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.2018年6月;15(6):5243-5250.
doi:10.3892/etm.2018.6099。 Epub 2018年4月25日。

一种新型胚胎动脉CD133种子敷料+细胞和负载Sirt1激动剂SRT1720加速糖尿病缺血性溃疡的愈合

附属机构

一种新型胚胎动脉CD133种子敷料+细胞并负载Sirt1激动剂SRT1720加速糖尿病缺血性溃疡的愈合

潘克成等。 实验治疗学. 2018年6月.

摘要

糖尿病患者出现的顽固性缺血性溃疡是一个重大的临床挑战。胚胎动脉分化簇133+细胞(EACC)可促进糖尿病溃疡的愈合;然而,糖尿病溃疡中的高糖环境降低了移植EACC的存活率并抑制其生物功能。此外,糖尿病缺血性溃疡的微循环受损,这抑制了EACC的有益作用。在目前的研究中,Sirt1激动剂SRT1720被选为治疗药物,并装入由PLGA、胶原蛋白和蚕丝(PCSS)组成的敷料中,该敷料采用静电纺丝技术制成。EACC接种在PCSS敷料上,用于治疗糖尿病溃疡。结果表明,SRT1720促进EACC增殖,增强血管内皮生长因子A、白细胞介素8和碱性成纤维细胞生长因子的分泌,抑制肿瘤坏死因子α的分泌。此外,SRT1720还能促进EACC的旁分泌功能,促进人脐静脉内皮细胞的增殖和迁移。PCSS诱导SRT1720在15天内稳定释放,并将接种EACC的PCSS(PCSS-EACCs)移植到糖尿病小鼠的糖尿病缺血性溃疡中。这些实验结果表明,移植PCSS-EACCs后,糖尿病缺血性溃疡的血管生成和愈合显著改善。因此,PCSS-EACCs可能是糖尿病缺血性溃疡的一种新的有效治疗方法。

关键词:糖尿病;分化为133+细胞的胚胎动脉簇;旁分泌;sirtuin1;溃疡。

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数字

图1。
图1。
PCSS-EACC的特点。(A) 用扫描电镜观察PCSS;PCSS表面规则、均匀。比例尺=10µm。(B) 使用激光扫描显微镜对生物材料进行成像。(C) 使用扫描电子显微镜对PCSS上EACC的生长进行成像。比例尺=100µm。(D) PCSS发布SRT1720;释放速率稳定且持久。EACC,胚胎动脉分化簇133+细胞;PCSS、胶原蛋白胶束聚乳酸、蚕丝和SRT1720。
图2。
图2。
SRT1720促进EACC的生物功能。(A) 用10 mM SRT1720治疗EACC,并用EdU试剂盒检测细胞增殖。比例尺=200µm。(B) 细胞增殖率的量化。在正常组,EACC在正常培养基中培养,收集该培养基进行进一步检测;基线组在高糖培养基中培养EACC,收集条件培养基进行进一步检测;EACC也在高糖培养基和PCS、SRT1720或PCSS中共同培养,收集条件培养基进行进一步检测。在来自所有组的条件培养基上进行酶联免疫吸附测定以进行测量。(C) TNF-α、(D)VEGFA、(E)IL-8和(F)bFGF水平**P<0.01和***P<0.005。EACC,胚胎动脉分化簇133+细胞;血管内皮生长因子A;IL-8、IL-8;PCS,与胶原蛋白和蚕丝混合的聚乳酸;PCSS,PCS与SRT1720混合;肿瘤坏死因子α;bFGF,碱性成纤维细胞生长因子。
图3。
图3。
PCSS处理的EACC促进HUVEC的增殖和迁移。收集经不同药剂处理的EACC条件培养基,对HUVEC进行划伤和侵袭试验。PCSS处理的EACC条件培养基显著促进HUVEC的(A)迁移(bar=500µm)和(B)侵袭(bar=100µm。对(C)擦伤和(D)侵袭试验进行定量**P<0.01和***P<0.005。EACC,胚胎动脉分化簇133+细胞;PCS,与胶原蛋白和蚕丝混合的聚乳酸;PCSS,PCS与SRT1720混合;HUVECs,人脐静脉内皮细胞。
图4。
图4。
PCSS-EACCs促进糖尿病缺血性溃疡的愈合。(A) 将EACC接种在PCSS上并移植到小鼠糖尿病缺血性溃疡中。(B和C)在第0天、第3天、第7天和第14天记录和拍摄小鼠的伤口愈合情况,并量化伤口面积。EACC,胚胎动脉分化簇133+细胞;PCS,与胶原蛋白和蚕丝混合的聚乳酸;PCSS,PCS与SRT1720混合。
图5。
图5。
PCSS-EACCs在糖尿病缺血性溃疡愈合过程中促进毛细血管新生。14天后收集溃疡组织,(A)苏木精-伊红染色(bar=100µm)和(B)免疫荧光染色检测分化簇31的表达(bar=100µm;随后,拍摄血管密度照片并统计毛细血管数量。(C) 溃疡组织中毛细血管数量的量化**P<0.01和***P<0.005。EACC,胚胎动脉分化簇133+细胞;PCS,与胶原蛋白和丝绸混合的聚乳酸;PCSS,PCS与SRT1720混合。

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