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.2018年7月2日10:1817-1826。
doi:10.2147/CMAR。S164911。 2018年eCollection。

lncRNA OGFRP1下调通过AKT/mTOR和Wnt/β-catenin信号通路抑制肝癌进展

魏晨 1, 贾优 1, 齐正 1, 朱月勇 1
附属公司

lncRNA OGFRP1下调通过AKT/mTOR和Wnt/β-catenin信号通路抑制肝癌进展

魏晨等。 癌症管理研究. .

摘要

简介：越来越多的证据表明，长非编码RNA（lncRNAs）通过调节基因表达在肝细胞癌（HCC）的进展中发挥重要作用。然而，肝癌中功能性lncRNAs的鉴定仍不充分。我们的研究旨在研究lncRNA OGFRP1在Hep3B和HepG2细胞中的功能，这是以前从未进行过的功能研究。

方法：利用RNAi技术下调肝癌细胞中lncRNA OGFRP1的表达。定量实时聚合酶链反应检测lncRNA OGFRP1的mRNA表达。通过CCK8和克隆形成试验检测细胞增殖。流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。细胞迁移和侵袭分别通过Scratch和transwell实验进行评估。用Western blot检测信号通路的蛋白表达。

结果：lncRNA OGFRP1下调显著抑制Hep3B细胞增殖(P（P）<0.05). 此外，siOGFRP1转染通过调节相关蛋白的表达诱导Hep3B细胞周期阻滞和凋亡。下调lncRNA OGFRP1也显著抑制Hep3B的细胞迁移和侵袭。lncRNA OGFRP1下调使参与上皮-间充质转化（EMT）的Wnt/β-catenin信号通路失活，包括Wnt3a、β-catentin、N-cadherin和vimentin表达减少，E-cadherin表达增加。我们还发现，lncRNA OGFRP1敲低对Hep3B的抑制作用是通过AKT/mTOR信号通路介导的，而AKT信号激活剂IGF-1可以拯救细胞表型。然而，lncRNA OGFRP1的敲除并不影响HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭。

结论：我们发现lncRNA OGFRP1的下调通过AKT和Wnt/β-catenin信号通路抑制HCC Hep3B细胞的增殖和EMT。然而，lncRNA OGFRP1在不同肝癌细胞系中表现出分化功能，这需要进一步研究。

关键词：AKT/mTOR；EMT；肝癌；Wnt/β-catenin；lncRNA OGFRP1。

PubMed免责声明

利益冲突声明

披露作者报告在这项工作中没有利益冲突。

数字

图1
图1
通过下调lncRNA OGFRP1抑制Hep3B细胞增殖。笔记：(A类)合成了三个候选siRNAs，siRNA1最有效地抑制了lncRNA OGFRP1的表达。(B类)CCK-8分析表明，转染siOGFRP1后Hep3B细胞的OD值显著降低。(C类)转染siOGFRP1后，细胞克隆数显著减少。所有实验重复三次*P（P）< 0.05.缩写：lncRNA，长非编码RNA；CCK-8，细胞计数套件-8。
图2
图2
通过下调lncRNA OGFRP1诱导Hep3B细胞的细胞周期阻滞。笔记：(A类)流式细胞术检测表明，转染siOGFRP1后细胞周期被阻滞在G1期。(B类)Western blot分析表明，转染siOGFRP1后p70S6K和Cyclin D1表达下调。所有实验重复三次*P（P）< 0.05.缩写：lncRNA，长非编码RNA；PI，碘化丙啶；GAPDH，甘油醛磷酸脱氢酶。
图3
图3
下调lncRNA OGFRP1诱导Hep3B细胞凋亡。笔记：(A类)与siNC组相比，siOGFRP1组的总细胞凋亡百分比显著升高。(B类)p53信号通路被lncRNA OGFRP1下调激活。所有实验重复三次*P（P）< 0.05.缩写：lncRNA，长非编码RNA；PI，碘化丙啶；GAPDH，甘油醛磷酸脱氢酶。
图4
图4
lncRNA OGFRP1下调抑制Hep3B细胞迁移和EMT-相关Wnt/β-catenin信号通路。笔记：(A类)划痕实验证实，转染siOGFRP1后Hep3B的细胞迁移受到显著抑制。比例尺，100μm。(B类)Transwell分析证实了siOGFRP1的抗侵袭作用。比例尺，50 nm。(C类)Wnt/β-catenin信号通路的Western blot分析。所有实验都重复了三次*P（P）< 0.05.缩写：lncRNA，长非编码RNA；EMT，上皮-间质转化；GAPDH，甘油醛磷酸脱氢酶。
图5
图5
在lncRNA OGFRP1下调过程中，AKT/mTOR信号通路失活。笔记：(A类)p-AKT和p-mTOR带的Western blot图像。(B类)p-AKT和p-mTOR水平的量化结果。(C类)IGF-1挽救了siOGFRP1诱导的细胞表型变化。所有实验重复三次*P（P）< 0.05.缩写：lncRNA，长非编码RNA。
图6
图6
lncRNA OGFRP1下调对HepG2细胞增殖和运动无明显影响。笔记：(A类)siRNA1和siRNA3能有效抑制HepG2细胞lncRNA OGFRP1的表达。(B类)通过细胞计数kit-8分析进行HepG2细胞增殖分析。(C类)通过克隆形成试验进行HepG2细胞增殖分析。(D类)划痕法检测HepG2细胞迁移。比例尺，100μm。(E类)通过跨孔侵袭实验检测HepG2细胞的侵袭性。比例尺，50μm。所有实验都重复了三次*P（P）< 0.05.缩写：lncRNA，长非编码RNA。
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