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.2018年7月13日；9(1):2702.
doi:10.1038/s41467-018-05093-9。

ATP合成酶F1CENP-A向着丝粒募集的亚基是雄性减数分裂所必需的

凯特罗纳·M·柯林斯 1, 比阿特丽斯·马拉克里达 2, 科林·伯克 1 三, 帕特里克·A·基利 2, 伊莱恩·邓利维 4
附属公司

ATP合成酶F1CENP-A向着丝粒募集的亚基是雄性减数分裂所必需的

凯特罗纳·M·柯林斯等。 国家公社. .

摘要

组蛋白H3变异体CENP-A表观遗传学定义着丝粒，对染色体分离至关重要。在这里，我们报道了雄性果蝇种系中CENP-A与线粒体ATP合酶复合体亚基之间的相互作用。此外，我们报道了CENP-A以及亚基ATPsyn-α、-β样（ATPsyn-β的睾丸特异性旁系）和-γ的敲除破坏了减数分裂前期I中姐妹着丝粒的内聚力。我们发现这种破坏可能与ATP水平的降低无关。我们确定ATPsyn-α和-β样蛋白定位于减数分裂着丝粒，并且这种定位依赖于CENP-A的存在。我们表明，ATPsynα在体外直接与CENP-A-的N末端相互作用，并且其N末端的截断扰乱了前期I的姐妹着丝粒内聚力。我们建议CENP-A N末端招募ATPsyn-α和-β样着丝粒，以促进不依赖于氧化磷酸化的核功能中的姐妹着丝粒内聚。

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利益冲突声明

作者声明没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
CENP-A和ATP合成酶F的敲除1睾丸中的亚基。一减数分裂前期I S1/2a和S5/6期精母细胞典型核形态的卡通，显示常染色体和性染色体区域（灰色）和相关着丝粒（黑色病灶）。时间安排bam-GAL4显示驱动RNAi。b条CENP-A对照（等基因）S5/6核或RNAi缺失核的免疫荧光显微照片（25 °C）用CENP-A（红色）和CENP-C（绿色）抗体染色(n个 = 3). DNA用DAPI（蓝色）染色。数字表示每个细胞核的着丝粒焦点；插图显示了两个斑点（由白色箭头指示），通常被视为两个单独的着丝粒病灶。比例尺 = 10 微米。c（c）控制核或CENP-A RNAi缺失核中着丝粒焦点的定量（25 °C）在减数分裂I的S1/2a、S5/6、前中期（PMI）或间期。数据来自两个独立实验，每个实验量化50个核。误差线 = SEM。使用未配对学生的t吨-测试****第页 < 0.0001，NS = 不显著，第页 > 0.05.d日显示输入、仅GST和GST-Nterm-CENP-A下拉组分的银染色SDS-PAGE凝胶。箭头表示GST和GST-Nterm-CENP-A的分子量，单位为千道尔顿（kDa）。e（电子）野生型（TRiP等基因）或bam-铝4控制成人睾丸(n个 = 18） 或睾丸中ATPsyn-α(n个 = 17), -β (n个 = 15） ，-β样(n个 = 13） 和–γ(n个 = 12） RNAi在25时耗尽 °C或29 摄氏度。来自两个单独RNAi实验的数据汇集；使用混合对照（野生型和bam-铝4). 误差线 = SEM。使用未配对的学生的t吨-测试，NS = 不重要。（f）5的亮场显微照片 日龄对照成人睾丸(bam-Gal4）或睾丸在25岁时缺乏ATPsyn-α、-β、β样和-γ的RNAi °C（摄氏度）(n个 = 3). 箭头表示精囊，箭头表示睾丸形态异常。比例尺 = 500 微米
图2
图2
ATP合成酶-α/-β/-β样/-γRNAi的着丝粒缺陷。一对照S5/6核或ATPsyn-α、-β、-β样和-γRNAi-缺失核的免疫荧光显微照片（25 °C）用CENP-A（红色）和CENP-C（绿色）抗体染色(n个 = 3). DNA用DAPI（蓝色）染色。数字表示每个细胞核的着丝粒焦点。比例尺 = 10 微米。b条对照S5/6核或ATPsyn-α、-β、-β样和–γRNAi-缺失核的着丝粒焦点定量（25 °C）。对于每个RNAi样本，第页-使用未配对的Student’st吨-测试。数据(n个 = 100个核）是从三个单独的实验中合并而来的。误差线 = 扫描电镜****第页 < 0.0001，NS = 不重要，第页 > 0.05.c（c）对照S1/2a细胞核或ATPsyn-α、-β、-β样和–γ缺失的细胞核RNAi的免疫荧光显微照片（25 °C）用CENP-A（红色）和CENP-C（绿色）抗体染色(n个 = 3). DNA用DAPI（蓝色）染色。比例尺 = 5 微米。d日显示S1/2a、S5/6、减数分裂前期（PMI）或间期I每个对照核或核RNAi缺失的ATPsyn-α、-β、-β样和-γ着丝粒焦点数量的线形图。数据(n个 = 100）从三个单独的实验中汇集，并使用未配对学生的t吨-测试****第页 < 0.0001, ***第页 < 0.001, **第页 < 0.01和*第页 < 0.05. 误差线 = 扫描电镜。e（电子）对照成人睾丸中的相对ATP浓度（等基因，bam-铝4)或测试RNAi缺失（25 °C）对于CENP-A、ATPsyn-α、-β、-β样和-γ。T型-该测试比较了RNAi敲除和等基因对照。实验一式三份，数据来自三个独立的RNAi实验。使用未配对学生的t吨-测试****第页 < 0.0001中*第页 < 0.05，NS = 不重要第页 > 0.05. 误差线 = 扫描电镜。（f）MEI-S332（绿色）、CENP-A（红色）和微管蛋白（灰色）染色的ATPsyn-α或-β样缺失的前中期I期或扰动前中期I核的免疫荧光显微照片(n个 = 2). DNA用DAPI（蓝色）染色。比例尺 = 10 微米
图3
图3
ATP合酶-α/-β/-β样/-γRNAi引起的臂内聚力缺陷。一显示研究中使用的FISH探针染色体位置的卡通。1.686 克/厘米三卫星探测器（绿色）瞄准第二个（2） 五十） 和第三（3 五十） 染色体臂。AATAT重复探头（红色）瞄准第四（4）个 R） 染色体臂。b条1.686的显微照片 克/厘米三FISH探针（绿色）在25时对对照S5/6核或RNAi缺失核进行 ATPsyn-α、-β、-β样和-γ的°C。DNA用DAPI染色；白色圆圈勾勒出原子核(n个 = 3). 比例尺 = 10 微米。c（c）1.686的定量 克/厘米三对照S5/6核内的病灶(n个 = 81）或ATPsyn-α缺失的细胞核RNAi(n个 = 122), -β (n个 = 95），-β样(n个 = 102）和–γ(n个 = 31). 数据来自两个单独的实验。使用未配对学生的t吨-测试***第页 < 0.001之间。误差线 = 扫描电镜。d日在对照S5/6核或缺乏ATPsyn-α、-β、-β样和-γRNAi的核上进行的AATAT FISH探针显微照片（红色）。DNA用DAPI染色；白色圆圈勾勒出原子核(n个 = 3). 比例尺 = 10 微米。e（电子）定量（%细胞核 ± 对照S5/6核或ATPsyn-α，-β，-β样RNA缺失核中AATAT杂交模式的SD）(n个 = 每个实验定量2，50个核）和-γ(n个 = 31个核）
图4
图4
着丝粒处的ATPsyn-α和ATPsynβ样定位。一用抗-His抗体进行的western分析显示，与全长GST-tagged CENP-A（GST-FL-CENP-A）和His-tagged ATPsyn-α、-β或-β样蛋白的体外下拉相互作用(n个 = 3). *GST-FL-CENP-A裂解产物。b条表达YFP-CENP-C（红色）的苍蝇早期S5/6细胞核的免疫荧光显微照片，与ATPsyn-α抗体共同染色（绿色）。DNA用DAPI（蓝色）染色。在三个独立的实验中观察到了共定标现象。比例尺 = 15 微米。B′和B〃表示着丝粒在插图中增大。比例尺 = 1 微米c（c）表达GFP-ATPsyn-β样（绿色）的苍蝇早期S5/6细胞核与CENP-A抗体共同染色的免疫荧光显微照片（红色）。DNA用DAPI（蓝色）染色。在三个独立的实验中观察到了共定标现象。比例尺 = 15 微米。C′和C〃表示着丝粒在插图中增大。比例尺 = 1 微米。d日29岁时CENP-A缺失的成人睾丸的免疫荧光显微照片 °C或对照组（TRIP等基因），用ATPsyn-α（绿色）和CENP-C（红色）抗体染色(n个 = 3). 比例尺 = 15 微米。箭头表示中心点在插图中放大。比例尺 = 1 微米。每个核的着丝粒焦点平均数 ± SEM已标记(n个 = 100个核，来自两个实验）。e（电子）表达GFP-ATPsyn-β样（绿色）的苍蝇成年睾丸的免疫荧光显微照片，其中CENP-A在29岁时RNA干扰缺失 °C或同胞对照组用CENP-A抗体染色（红色）(n个 = 3). 比例尺 = 15 微米。箭头表示插图中增大的着丝粒。比例尺 = 1 微米。每个核的着丝粒焦点平均数 ± SEM已标记(n个 = 100个核，来自两个实验）
图5
图5
对CENP-A N末端着丝粒内聚力的要求。一用His-ATPsyn-α探测包含CENP-A N末端（氨基酸1-126）的肽阵列，然后用抗-His抗体进行西方分析(n个 = 3). CENP-A N末端示意图显示了保守的B1、B2和B3结构域和组蛋白折叠结构域的位置。表显示了相互作用肽8、9、10和19的氨基酸身份。b条GFP-CENP-A全长和GFP-CENP-A-Δ118转基因中，GFP在氨基酸118和119之间的位置示意图。c（c）顶部：定量表达GFP-CENP-A或GFP-CENP-A-Δ118（均为纯合插入）的飞行系每个S5/6核的着丝粒焦点数量，以及内源性CENP-A.数据来自三个单独的RNAi实验。使用未配对学生的t吨-测试****第页 < 0.0001中**第页 < 0.01, *第页 < 0.05. 误差线 = SEM。底部：CENP-C（红色）和CENP-A或GFP（绿色）免疫染色的S5/6细胞核的代表性图像。白色箭头表示两个姐妹着丝粒。标记每个细胞核的着丝粒焦点数量。比例尺 = 10 微米
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    1. Hassell T，Hunt P.To err（减数分裂）是人类的：人类非整倍体的起源。Genet国家牧师。2001;2:280–291. doi:10.1038/35066065。-内政部-公共医学
    1. Allshire RC，Karpen GH.着丝粒染色质的表观遗传调控：老狗，新把戏？Genet国家牧师。2008;9:923–937. doi:10.1038/nrg2466。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Ravi M等。拟南芥着丝粒特异性组蛋白CENH3的减数分裂特异性负载。公共科学图书馆-遗传学。2011;7:e1002121。doi:10.1371/journal.pgen.1002121。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Lermontova I等。拟南芥CENH3基因敲除减少有丝分裂，并通过干扰减数分裂染色体分离导致不育。工厂J.2011；68:40–50. doi:10.1111/j.1365-313X.2011.04664.x。-内政部-公共医学
    1. Ravi M，Chan软件。由着丝粒介导的基因组消除产生的单倍体植物。自然。2010;464:615–618. doi:10.1038/nature08842。-内政部-公共医学

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