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.2018年6月13日；8(1):9072.
doi:10.1038/s41598-018-27280-w。

昼夜节律时钟成分PERIOD2调节Na的日表达+/H（H）+交换器调节因子-1及其支架作用

Yuya Tsurudome公司 1, 佐托鲁·小柳木 1 2, 菅直人Takumi Kanemitsu 1, Chiharu Katamune公司 1, 小田正彦 1, Yuki Kanado公司 1, 加藤水木 1, 森田明丽 1, 于塔哈拉 三, 名古屋松下 1 2, Shigenobu Shibata公司 4, Shigehiro Ohdo先生 5
附属公司

昼夜节律时钟成分PERIOD2调节Na的日表达+/H（H）+交换器调节因子-1及其支架作用

Yuya Tsurudome公司等。 科学代表. .

摘要

许多不同的细胞表面蛋白通过支架蛋白锚定在细胞骨架上。纳+/H（H）+交换调节因子-1（NHERF1）由Slc9a3r1基因编码，作为支架蛋白发挥作用，参与调节各种细胞表面蛋白的膜表达。在这里，我们证明了昼夜节律时钟成分PERIOD2（PER2）调节小鼠Slc9a3r1基因的转录，从而在小鼠肝脏中产生NHERF1的昼夜累积。Slc9a3r1的基本表达依赖于p65/p50的转录激活。PER2与p65蛋白结合，阻止p65/p50介导的Slc9a3r1反式激活。PER2和p65之间的时间依赖性相互作用是Slc9a3r1/NHERF1肝脏表达昼夜振荡的基础。小鼠肝脏的免疫沉淀实验和液相色谱-质谱分析结果表明，NHERF1与脂肪酸转运蛋白-5（FATP5）存在时间依赖性相互作用。NHERF1蛋白的暂时积累稳定了FATP5的质膜定位，从而提高了肝脏在一天中某些时候对脂肪酸的摄取。我们的结果表明，PER2在调节小鼠肝脏NHERF1日表达方面的作用尚不明确。这种机制也有助于肝细胞吸收脂肪酸能力的日变化。

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数字

图1
图1
PER2抑制p65/p50介导的Slc9a3r1型转录。(一)包含串联重复E-box（4）的荧光素酶报告结构的示意图 × 电子箱：：Luc）、RORE（4个 × ROREs：：Luc），D站点（4 × D站点：：Luc）或PPRE（4 × PPREs：：Luc）。(b条)时钟基因产物对4 × 电子邮箱：：Luc，4 × ROREs:：Luc，4岁 × D站点：：Luc，4 × PPRE:：Luc和第9页第3页（−200/+168）：：吕克。对照组用空载体（pcDNA3.1）代替表达质粒转染。表达质粒的存在（+）或缺失（−）（0.5 µg）。每个值代表平均值 ± s.e.m.公司(n个 = 6). **P（P） < 0.01，两组间差异显著。（使用Tukey-Kramer事后测试进行方差分析）。(c（c）)细胞被转染Slc9a3r1型（−200/+168）：：Luc和Slc9a3r1型（+35/+168）：：Luc缺席或在场每2个表达质粒。每个值都用s.e.m表示平均值(n个 = 6). **P（P） < 0.01，两组间差异显著(F类11,60 = 58.935;P（P） < 0.001; Tukey-Kramer事后测试的方差分析）。(d日)增强Slc9a3r1型（−200/+168）：：勒克英寸每2个突变体(每2个米/米)单元格。小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）由野生型和每2个米/米老鼠。细胞被转染Slc9a3r1型(−200/+168）：：Luc或Slc9a3r1型（+35/+168）：：吕克。每个值都用s.e.m表示平均值(n个 = 6). **P（P） < 0.01，两组间差异显著(F类3,20 = 27.200;P（P） < 0.001; Tukey-Kramer事后测试的方差分析）。(e（电子）)miRNA对PER2的下调增强了Slc9a3r1型（−200/+168）：：吕克。左面板显示了miRNA-表达载体转染细胞中PER2蛋白的免疫印迹分析的代表性照片。每个值都用s.e.m表示平均值(n个 = 6） **P（P） < 0.01，两组间差异显著(F类3,20 = 516.818;P（P） < 0.001; Tukey-Kramer事后测试的方差分析）。(（f）)用含有一致NF-кB反应元件（NF-κB-RE:：Luc）的荧光素酶报告载体转染细胞，Slc9a3r1型（−200/+168）：：Luc，或Slc9a3r1型（+35/+168）：：在没有或存在编码p65、p50或PER2的表达质粒时为Luc。每个值都用s.e.m表示平均值(n个 = 6). **P（P） < 0.01，与对照组差异显著；##P（P） < 0.01，与p65/p50转染组显著不同(F类3,20 = 127.370;P（P） < 0.001适用于Slc9a3r1型（−200/+168）：勒克；F类3,20 = 68.062;P（P） < NF-κB-RE:：Luc为0.001；Tukey-Kramer事后测试的方差分析）。补遗图10和11显示了蛋白质印迹的全尺寸图像。
图2
图2
(一)的时间表达模式Slc9a3r1型野生型和非野生型肝脏中的mRNA每2个米/米小鼠保持12小时的光/暗循环（左）和恒定的黑暗条件（右）。每个值代表4-6只小鼠的结果的s.e.m平均值。在Slc9a3r1型野生型小鼠的mRNA水平(F类5,30 = 5.829；P（P） < 0.001; 方差分析）**P（P） < 0.01; *P（P） < 0.05，与相应时间点的野生型小鼠有显著差异(F类11,92 = 5.764;P（P） < 0.001; Tukey-Kramer事后测试的方差分析）。##P（P） < 0.01，两组间差异显著(F类3,12 = 37.113,P（P） < 0.001; Tukey-Kramer事后测试的方差分析）。(b条)NHERF1蛋白在野生型和非野生型肝质膜中的时间表达谱每2个米/米小鼠保持12小时的光/暗循环（左）和恒定的黑暗条件（右）。每个值代表4–10只小鼠数据的平均值（s.e.m.）。NHERF1蛋白水平存在显著的时间依赖性变化(F类5,54 = 28.402;P（P） < 0.001; 方差分析）*P（P） < 0.05，在相应的时间点与野生型小鼠显著不同(F类11,119 = 5.618;P（P） < 0.001; Tukey-Kramer事后测试的方差分析）。##P（P） < 0.01，两组间差异显著(F类3,12 = 37.113,P（P） < 0.001; Tukey-Kramer事后测试的方差分析）。对于这两个面板，野生型小鼠的平均峰值设置为100。免疫印迹的全尺寸图像如补充图12所示。
图3
图3
PER2与p65的相互作用是p65结合到Slc9a3r1型发起人。(一)野生型和非野生型肝细胞核组分p65和p50的时间表达谱每2个米/米小鼠维持12小时的光/暗循环。每个值代表6只小鼠数据的平均值（s.e.m.）。(b条)野生型和非野生型肝细胞核中PER2和p65的时间依赖性相互作用每2个米/米老鼠。在ZT2和ZT14处制备的核提取物用针对p65的抗体进行免疫沉淀（IP），并通过SDS-PAGE进行分离。用PER2或p65抗体孵育印迹。(c（c）)p65与Slc9a3r1型野生型和非野生型肝脏中的启动子每2个米/米小鼠维持12小时的光/暗循环。在ZT2和ZT14收集的肝脏交叉染色质用抗p65抗体进行免疫沉淀。实心箭头表示包含NF-kB结合位点的PCR扩增区域。每个值代表3只小鼠结果的平均值（s.e.m.）*P（P） < 0.05，两个时间点之间存在显著差异(F类3,8 = 4.500;P（P） = 0.039; Tukey-Kramer事后测试的方差分析）。免疫印迹的全尺寸图像如补充图13和14所示。
图4
图4
NHERF1与肝膜部分的FATP5相互作用具有时间依赖性。(一)使用抗NHERF1抗体对来自肝膜部分的免疫沉淀物（IP）中的FATP5和EZRIN进行蛋白质印迹分析。(b条)从NHERF1表达的Hepa1-6细胞制备的质膜上的FATP5蛋白水平。用编码质粒载体转染细胞Slc9a3r1型(Slc9a3r1型vec.）。对照组用空载体（pcDNA3.1）代替表达质粒转染。表示存在（+）或不存在（-）表达质粒（每个0.5μg）。考马斯亮蓝（CBB）表明膜部分的蛋白质负载相等。每个值都用s.e.m表示平均值(n个 = 6). **P（P） < 0.01，与对照组差异显著(t吨10 = FATP5为6.130；t吨10 = NHERF1为3.919；未成对的t吨测试，双面）。(c（c）)FATP5在表达NHERF1的Hepa1-6细胞中的转运活性。每个值都用s.e.m表示平均值(n个 = 6). **P（P） < 0.01; *P（P） < 0.05，与相应时间的对照细胞有显著差异(F类5,50 = 48.556；P（P） < 0.001; Tukey-Kramer事后测试的方差分析）。免疫印迹的全尺寸图像如补充图15和16所示。
图5
图5
PER2控制肝膜部分FATP5的时间依赖性表达。(一,b条)全肝裂解物中FATP5蛋白的时间表达谱(一)和膜组分(b条)由野生型小鼠在12小时光/暗循环条件下制备。FATP5蛋白水平的平均峰值设置为100。每个值代表6至10只小鼠数据的平均值（s.e.m.）。肝膜部分的FATP5蛋白水平在24小时内有显著变化。(F类5,54 = 28.402;P（P） < 0.001; 方差分析）。(c（c）,d日)全肝裂解物中FATP5蛋白的时间表达谱(c（c）)和膜组分(d日)由野生型和每2个米/米小鼠在12小时光/暗循环（左）和恒定黑暗（右）条件下保持。野生型小鼠FATP5蛋白水平的平均峰值设置为100。每个值代表6只小鼠数据的平均值（s.e.m.）**P（P） < 0.01, *P（P） < 0.05，两组间差异显著(F类3,12 = 5.546;P（P） < 0.05; Tukey-Kramer事后测试的方差分析，右面板）。(e（电子）)野生型和非野生型肝脏中FATP5（绿色）和NHERF1（红色）的共同免疫荧光染色每2个米/米小鼠维持12小时的光/暗循环。黄色信号表示FATP5和NHERF1的共同定位。在ZT6和ZT18准备肝脏切片。细胞核也用4′6-二氨基-2-苯基吲哚（DAPI；蓝色）染色。比例尺指示10 微米。在每组中收集了三只以上小鼠的数据。(（f）)FATP5转运活动的时间概况。数据显示，野生型和野生型肝脏切片油酸摄取量曲线下面积的时间依赖性差异每2个米/米小鼠维持12小时的光/暗循环。油酸的摄取量评估为30 min.每个值代表6只小鼠数据的平均值（s.e.m.）**P（P） < 0.01，两组间差异显著(F类3,20 = 12.222;P（P） < 0.001; Tukey-Kramer事后测试的方差分析）。在面板a、b、c和d中，免疫印迹的全尺寸图像如补充图17和18所示。
图6
图6
示意图显示NHERF1调节肝质膜上FATP5的日表达。的表达式Slc9a3r1型/NHERF1受生物钟控制。p65/p50介导的Slc9a3r1型被PER2周期性抑制，从而在NHERF1蛋白的表达中产生昼夜振荡。NHERF1蛋白水平的暂时升高会在一天的特定时间内诱导肝细胞中FATP5的质膜定位，从而增强脂肪酸进入肝细胞的吸收。
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    1. Langmesser S、Tallone T、Bordon A、Rusconi S、Albrecht U。生物钟蛋白PER2和CRY与BMAL1和clock的相互作用。BMC分子生物学。2008;9:41. doi:10.186/1471-2199-9-41。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Bass J，Takahashi JS公司。新陈代谢和能量学的昼夜一体化。科学。2010年；330:1349–1354. doi:10.1126/science.1195027。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Asher G，Schibler U。哺乳动物昼夜节律和代谢周期成分之间的串话。单元格元数据。2011;13:125–137. doi:10.1016/j.cmet.2011.01.006。-内政部-公共医学
    1. Preitner N等人。孤儿核受体REV-ERAlpha控制哺乳动物昼夜节律振荡器阳性肢体内的昼夜节制转录。细胞。2002;110:251–260. doi:10.1016/S0092-8674（02）00825-5。-内政部-公共医学
    1. Guillaumond F，Dardente H，Giguere V，Cermakian N。REV-ERB和ROR核受体对Bmal1昼夜转录的差异控制。生物学杂志。节奏。2005;20:391–403. doi:10.1177/0748730405277232。-内政部-公共医学

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