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.2018年6月26日；19（7）：1881年。
doi:10.3390/ijms19071881。

缺氧小鼠恶性间皮瘤的实验模型

迪迪埃·科林 1, 大卫·科特特·杜穆林 2, 安娜·费弗尔 三, 圣日耳曼 4, 弗雷德里克·特里波内兹（Frédéric Triponez） 5, Véronique Serre-Beinier公司 6
附属公司

缺氧小鼠恶性间皮瘤的实验模型

迪迪埃·科林等。 国际分子科学杂志. .

摘要

恶性胸膜间皮瘤（MPM）是一种由石棉暴露引起的胸部侵袭性癌，难以诊断和治疗。在这里，我们描述了由人间皮瘤细胞（设计为H2052/484）组成的活体原位异种移植模型的特征，该细胞来源于胸膜NCI-H2052肿瘤，注射到部分免疫缺陷的裸鼠体内。我们评估了肿瘤形成和肿瘤依赖性炎症模式。H2052/484细胞从亲代NCI-H2052细胞中保守了它们的间皮瘤表型和大多数特征。胸膜内注射H2052/484细胞后，几乎所有小鼠（86%）在14天内发生胸部肿瘤，比亲代NCI-H2052细胞更快。当小鼠被安乐死后，检查胸膜冲洗液的免疫细胞谱。胸膜免疫细胞数量随着肿瘤的发展而增加。有趣的是，髓源性抑制细胞和巨噬细胞（尤其是CD206）的比例⁺ 如先前在免疫活性小鼠中观察到的，患有大型间皮瘤的小鼠胸膜液中M2巨噬细胞数量增加。这种可靠的原位模型再现了人类间皮瘤，可能用于研究新的治疗策略。

关键词：无性系小鼠；癌症；免疫细胞；间皮瘤；原位异种移植；胸膜。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。创始发起人在研究的设计中没有任何作用；收集、分析或解释数据；在撰写手稿时，以及在决定公布结果时。

数字

图1
图1
H2052/484细胞（蓝绿色）的细胞活力（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化铵，MTT）和增殖（结晶紫）与亲代H2052细胞（蓝色）相似。在添加不同比例胎牛血清（FBS）的培养基中培养24 h（散列条）和48 h（完整条）后，评估五种恶性胸膜间皮瘤（MPM）细胞系（粉红色H28；蓝色H2052；蓝色H21052/484；灰色JL-1和紫色MSTO-211H）的活力和增殖.DO，光密度。条形图为n个=3–7个实验。FBS浓度与0%之间的Kruskal–Wallis检验：*第页< 0.05, **第页<0.01***第页< 0.001.
图2
图2
H2052/484 MPM细胞表达高水平的上皮-间充质（EMT）转录因子。在亲代H2052细胞、H2052/484细胞和其他三种MPM细胞系（H28、JL-1和MSTO）中测量EMT标记物的mRNA水平。相对mRNA表达水平通过RT-qPCR测量，并以与亲代H2052细胞中mRNA水平的比率表示。数据表示三个独立实验的平均值（±SD）。MPM细胞系之间的Kruskal–Wallis试验：*第页< 0.05, **第页< 0.01.
图3
图3
H2052/484细胞表达上皮和间充质标记物。通过western blotting检测EMT标记物在H2052/484细胞和另外两个MPM细胞系（JL-1和MSTO）中的蛋白表达。显示了代表性的蛋白质印迹结果；红色虚线表示手动剪切在相同凝胶上运行且相同暴露的样品中检测到的条带。蛋白质表达水平表示为与H2052/484细胞中相应蛋白质水平的比率。数据表示三个独立实验的平均值（±SD）。MPM细胞系之间的Kruskal–Wallis试验：*第页< 0.05.
图4
图4
H2052/484细胞在裸鼠体内形成胸膜间皮瘤。腹腔注射H2052/484细胞（1×10）6细胞）转化为裸鼠（单个实验；n个= 28). (一)H2052/484肿瘤游离于胸腔或附着于主动脉弓（靠近胸腺原基，左图，黑色箭头）、下腔静脉（左图）、胸肌（中图）或肺（右图）。(b条)在不同时间点处死小鼠（终点标准），并按照表1所述标准在死后评估肿瘤评分。(c（c）)胸膜内注射H2052/484 MPM细胞后无胸腺小鼠的存活。
图4
图4
H2052/484细胞在裸鼠体内形成胸膜间皮瘤。腹腔注射H2052/484细胞（1×10）6细胞）转化为裸鼠（单个实验；n个= 28). (一)H2052/484肿瘤游离于胸腔或附着于主动脉弓（靠近胸腺原基，左图，黑色箭头）、下腔静脉（左图）、胸肌（中图）或肺（右图）。(b条)在不同的时间点处死小鼠（终点标准），并根据表1中描述的标准在死后评估肿瘤评分。(c（c）)胸膜内注射H2052/484 MPM细胞后无胸腺小鼠的存活。
图5
图5
H2052/484衍生原位肿瘤的特征。(一)细胞注射后第46天，在裸鼠体内胸腔内注射H2052/484细胞后产生的两个代表性胸膜MPM的血红素-伊红（HE）切片。在最大的肿瘤中发现了坏死区域（N）（右图）。比例尺：500μm。(b条)H2052/484肿瘤的血管化：左侧，CD31（绿色，内皮标记物）在肿瘤中表达；右图，HE染色显示肿瘤血管中有红细胞（黑色箭头）。比例尺：20μm。(c（c）)H2052/484肿瘤中发现了代表细胞凋亡的细胞增殖和DNA损伤。肿瘤切片用抗Ki67（细胞增殖）、抗γ-H2AX（DNA损伤和细胞凋亡）和DAPI（细胞核反染，蓝色）染色（绿色）。比例尺：500μm和50μm。
图5
图5
H2052/484衍生原位肿瘤的特征。(一)细胞注射后第46天，在裸鼠体内胸腔内注射H2052/484细胞后产生的两个代表性胸膜MPM的血红素-伊红（HE）切片。在最大的肿瘤中发现了坏死区域（N）（右图）。比例尺：500μm。(b条)H2052/484肿瘤的血管化：左侧，CD31（绿色，内皮标记物）在肿瘤中表达；右图，HE染色显示肿瘤血管中有红细胞（黑色箭头）。比例尺：20μm。(c（c）)H2052/484肿瘤中发现了代表细胞凋亡的细胞增殖和DNA损伤。肿瘤切片用抗Ki67（细胞增殖）、抗γ-H2AX（DNA损伤和细胞凋亡）和DAPI（核复染，蓝色）染色（绿色）。比例尺：500μm和50μm。
图6
图6
原位H2052/484肿瘤中MPM标记物和巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、CD74和CD44的表达。H2052/484胸内肿瘤的代表性显微照片(一)抗钙调素和抗间皮素(b条)抗MIF、抗CD74和抗CD44抗体。比例尺：20μm。
图7
图7
H2052/484荷瘤小鼠胸膜液中的免疫细胞数量增加。(一)首先根据侧向散射（SSC-A）与正向散射（FSC-A），识别出活的免疫细胞群（淋巴细胞（蓝色）、单核细胞（黄色）、巨噬细胞（红色）和粒细胞（绿色））。利用脉冲几何选通FSC-H×FSC-a图排除二倍体。显示了胸膜细胞的典型流式细胞仪点图和散点图。数量的比较(b条)总细胞数(c（c）)淋巴细胞、单核细胞/巨噬细胞，以及(d日)无肿瘤小鼠（空点）和荷瘤小鼠胸膜液中的粒细胞得分分别为1-3分（1-3分；半点）和4-6分（4-6分，全点）。数据表示平均值±SEM。使用Kruskal–Wallis检验进行比较*第页< 0.05, **第页<0.01****第页< 0.0001.
图8
图8
H2052/484荷瘤小鼠胸膜液中免疫细胞群的比例随着肿瘤评分的变化而变化。以下百分比的比较(一)淋巴细胞总数(b条)单核细胞/巨噬细胞总数(c（c）)CD19编号−CD11b型+80层/四层+巨噬细胞和CD206+M2巨噬细胞，以及(d日)无肿瘤小鼠胸膜液中的粒细胞（空点）和发育评分为1-3分（半点）和4-6分（全点）的荷瘤小鼠。百分比表示流式细胞术测定的胸膜细胞总数中每个细胞群的数量。数据表示平均值±SEM。使用Kruskal–Wallis检验进行比较*第页< 0.05.
图8
图8
H2052/484荷瘤小鼠胸膜液中免疫细胞群的比例随着肿瘤评分的变化而变化。以下百分比的比较(一)淋巴细胞总数(b条)单核细胞/巨噬细胞总数(c（c）)CD19编号−CD11b型+80层/四层+巨噬细胞和CD206+M2巨噬细胞，以及(d日)无肿瘤小鼠胸膜液中的粒细胞（空点）和发育评分为1-3分（半点）和4-6分（全点）的荷瘤小鼠。百分比表示流式细胞术测定的胸膜细胞总数中每个细胞群的数量。数据表示平均值±SEM。使用Kruskal–Wallis检验进行比较*第页< 0.05.
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