跳到主页面内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2018年8月；20(8):800-812.
doi:10.1016/j.neo.2018.05.008。 Epub 2018年7月4日。

三维混合细胞球体模拟基质介导的肝癌化疗耐受性和侵袭性迁移

伊夫蒂哈·阿里·卡瓦尔 1, 钟国公园 2, 恩孙荣（Eun Sun Jung） 三, Myung Ah Lee（李明阿） 4, 张苏万 5, Hyo-Jeong Kuh先生 6
附属公司

三维混合细胞球体模拟基质介导的肝细胞癌化疗耐药性和侵袭迁移

伊夫蒂哈·阿里·卡瓦尔等。 肿瘤形成. 2018年8月.

摘要

肿瘤微环境（TME）中癌细胞与癌相关成纤维细胞（CAF）之间的相互作用在促进前纤维化微环境和上皮-间充质转化（EMT），导致肝癌（HCC）的肿瘤进展和耐药性方面发挥着重要作用。在本研究中，我们使用Huh-7肝癌细胞和LX-2星状细胞建立了一个混合细胞球体模型，以模拟体内肿瘤环境中肿瘤与CAF的相互作用。球形细胞是在超低附着板中从单个癌细胞（单球形细胞）或作为混合物（混合细胞球形细胞）培养而成。成功地建立了致密、混合良好且富含基质的混合细胞球体，其具有异质性细胞-细胞接触，表现为间隙连接和桥粒的存在。与单个球体中表达的水平相比，混合细胞球体中I型胶原（Col-I）和促纤维化因子（如转化生长因子β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF））的表达增强。E-cadherin和vimentin的表达改变显示，混合细胞球体中EMT表型明显。在混合细胞球体中观察到不同的药物敏感性，只有索拉非尼和奥沙利铂表现出剂量依赖性的抗增殖作用。同时使用TGF-β抑制剂治疗进一步提高了索拉非尼在混合细胞球体中的疗效，表明TGF-。在3D基质侵袭实验中，混合细胞球体显示成纤维细胞领导的集体细胞运动。总的来说，我们的结果提供了证据，证明Huh-7和LX-2细胞形成的混合细胞球体很好地代表了HCC肿瘤及其体内TME，因此有助于研究肿瘤-基质相互作用，作为与耐药性和细胞运动性增加相关的机制。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
三维混合细胞球体的形态特征。（A） HCC细胞（Huh-7）和HSC（LX-2）单独接种（单球）或混合接种（1:3比例，混合细胞球体），并在培养5天期间监测3D生长。比例尺，100μm。（B） 第5天单细胞和混合细胞球体的SEM和TEM图像显示了外围细胞质突起（红色箭头）和包含细胞-细胞相互作用的亚细胞结构：微绒毛（*）、缝隙连接（黄色箭头）和桥粒（黄色箭头头）。比例尺，2μm。H、 Huh-7；五十、 LX-2；NC，坏死细胞；¼，脂肪颗粒；+，糖原颗粒。
图2
图2
LX-2细胞和基质激活标记物在三维混合细胞球体中的分布。（A） 在与Huh-7细胞混合之前，用PKH26示踪剂（红色荧光）标记LX-2细胞。培养3天和5天的混合细胞球体的冷冻切片用于荧光成像。反染色，DAPI（蓝色）。比例尺，100μm。（B） 培养5天后，用免疫荧光染色法检测混合细胞球体中HIF-1α的表达。（C） 培养5天后，在LX-2和Huh-7单球体和混合细胞球体中检测到α-SMA、Col-I、TGF-β1和CTGF的表达。（D） 5天后，单球体和混合细胞球体横截面上染色生物标记物的相对荧光强度。比例尺，100μm。箭头，原纤Col-I排列。通过将染色强度标准化为DAPI（蓝色）来计算相对强度，并表示为五个以上重复的平均值±SE。N.s.=无意义**P（P）<.005和***P（P）<.001（通过单向方差分析）相对于单球体总和。
图3
图3
Huh-7/LX-2混合细胞球体与人肝癌和Huh-7异种移植物基质生物标记物的免疫组织学比较。人体肿瘤样本取自患者FFPE档案（详见方法）。皮下注射1×10的雄性Balb/c小鼠4周后获得Huh-7异种移植物7细胞。H&E染色和免疫组织学检测α-SMA、Col-I、TGF-β1和CTGF在混合细胞球体、人肝癌和异种移植组织以及正常小鼠肝脏石蜡切片中的表达。所有抗体都对人和小鼠抗原具有特异性。比例尺，100μm（插入）和50μm。T、 肿瘤区域；NT，非肿瘤区；S、 基质区；箭头，原纤维Col-I排列。
图4
图4
EMT标记在混合细胞球体和体内组织。（A） 通过LX-2和Huh-7单球体和混合细胞球体石蜡切片的免疫荧光染色检测EMT标记物E-cadherin和vimentin的表达。反染色，DAPI（蓝色）。比例尺，100μm。切片间的相对强度表示为五次以上重复的平均值±SE**P（P）<.005和***P（P）<.001相对于Huh-7单球体。（B） EMT标记物在Huh-7/LX-2混合细胞球体中的表达与人肝癌和邻近非肿瘤（NT）及肝癌异种移植组织标本石蜡切片中的表达比较。所有抗体均对人和小鼠抗原具有特异性。比例尺，100μm（插入）和50μm。T、 肿瘤区域；S、 基质区；箭头，面片中的表达式。
图5
图5
抗癌药物反应。（A） 二维和三维条件下培养的Huh-7和LX-2细胞索拉非尼敏感性的比较。将细胞暴露于不同浓度的索拉非尼（5、10、20、30和40μM）48小时，并通过APH测定分析细胞活力。（B） 球体培养5天，暴露于含有药物（10、30、100和300μM）的培养基中48小时，并通过APH分析检测药物活性。（C） 在索拉非尼（20μM）与TEW-7197（10μM）或己酮可可碱（100μM）联合治疗后，观察到混合细胞球体中的细胞活力降低。数据表示为来自三个或更多独立实验的五个以上重复的平均值±SE**P（P）<.005和***P（P）<.001（通过单因素方差分析）相对于单剂治疗的总和。（D） 索拉非尼和TEW-7197联合治疗后混合细胞球体中Ki-67和c-PARP表达水平的变化。反染色，DAPI（蓝色）。比例尺，100μm**P（P）<.005，相对于单剂治疗。
图6
图6
混合细胞球体的侵入迁移剖面。（A） 细胞从嵌入Matrigel中的单球体侵入和迁移72小时。比例尺，100μm。（B） 在混合细胞球体中，24小时后可见具有内陷体的小细胞突起，其在72小时内连续延伸到基质中。使用ImageJ软件量化相对侵犯面积。比例尺，100μm*P（P）<0.05和**P（P）< .005. （C） Huh-7细胞的荧光染料示踪（PKH26：红色），以显示混合细胞球体的迁移。红色箭头，侵入体；白色箭头，PKH26标记的Huh-7细胞；黄色箭头，DAPI染色的（蓝色）LX-2细胞；虚线，球体边缘。比例尺，50μm。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. El-Serag HB公司。肝细胞癌。《新英格兰医学杂志》2011；365:1118–1127.-公共医学
    1. 布朗KS。肝细胞癌和肝转移的化疗和其他全身治疗。Semin Intervent Radiol公司。2006;23:99–108。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Waly Raphael S，Yangde Z，Yuxiang C.肝细胞癌：关注不同方面的管理。ISRN Oncol公司。2012;2012:421673.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. 邓GL，曾S，沈H.肝癌化疗与靶向治疗：新进展与挑战。世界肝病杂志。2015;7:787–798.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Llove JM、Ricci S、Mazzaferro V、Hilgard P、Gane E、Blanc JF、de Oliveira AC、Santoro A、Raoul JL、Forner A.Sorafenib治疗晚期肝癌。《N Engl J Med.2008》；359:378–390.-公共医学

出版物类型

MeSH术语