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.2018年9月15日:322:26-35。
doi:10.1016/j.jneuroim.2018.06.007。 Epub 2018年6月11日。

Toll样受体4、5、6和7在非人灵长类视网膜神经元中组成性表达

附属公司

Toll样受体4、5、6和7在非人灵长类视网膜神经元中组成性表达

莫妮卡·M·绍特等。 神经免疫学杂志. .

摘要

本研究的目的是表征非人类灵长类动物(NHP)神经视网膜组织中Toll样受体(TLR)的细胞特异性表达模式。用猕猴视网膜组织裂解物免疫印迹法检测TLR4、5、6和7蛋白,定量PCR(qPCR)显示TLR4-7 mRNA表达。免疫荧光(IF)显微镜在猕猴神经视网膜的多种细胞类型中检测到TLRs 4-7,包括Muller细胞、视网膜神经节细胞(RGC)、无长突细胞和双极细胞。这些结果表明,TLRs 4-7由NHP视网膜中的神经元组成性表达,增加了这些细胞参与视网膜固有炎症反应的可能性。

关键词:炎症;先天免疫;非人灵长类;视网膜;类Toll受体。

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数字

图1
图1。免疫印迹法在猕猴神经视网膜组织裂解物中检测到TLRs 4-7
猕猴视网膜组织裂解物的免疫印迹显示TLR 4-7蛋白的表达。表2列出了每种抗体的视网膜裂解物装载量和免疫印迹条件。该图由4个单独的免疫印迹组成。MWM通道中的条带表示BenchMark预染色蛋白质标准物在4-15%Mini-PROTEAN TGX预制凝胶上的迁移。
图2
图2。定量PCR检测猕猴神经视网膜组织中TLRs 4-7 mRNA
qPCR引物分析证实,与无引物对照组相比,食蟹猴和恒河猴视网膜组织中TLRs 4-7 mRNA的表达。ACTB=β-肌动蛋白内控基因控制。
图3
图3。猕猴神经视网膜组织TLRs 4-7的表达模式
用猕猴视网膜组织免疫荧光法检测TLR4-7蛋白。面板A中的箭头表示感光层中的自体荧光。面板B–D中的箭头表示TLR阳性细胞。感光层(PR)、外核层(ONL)、外丛状层(OPL)、内核层(INL)、神经节细胞层(GCL)。比例尺=20μm。
图4
图4。TLR7与Muller细胞标记波形蛋白共定位
A) 箭头表示丝状视网膜细胞的TLR7染色。B) 箭头表示Muller细胞的波形蛋白染色。C) 带有箭头的合并图像表明TLR7和波形蛋白阳性细胞的共同定位。外部丛状层(OPL)、内部核层(INL)、神经节细胞层(GCL)。比例尺=20μm。
图5
图5。TLR4不与星形胶质细胞标记物GFAP共定位
A) 长箭头表示猕猴视网膜GCL中TLR4染色。B) 箭头表示星形胶质细胞的GFAP染色。C) 合并的图像表明TLR4(长箭头)和GFAP(箭头)没有共同定位。内核层(INL)、神经节细胞层(GCL)。比例尺=20μm。
图6
图6。TLR5与RGC标记RBPMS共同定位
A) 箭头表示GCL中大圆形细胞的TLR5染色。B) 箭头表示RBPMS正RGC。C) 合并图像,带有指示TLR5和RBPMS阳性细胞的箭头。神经节细胞层(GCL)。比例尺=20μm。
图7
图7。TLR6与无长突细胞标记物钙调素共定位
A) 箭头和星号表示猕猴视网膜组织INL中圆形细胞的TLR6染色。B) 箭头和星号表示钙调素阳性细胞染色。C) 带有箭头和星号的合并图像表示TLR6和钙调素阳性细胞的共同定位。外核层(ONL)、内核层(INL)、神经节细胞层(GCL)。比例尺=20μm。
图8
图8。猕猴视网膜中的双极细胞表达TLR4和6
A) 箭头和星号表示猕猴视网膜INL中圆形细胞TLR4染色。B) 箭头和星号表示钙结合蛋白阳性OFF双极细胞。C) 合并后的图像显示TLR4和calbindin阳性细胞共同定位。D) 箭头表示圆形INL细胞的TLR6染色。E) 箭头表示PKC-α阳性杆状双极细胞。F) 合并图像显示TLR6和PKC-α染色细胞的共同定位。内核层(INL)、神经节细胞层(GCL)。比例尺=20μm。
图9
图9。猕猴视网膜小胶质细胞由CD11b和Iba 1抗体鉴定
A、 B)箭头表示猕猴视网膜中小胶质细胞的CD11b染色。自动荧光出现在面板A的感光层中。C)箭头表示TLR7阳性视网膜细胞。D) 星号显示视网膜小胶质细胞的Iba 1染色。E) 合并图像表明TLR7和Iba 1染色没有共同定位。光受体(PR)、外核层(ONL)、外丛状层(OPL)、内核层(INL)、内丛状层、神经节细胞层(GCL)。比例尺=20μm。

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引用人

工具书类

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