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.2018年7月30日;9(1):2982.
doi:10.1038/s41467-018-05384-1。

通过减弱天然IgM吸收增强配体靶向脂质体的免疫相容性

附属公司

通过减弱天然IgM吸收增强配体靶向脂质体的免疫相容性

胡安·关等。 国家公社. .

摘要

靶向配体预计有助于将治疗药物精确输送到病变组织;然而,它们也可能严重影响纳米载体与血浆蛋白的相互作用。在这里,我们研究了脑靶向脂质体的免疫相容性,它与吸收的天然IgM呈负相关。脂质体上长而稳定的带正电荷肽配体的修饰倾向于吸收天然IgM,导致快速清除和增强免疫原性。通过计算机辅助肽设计开发的小肽模拟物D8通过减少天然IgM吸收而改善免疫相容性。本研究强调了肽配体对脂质体形成的蛋白质电晕和体内命运的影响。稳定的带正电荷肽配体在靶向递送、保护结合受体的体内生物活性以及与天然免疫系统的长期不利相互作用中发挥着双重作用。D8的开发为如何通过调节蛋白电晕组分合理设计免疫相容药物传递系统提供了见解。

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利益冲突声明

作者声明没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
脂质体制剂的免疫原性。IgG滴定。ELISA板中的吸光度与血清稀释度和抗体滴度的对数关系(EC50)。mPEG2000-DSPE,L(左)CDX-PEG3400-DSPE,和D类CDX-PEG3400-DSPE被用作sLip的抗原,L(左)CDX-sLip和D类CDX-sLip。bELISA板中抗PEG IgM评估的吸光度。mPEG2000-DSPE被用作所有制剂的抗原。n个 = 3、数据是手段±s.d.统计显著性由Student’s计算t吨-测试**第页 < 0.01, ***第页 < 0.001
图2
图2
sLip的摄入,L(左)CDX-sLip和D类APC的CDX-sLip。CD11c的比例+BMDC中的细胞。用抗CD11c抗体对BMDC进行染色,并用流式细胞术进行计数。bDiI的显微镜观察+共聚焦激光扫描显微镜检测骨髓间充质干细胞。BMDC与负载DiI的脂质体一起培养4h血清和细胞核用DAPI染色。c(c)DiI的比率+流式细胞术计数BMDC。d日DiI的比率+MHC II中的电池+APC。分离淋巴结12注射后h,然后悬浮在PBS中。细胞悬浮液与抗MHC II抗体在41°Ch和DiI的比值+MHC II中的电池+流式细胞术计数APC。e(电子)DiI的显微镜观察+巨噬细胞共聚焦激光扫描显微镜。RAW264.7细胞与载DiI-脂质体培养1h血清和细胞核用DAPI染色。(f)流式细胞术检测RAW264.7细胞的归一化荧光强度。比例尺 = 20微米,n个 = 3、数据是手段±s.d.统计显著性由Student’s计算t吨-测试**第页 < 0.01, ***第页 < 0.001
图3
图3
载DiI-sLip的药代动力学特征和生物分布,L(左)CDX-sLip和D类CDX-s唇。30时测定的DiI血浆浓度最小值,1h、 2个h、 4个h、 8个h、 12个h、 和24BALB/c小鼠静脉注射后h。b不同脂质体制剂的ABC效应。向BALB/c小鼠注射低剂量的空脂质体(sLip,L(左)CDX-sLip和D类CDX-sLip,5mg HSPC/kg小鼠),然后在第一次注射(50毫克热休克蛋白/千克小鼠)。c(c)脂质体在BALB/c小鼠肝脏和脾脏中的生物分布。n个 = 3、数据是手段±s.d.统计显著性由Student’s计算t吨-测试*第页 < 0.05, **第页 < 0.01, ***第页 < 0.001
图4
图4
改性肽对蛋白质电晕组成的影响。SDS-PAGE分离蛋白质电晕。IgM(Mw 72用纳米LC-MS/MS对kDa进行了表征。b体内1和4脂质体表面天然IgM的Western blot分析注射后h。c(c)通过归一化灰度值量化吸收的天然IgM。n个 = 3、数据是手段±s.d.统计显著性由Student’s计算t吨-测试。NS表示不显著*第页 < 0.05, **第页 < 0.01
图5
图5
静电相互作用对天然IgM吸收的影响。c(c)与血清孵育1天后脂质体表面天然IgM的Western blot分析小时。bd日通过归一化灰度值量化吸收的天然IgM。n个 = 3、数据是手段±s.d.统计显著性由Student’s计算t吨-测试*第页 < 0.05
图6
图6
肽与α7 nAChR的结合方式。D类CDX-S8(绿色,)和D8(棕色,b)α7nAChR。受体的亚单位A显示为白色,亚单位B显示为黄色。参与结合的残留物用棒子表示,氢键用黑色虚线表示
图7
图7
D8的特性。小鼠血清中的稳定性。D8,L(左)CDX,以及D类CDX溶解在蒸馏水中(1毫克毫升−1)并与小鼠血清孵育。采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)监测并量化预定时间点的肽水解。b D类CDX和D8竞争DiI-loaded的绑定D类CDX-Lip与Neuro 2a细胞。c(c)DiI-loaded sLip的细胞吞噬效率,D类CDX-sLip和D8-sLip穿过初级脑毛细血管内皮细胞单层。d日脂质体脑分布的显微观察。向BALB/c小鼠注射DiI-loaded sLip,D类通过尾静脉和大脑解剖CDX-sLip和D8-sLip,冰冻切片,并用抗CD31抗体和DAPI 4染色注射后h,蓝核、绿血管和红色DiI染料,比例尺 = 10微米。e(电子)用Image Pro统计三个随机区域的阳性DiI区域。比例尺 = 20微米,n个 = 3、数据是手段±s.d.统计显著性由Student’s计算t吨-测试*第页 < 0.05, **第页 < 0.01, ***第页 < 0.001
图8
图8
D8-sLip的免疫相容性。b蛋白质印迹分析()和量化(b)体内1和4脂质体表面的天然IgM注射后h。c(c)sLip、D8-sLip和D类CDX-s唇。d日D8 sLip和D8 sLip在BALB/c小鼠肝脏和脾脏中的生物分布D类CDX-s唇。e(电子)IgG滴定。ELISA板中的吸光度与血清稀释度和抗体滴度的关系报告为对数(EC50)。D8-PEG3400-DSPE和D类使用CDX-PEG3400-DSPE作为D8 sLip的抗原D类CDX-sLip。(f)ELISA板中抗PEG IgM评估的吸光度。mPEG2000-DSPE被用作两种制剂的抗原。n个 = 3、数据是手段±s.d.统计显著性由Student’s计算t吨-测试。NS表示不显著*第页 < 0.05, **第页 < 0.01, ***第页 < 0.001
图9
图9
肽配体的净正电荷与吸收的天然IgM之间的关系。n个 = 3、数据是平均数。线性回归采用L(左)CDX-sLip,D类CDX-sLip,D类CDX-1-sLip和D类CDX-2-s唇形

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