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.2018年9月;18(3):2523-2530.
doi:10.3892/mmr.2018.9261。 Epub 2018年7月9日。

Oncostatin M通过调节单核细胞趋化蛋白‑1促进小鼠MC3T3‑E1成骨细胞的成骨分化

附属公司

Oncostatin M通过调节单核细胞趋化蛋白‑1促进小鼠MC3T3‑E1成骨细胞的成骨分化

郑文彪等。 分子医学代表. 2018年9月.

摘要

本研究研究了可能与单核细胞趋化蛋白-1(MCP‑1)相关的肿瘤抑制素M(OSM)对小鼠MC3T3‑E1成骨细胞发育和骨重塑的作用。用ELISA法测定MCP‑1、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP1α)和活化后调节的正常T细胞表达和分泌(RANTES)水平。MTT法、伤口愈合法和Transwell法分别检测细胞活力、迁移和侵袭能力。Western blotting检测磷酸化蛋白激酶B(Akt)水平。采用逆转录定量聚合酶链反应和western blotting检测基质金属蛋白酶(MMP)‑1、‑2和‑3的水平。结果表明,OSM治疗显著增加了MCP‑1水平,且呈剂量依赖性。白细胞介素(IL)‑1也显著增加了MCP‑1水平;然而,使用其他细胞因子,包括IL‑6、IL‑11和白血病抑制因子,对MCP‑1水平的影响并不相同。此外,OSM不影响趋化因子MIP1α和RANTES的水平;事实上,只有IL‑1显著增加了MIP1α和RANTES的水平。OSM处理以剂量依赖性的方式促进增殖、迁移和侵袭,MCP‑1沉默可抑制这些作用。OSM处理增加了磷酸化‑Akt、MMP‑1、‑2和‑3的表达;然而,这些增加在MCP‑1沉默后被逆转。总之,这些数据表明,OSM通过调节MCP‑1的表达促进小鼠MC3T3‑E1成骨细胞的分化。因此,这些结果可能为骨修复和重建提供新的见解。

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数字

图1。
图1。
OSM刺激成骨细胞中趋化因子的表达。细胞因子刺激细胞,包括OSM(0、1、5、10、30和50 ng/ml)、IL-1(10 ng/ml。收集上清液并使用ELISA进行分析,以确定(A)MCP-1、(B)MIP1α和(C)RANTES的水平。数据表示为平均值±标准偏差。n=5*与对照组相比,P<0.01和**P<0.01。OSM,抑癌素M;白细胞介素;白血病抑制因子;MCP-1,单核细胞趋化蛋白-1;巨噬细胞炎性蛋白1α;RANTES,通过激活调节正常T细胞的表达和分泌。
图2。
图2。
OSM诱导成骨细胞的细胞进程。(A) 采用MTT法检测细胞活力,并在用不同浓度的OSM(10、30和50 ng/ml)刺激24小时后对细胞进行计数。(B) 划痕后24小时,用伤口愈合试验测定细胞迁移能力。(C) 使用Transwell侵袭试验评估细胞侵袭能力,并在培养24小时后对细胞进行计数。(D) 伤口愈合试验和(E)Transwell侵袭试验的图像,放大×200。数据表示为平均值±标准偏差n=5**与对照组相比,P<0.01。OSM、肿瘤学抑制素M。
图3。
图3。
测定了siMCP-1在OSM刺激的成骨细胞中的沉默作用。(A) siMCP-1转染和/或OSM刺激(B和C)后,通过逆转录定量聚合酶链反应检测siMCP-2的沉默作用。GAPDH被用作负荷控制。数据表示为平均值±标准偏差n=5**与对照组和##与OSM+模拟相比,P<0.01。OSM+siMCP-1组,转染siMCP-2并用30 ng/ml OSM处理的组;OSM+模拟组,转染非特异性siRNA并用30 ng/ml OSM处理的组;OSM组,对照组给予30ng/ml OSM;对照组、未接受治疗的对照组;OSM,抑癌素M;MCP-1,单核细胞趋化蛋白-1;si,小干扰。
图4。
图4。
MCP-1沉默对OSM诱导的细胞进展的影响。(A) 采用MTT法检测细胞活力,并在OSM(30 ng/ml)刺激24 h后对细胞进行计数。(B) 通过进行伤口愈合测定来测量细胞迁移。(C) 通过进行Transwell侵袭试验来评估细胞侵袭能力,并在培养24小时后对细胞进行计数。(D)伤口愈合试验和(E)Transwell侵袭试验的图像,放大×200。数据表示为平均值±标准偏差n=5**与对照组和##与OSM+模拟相比,P<0.01。OSM+siMCP-1组,转染siMCP-2并用30 ng/ml OSM处理的组;OSM+模拟组,转染非特异性siRNA并用30 ng/ml OSM处理的组;OSM组,对照组给予30ng/ml OSM;对照组、未接受治疗的对照组;MCP-1,单核细胞趋化蛋白-1;OSM,抑癌素M;si,小干扰。
图5。
图5。
MCP-1介导的OSM调节Akt磷酸化和MMP表达。(A和B)MCP-1介导的OSM刺激的Akt磷酸化。Western blotting检测Akt的磷酸化。(C、D和E)MCP-1介导的OSM调节MMPs的表达。(C) 进行逆转录定量聚合酶链反应和(D和E)蛋白印迹。数据表示为平均值±标准偏差。n=5**与对照组和##与OSM+模拟相比,P<0.01。OSM+siMCP-1组,转染siMCP-2并用30 ng/ml OSM处理的组;OSM+模拟组,转染非特异性siRNA并用30 ng/ml OSM处理的组;OSM组,对照组给予30ng/ml OSM;对照组、未接受治疗的对照组;MCP-1,单核细胞趋化蛋白-1;OSM,抑癌素M;蛋白激酶B;基质金属蛋白酶;si,小干扰。

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