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.2018年7月;18(1):349-357.
doi:10.3892/mmr.2018.8998。 Epub 2018年5月9日。

Annexin A1的过度表达可保护苯并[a]芘诱导的支气管上皮损伤

附属公司

Annexin A1的过度表达可保护苯并[a]芘诱导的支气管上皮损伤

崔燕飞等。 摩尔医学代表. 2018年7月.

摘要

哮喘的发病率在全球范围内不断增加。支气管上皮损伤在哮喘中很常见。Annexin A1(ANXA1)在支气管上皮损伤中的调节作用目前尚不清楚。本研究的目的是评估ANXA1在支气管上皮损伤中的作用。采用细胞计数试剂盒‑8和流式细胞仪分别检测细胞活力和凋亡水平。活性氧(ROS)含量和氧化指标活性由商业试剂盒评估。采用酶联免疫吸附试验检测活性caspase‑3的活性。采用逆转录定量聚合酶链反应和western blot分析测定靶因子的表达水平。结果表明,ANXA1提高了苯并[a]芘(Bap)处理的支气管上皮细胞的生存能力。Bap‑诱导的氧化应激通过减少ROS生成以及调节超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛和乳酸脱氢酶的活性来缓解。此外,ANXA1通过减少B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)的表达,增加Bcl-2相关X蛋白和细胞周期蛋白D1的表达,降低了细胞凋亡。此外,与Bap组相比,ANXA1挽救了磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)和粘着斑激酶(FAK)的表达,并抑制了磷脂酰肌醇3‑激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)的磷酸化。SF1670治疗逆转了ANXA1的抗凋亡作用。总之,研究结果强调了ANXA1对支气管上皮损伤的保护作用,这种损伤很可能通过PTEN/FAK/PI3K/Akt信号通路发生。因此,本研究有助于为哮喘患者提供潜在的治疗策略。

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数字

图1。
图1。
Bap对支气管上皮细胞的细胞毒性。用不同浓度的Bap(16、32、64和128µM)培养细胞。用细胞计数试剂盒-8培养6、12和24小时后检测细胞活力**与对照组相比P<0.01。苯并[a]芘。
图2。
图2。
ANXA1对BEC增殖的影响。(A) 采用逆转录定量聚合酶链反应检测ANXA1的mRNA表达。(B) 用(C)蛋白印迹法检测ANXA1的蛋白表达。(D) 采用细胞计数试剂盒-8分析ANXA1对BEC的影响。用64µM Bap处理细胞6 h,以建立细胞损伤模型*与对照组相比,P<0.05和**P<0.01;#P<0.05和##与E.V.+Bap组相比,P<0.01。ANXA1/Anx,Annexin A1;支气管上皮细胞;苯并[a]芘;E.V.,空向量。
图3。
图3。
ANXA1对氧化应激的影响。(A) 用2,7-二氯荧光素二乙酸酯染料测定活性氧含量。(B) ANXA1可调节SOD、GPX、MDA和LDH的活性。用64µM Bap处理细胞6 h,以建立细胞损伤模型*与对照组相比,P<0.05和**P<0.01;#P<0.05和##与E.V.+Bap组相比,P<0.01。ANXA1/Anx,Annexin A1;活性氧;超氧化物歧化酶;谷胱甘肽过氧化物酶;MDA、丙二醛;乳酸脱氢酶;苯并[a]芘;E.V.,空向量。
图4。
图4。
ANXA1对细胞凋亡的影响。(A) 采用流式细胞仪检测细胞凋亡水平。(B) 根据FCM数据计算细胞凋亡水平。用64µM Bap处理细胞6 h,以建立细胞损伤模型**与对照组相比P<0.01;#与E.V.+Bap组相比,P<0.05。ANXA1/Anx,Annexin A1;流式细胞术;苯并[a]芘;E.V.,空向量。
图5。
图5。
ANXA1对凋亡相关蛋白的影响。(A) 酶联免疫吸附试验检测活性半胱天冬酶-3的活性。(B) 采用逆转录定量聚合酶链反应检测细胞周期蛋白D1、Bax和Bcl-2的mRNA表达。(C) Western blotting检测细胞周期蛋白D1、Bax和Bcl-2的蛋白表达。用64µM Bap处理细胞6 h,以建立细胞损伤模型*与对照组相比,P<0.05和**P<0.01;##与E.V.+Bap组相比,P<0.01。ANXA1/Anx,Annexin A1;Bax,Bcl-2相关X蛋白;Bcl-2、B细胞淋巴瘤2;苯并[a]芘;E.V.,空向量。
图6。
图6。
ANXA1对PTEN、FAK和PI3K/Akt活性的影响。(A) Western blotting检测(B)PTEN和FAK蛋白水平。(C) Western blotting还用于测定(D)PI3K/Akt、p-PI3K和p-Akt的蛋白水平。用64µM Bap处理细胞6 h,以建立细胞损伤模型*与对照组相比,P<0.05和**P<0.01;#与E.V.+Bap组相比,P<0.05。ANXA1/Anx,Annexin A1;PTEN、磷酸酶和张力蛋白同源物;FAK,粘着斑激酶;磷脂酰肌醇3-激酶;蛋白激酶B;p-,磷酸化;苯并[a]芘;E.V.,空向量。
图7。
图7。
SF1670逆转ANXA1的作用。(A) 流式细胞术检测细胞凋亡水平。(B) Western blotting检测PTEN、FAK、PI3K/Akt、p-PI3K和p-Akt的表达。用64µM Bap处理细胞6 h,以建立细胞损伤模型*与对照组相比,P<0.05和**P<0.01;#P<0.05和##与E.V.+Bap组相比P<0.01^与ANXA1+BaP组相比,P<0.05,^^P<0.01。ANXA1/Anx,Annexin A1;PTEN、磷酸酶和张力蛋白同源物;FAK,粘着斑激酶;磷脂酰肌醇3-激酶;蛋白激酶B;p-,磷酸化;苯并[a]芘;E.V.,空向量。
图8。
图8。
本研究中应用的模型。红色箭头表示Bap的效果,绿色箭头表示ANXA1的效果。苯并[a]芘;OS,氧化应激;ANXA1,附件蛋白A1;PTEN、磷酸酶和张力蛋白同源物;FAK,粘着斑激酶;磷脂酰肌醇3-激酶;蛋白激酶B;p-,磷酸化;超氧化物歧化酶;谷胱甘肽过氧化物酶;MDA、丙二醛;乳酸脱氢酶;活性氧;Bcl-2、B细胞淋巴瘤2;Bax,Bcl-2相关X蛋白。

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