据表明，ASCL2在转移性肿瘤、邻近正常组织、原发性胃肿瘤和胃转移性肿瘤中的表达最高。此外，建立了ASCL2‑过表达的GC细胞系MKN1‑ASCL2和SNU16‑ASCL2。体外试验表明，ASCL2过度表达后，microRNA 223（miR223）表达下调，上皮相关蛋白E‑cadherin的表达显著降低，而一系列间充质相关蛋白，包括锌指E‑box‑binding homeobox 1（Zeb‑1）、，ASCL2‑过度表达细胞中扭曲相关蛋白1、整合素、波形蛋白、72kDa IV型胶原酶和基质金属蛋白酶‑9上调。miR223的过度表达减弱了ASCL2表达诱导的上皮-间充质转化（EMT）促进作用。此外，染色质免疫沉淀和荧光素酶报告基因检测结果表明，ASCL2能够与前miR223的启动子相互作用，并抑制miR222的成熟，miR227可能与Zeb‑1的3'非翻译区相互作用，抑制肿瘤细胞中的EMT。本研究结果表明，ASCL2能够下调miR223的表达水平，促进EMT，促进胃癌转移，提示ASCL2可能是胃癌的治疗靶点。

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数字

图1。
图1。
ASCL2在转移瘤、邻近正常组织、原发性胃肿瘤和胃转移瘤中的表达最高。（A） 免疫印迹法检测ASCL2在癌旁正常组织、原发肿瘤和转移瘤中的表达。（B） 定量聚合酶链反应检测ASCL2在癌旁正常组织、原发肿瘤和转移瘤中的mRNA表达水平。（C） 免疫组织化学分析评估了ASCL2在邻近组织、原发性胃肿瘤和转移瘤中的表达（放大倍数，×400）*与相邻组相比，P<0.05，***P<0.001；#与主要组相比，P<0.05。ASCL2，achaete-scute同源物2。
图2。
图2。
ASCL2的表达有助于MKN-1和SNU16细胞的细胞迁移和侵袭。（A） 在对照细胞和ASCL2过表达细胞中检测到ASCL2的表达。（B） ASCL2表达对MKN-1和SNU16细胞迁移的影响通过伤口愈合试验（放大倍数×200）进行评估。（C） ASCL2表达对MKN-1和SNU16细胞侵袭的影响通过Transwell分析（放大倍数×200）进行评估**与各自对照组相比，P<0.01，***P<0.001。ASCL2，achaete-scute同源物2。
图3。
图3。
ASCL2促进上皮-间充质转化诱导蛋白的表达。western blot分析检测上皮相关蛋白E-cadherin和间充质相关蛋白Zeb-1、Twist、Integrin、Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达。ASCL2，achaete-scute同源物2；扭曲，扭曲相关蛋白1；MMP-2，72kDa IV型胶原酶；基质金属蛋白酶9；Zeb-1，锌E-box-binding同源盒1；CON，控制。
图4。
图4。
在MKN-1和SNU-16细胞中ASCL2过度表达后，EMT-相关miRNAs发生改变。（A） 用定量聚合酶链反应检测与EMT相关的一系列miRNA的表达水平***与对照组相比，P<0.001。（B） 在邻近组织、原发性胃肿瘤或转移瘤中检测到miRNA-223的水平*与相邻组相比，P<0.05，***P<0.001，#与主要组相比，P<0.05。miRNA，microRNA；上皮-间充质转化；ASCL2，阿切特-黄芩同源物2。
图5。
图5。
过度表达miR223可减弱ASCL2表达诱导的EMT促进作用。（A） 定量聚合酶链反应检测miR223水平。（B） 通过Transwell分析（放大倍数×200）评估miR223对ASCL2过度表达的MKN-1和SNU16细胞侵袭的影响。（C） 使用TargetScan预测EMT相关蛋白与miR223的结合。（D） 荧光素酶报告分析评估了miR223与Zeb-1的3′UTR的结合。（E） western blot分析检测上皮相关蛋白E-cadherin和间充质相关蛋白Zeb-1、Twist、Integrin、Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达*与相应对照组相比，P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。miR、微小RNA；ASCL2，achaete-scute同源物2；上皮-间充质转化；UTR，非翻译区；OE，过度表达；扭曲，扭曲相关蛋白1；MMP-2，72kDa IV型胶原酶；基质金属蛋白酶9；Zeb-1，锌E-box-binding同源盒1；CON，控制。
图6。
图6。
ASCL2可能与前miR223的启动子相互作用并抑制miR227的成熟。（A） 染色质免疫沉淀法检测前miR223启动子与ASCL2的相互作用。（B） 采用荧光素酶报告子法检测ASCL2对前miR223启动子活性的影响。（C） 采用定量聚合酶链反应分析前miR223、前miR232和miR222的表达水平*与相应对照组相比，P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。ASCL2，阿切特-黄芩同源物2；OE，过度表达；miR，microRNA。
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参考文献

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