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.2018年9月；18(3):3242-3250.
doi:10.3892/mmr.2018.9316。 Epub 2018年7月24日。

超声靶向微泡破坏介导的miR‑205增强前列腺癌细胞中顺铂的细胞毒性

丁文琴 1, 李海戈 1, 谢洪林 2
附属公司

超声靶向微泡破坏介导的miR‑205增强前列腺癌细胞中顺铂的细胞毒性

丁文琴等。 分子医学代表. 2018年9月.

摘要

MicroRNAs（miRNAs）是一种非编码约20个核苷酸的长序列，在许多癌症的发生和发展中发挥作用。超声靶向微泡破坏（UTMD）是一种有效的微RNA递送方法。本研究的目的是研究UTMD介导的miRNA（miR）‑205在前列腺癌（PCa）发生中的潜在作用。在本研究中，通过逆转录定量聚合酶链反应检测miR‑205的表达。使用UTMD方法将miR‑205模拟物转染到PC‑3细胞中，并用顺铂处理PC‑2细胞。分别使用细胞计数试剂盒‑8、流式细胞术、伤口愈合和Transwell分析检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。此外，通过western blot分析测定caspase‑9、裂解caspase 9、细胞色素c（cytolc）、上皮细胞（E）‑钙粘蛋白、基质金属蛋白酶‑9（MMP‑9）、磷酸化（p）‑细胞外信号调节激酶（ERK）和ERK的蛋白表达水平。本研究的结果表明，与健康细胞相比，人PCa细胞系中miR‑205的表达较低，UTMD‑介导的miR鄄205递送抑制PCa细胞的增殖、迁移和侵袭，与UTMD介导的miR-阴性对照组和miR-205治疗组相比，顺铂可促进细胞凋亡。此外，UTMD‑介导的miR‑205转染可增加caspase‑9、cleaved‑caspase 9、细胞色素c和E‑cadherin的表达，并降低MMP‑9和p‑ERK的表达。因此，UTMD-介导的mic R-205递送可能是治疗PCa的一种有前景的方法。

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数字

图1。
图1。
miR-205在前列腺癌细胞中的高表达。与正常前列腺细胞系RWPE-1相比，人前列腺癌细胞系VCaP、LnCaP、PC-3和DU145中miR-205的表达显著降低。数据以平均值±标准差表示***与RWPE-1相比，P<0.001。miR，microRNA。
图2。
图2。
miR-205抑制前列腺癌细胞活性。通过逆转录定量聚合酶链反应检测（A）PC-3和（B）DU145细胞中（A和B）miR-205的表达水平。（C和D）通过细胞计数试剂盒-8测定（C）PC-3和（D）DU145细胞的细胞活力。数据表示为平均值±标准偏差**与对照组相比，P<0.01，***P<0.001。miR，microRNA；外径，光密度。
图3。
图3。
UTMD介导的miR-205转染抑制顺铂调节的细胞增殖。（A） 用倒置显微镜检查微气泡。比例尺，5µm；放大倍数，×100。（B） 在用0、1、2、4、6、10、15µg/ml顺铂处理48小时的DU145和PC-3细胞中，通过细胞计数试剂盒-8检测细胞活力。48小时时，与未经处理的对照组相比，*P<0.05、**P<0.01和***P<0.001。（C）通过逆转录定量聚合酶链反应测定PC-3细胞中miR-205的相对表达水平***P<0.001。（D） PC-3细胞增殖。数据表示为平均值±标准偏差*与顺铂+miR-NC+UTMD组相比，P<0.05、**P<0.01和***P<0.001#与顺铂+miR-205组相比，P<0.05和###P<0.001。miR，microRNA；NC，阴性对照；OD，光密度；UTMD，超声靶向微泡破坏。
图4。
图4。
UTMD介导的miR-205转染促进顺铂调节的细胞凋亡。（A） 流式细胞术检测处理后PC-3细胞的凋亡。FL1-H的横坐标为FITC。纵向坐标为PI和（B）量化。***P<0.001。（C） TUNEL也测量了处理后PC-3细胞的凋亡（放大倍数，×400）。miR，microRNA；NC，阴性对照；OD，光密度；UTMD，超声靶向微泡破坏。
图5。
图5。
UTMD介导的miR-205转染抑制顺铂调节的PC-3细胞迁移和侵袭。（A） 左侧面板显示了伤口诱导后48小时PC-3细胞的典型迁移图像。计数迁移细胞的数量，并在右侧面板中显示定量分析。（B） 采用Matrigel法检测处理后PC-3细胞的侵袭能力；代表性的图像是从每个井的中间拍摄的，并显示在左侧面板中。右侧面板显示了对结果的定量分析。比例尺，50µm；放大倍数，×10。数据表示为平均值±标准偏差。比例尺，50µm*P<0.05和***P<0.05。001.miR，microRNA；NC，阴性对照；OD，光密度；UTMD，超声靶向微泡破坏。
图6。
图6。
如western blot分析所示，UTMD介导的miR-205转染增加了caspase-9、cleaved-caspase 9、cyto-c和E-cadherin的表达，并降低了MMP-9和p-ERK的表达。细胞色素c；上皮钙粘附素；ERK，细胞外信号调节激酶；miR，microRNA；基质金属蛋白酶-9；NC，阴性对照；p、 磷酸化；超声靶向微泡破坏。
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