A modified immunofluorescence in situ hybridization method to detect long non-coding RNAs and proteins in frozen spinal cord sections

doi:10.3892/etm.2018.6046

.2018年6月；15(6):4623-4628.

doi:10.3892/etm.2018.6046。 Epub 2018年4月10日。

一种改进的免疫荧光就地杂交法检测冰冻脊髓切片中长非编码RNA和蛋白质

冲猛（Chong Meng）^1 2 三, 赵欣（音译）^1 2 三, 杰劳^1 2 三

附属公司

¹复旦大学华山医院手外科，中国上海200040。
²中华人民共和国卫生部手部重建重点实验室，上海200032。
^三复旦大学周围神经与显微外科上海重点实验室，上海200032，中国。

PMID： 29805478
预防性维修识别码： PMC5958724
内政部： 10.3892年3月20日186.046

一种改进的免疫荧光就地杂交法检测冰冻脊髓切片中长非编码RNA和蛋白质

冲猛（Chong Meng）等。实验治疗学. 2018年6月.

.2018年6月；15(6):4623-4628.

doi:10.3892/etm.2018.6046。 Epub 2018年4月10日。

作者

冲猛（Chong Meng）^1 2 三, 赵欣（音译）^1 2 三, 杰劳^1 2 三

附属公司

¹复旦大学华山医院手外科，中国上海200040。
²中国卫生部手再造重点实验室，上海200032。
^三复旦大学周围神经与显微外科上海重点实验室，上海200032，中国。

PMID： 29805478
预防性维修识别码： PMC5958724
内政部： 10.3892/等2018.6046

摘要

免疫荧光就地杂交（immuno-FISH）被广泛用于共同检测RNA和蛋白质，以研究它们在细胞中的空间分布。本研究使用改良的免疫-FISH方案检测冷冻脊髓切片中的长非编码RNA（lncRNAs）和蛋白质。采集Sprague-Dawley大鼠的脊髓，冷冻并切片（10µm），制备寡核苷酸探针和抗体。在抗原提取、脱水、预杂交、杂交、后杂交和免疫荧光染色后，采集图像。通过高压灭菌或蛋白酶K处理进行抗原提取，并比较其对杂交信号的影响。相同的切片成功地进行了免疫荧光染色。获得了令人满意的lncRNA和蛋白质荧光信号。本研究结果表明，用于检测冷冻脊髓切片中lncRNAs和蛋白质的免疫-FISH改良方案是有效的，而且时间效率高，所需试剂也很容易获得。

关键词：抗原回收；荧光原位杂交；冻结段；免疫荧光；长的非编码RNA。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
带有四个探针（Malat1-a、-b和-c以及GAPDH）和一个阴性对照（仅缓冲液）的FISH。（A）Malat1-A、（B）Malat1-B和（C）Malart1-C探针的代表性图像。（D）GAPDH（阳性）和（E）阴性对照的代表性图像。（F）每组的平均IOD比率。比例尺，20µm；放大倍数，×100。数据表示为平均值±标准偏差*如图所示，P<0.05。FISH，荧光就地杂交；马拉特，转移相关肺腺癌转录本；IOD，集成光密度。

**图2。**
高压灭菌和PK处理用于抗原回收的比较。通过（A）高压灭菌和（B）PK处理进行抗原回收的代表性切片。（C）每组的平均IOD比率。比例尺，20µm；放大倍数，×400。数据表示为平均值±标准偏差。PK，蛋白酶K；IOD，集成光密度；AC，高压灭菌。

**图3。**
Malat1和蛋白质标记物的双重标记。Malat1与（A）NeuN、（B）GFAP和（C）Iba-1的共检测。只有NeuN阳性细胞被双重标记。比例尺，20µm，放大倍数，×100。马拉特，转移相关肺腺癌转录本；NeuN，神经元核；胶质纤维酸性蛋白；Iba-1，游离钙结合接合器分子1；DAPI，4′，6-二氨基-2-苯基吲哚。

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