跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

该站点是安全的。
这个https：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2018年4月6日；9(8):1403-1413.
doi:10.7150/jca.23849。 2018年电子采集。

分泌性凝集素通过Gadd45a/PI3K/Akt信号通路介导肝细胞癌对奥沙利铂的耐药性

王欣（Xin Wang） 1, 邹芳 1 2, 钟景涛 三, 龙涛岳 1, 王福海 1, 红龙卫 1, 杨广胜 1, 陶金 1, 董晓峰 4, 李杰（音译） 1, 彭秀 1
附属公司

分泌性凝集素通过Gadd45a/PI3K/Akt信号通路介导肝细胞癌对奥沙利铂的耐药性

王欣（Xin Wang）等。 J癌症. .

摘要

目的：晚期肝细胞癌（HCC）患者通常采用系统治疗。然而，由于耐药性，在晚期肝癌患者的治疗中使用细胞毒性化疗通常表现出较低的反应率。分泌性聚集蛋白（sCLU）在侵袭性晚期肿瘤中表达，并与化疗抵抗相关，包括肝癌患者。本研究旨在探讨sCLU在肝癌中的生物学作用。方法：采用免疫组化染色检测肝癌组织和正常组织中sCLU的表达，并分析sCLU表达与临床指标的相关性。此外，还研究了sCLU在肝癌细胞增殖和凋亡中的作用及其内在机制。结果：肝癌组织中sCLU表达显著上调；与组织学分级和总体生存率差有关。sCLU水平在Bel7402、SMMC7721和耐药HCC细胞（Bel7404 OR）中显著升高。抑制sCLU活性可提高Bel7402和SMMC7721细胞的化疗敏感性。sCLU下调可增加肝癌细胞中Gadd45a的表达。sCLU的过度表达促进了Bel7402、SMMC7721和Bel7404-OR细胞的耐药性；然而，仅Gadd45a的过度表达就克服了上述细胞的耐药性。在PI3K/Akt信号通路的选择性抑制剂干扰后，肝癌细胞中sCLU和Gadd45a的表达没有明显变化。然而，调控Gadd45a的表达可能会影响Akt的磷酸化水平；并进一步调节参与线粒体凋亡途径的Bcl-2和Bax蛋白的表达。结论：结果表明，sCLU/Gadd45a/PI3K/Akt信号通路代表了一种新的途径，可以单向调节肝癌细胞的耐药性。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争利益：作者声明不存在竞争利益。

数字

图1
图1
sCLU表达升高，与肝癌预后不良相关。A.肝癌组织和邻近非肿瘤肝组织（50×和200×）中sCLU表达的免疫组织化学分析。（a，b）正常组织中sCLU的阴性表达；（c，d）sCLU在肝癌组织中的阴性表达；（e，f）sCLU在肝癌组织中的阳性表达。B.肝癌和正常组织中sCLU免疫染色的百分比。C.根据肝癌中sCLU表达状态的Kaplan-Meier曲线。D.肝癌TNM分期的Kaplan-Meier曲线。III+IV期患者的总生存时间短于I+II期患者。
图2
图2
sCLU和Gadd45a在肝癌细胞中的表达。对SMMC7721、Bel7402和Bel7404细胞的细胞裂解物（A）进行Western blot分析。对转染Sc或CLU-4 shRNA载体的亲代Bel7402、SMMC7721细胞（对照）或Bel7402SMMC7721cells进行Western blot分析（C和E）。对转染Sc或pIRES2-EGFP/sCLU载体的亲代Bel7404或Bel7404cells进行Western blot分析（G）。（B、D、F和H）分别测量（A、C、E和G）中各带的密度，并将其归一化为GAPDH的密度。Gadd45a表达与相应对照组的显著差异（P<0.05）用“*”表示，sCLU表达用“**”表示。
图2
图2
sCLU和Gadd45a在肝癌细胞中的表达。对SMMC7721、Bel7402和Bel7404细胞的细胞裂解物（A）进行Western blot分析。对转染Sc或CLU-4 shRNA载体的亲代Bel7402、SMMC7721细胞（对照）或Bel7402SMMC7721cells进行Western blot分析（C和E）。对转染Sc或pIRES2-EGFP/sCLU载体的亲代Bel7404或Bel7404cells进行Western blot分析（G）。（B、D、F和H）分别测量（A、C、E和G）中各带的密度，并将其归一化为GAPDH的密度。Gadd45a表达与相应对照组的显著差异（P<0.05）用“*”表示，sCLU表达用“**”表示。
图3
图3
sCLU和Gadd45a表达的调节增加了肝癌细胞对OXA的敏感性。（A） 对亲代SMMC7721和Bel7402细胞（对照），或转染Sc或pcDNA3.1-Gadd45a-His载体的细胞进行Western blot分析。（B） 测量（A）中每个带的密度，并将其归一化为GAPDH的密度。（C和D）将亲代Bel7402或SMMC7721细胞接种在96 well板中，并允许其生长过夜。第二天，用含有不同浓度奥沙利铂的相同培养基替换培养基。培养24小时和48小时后，使用CCK-8测定细胞活力。（E，F）父母Bel7402或SMMC7721细胞、转染CLU-4 shRNA载体的细胞或转染pcDNA3.1-Gadd45a-His载体的细胞在16nM OXA培养基中培养48 h，然后测定细胞活力。（G，H）将亲本Bel7402或SMMC7721细胞（对照）、用CLU-4或pcDNA3.1-Gadd45a-His载体转染的细胞在不存在或存在OXA（16nM）的情况下孵育48小时，然后测量细胞凋亡率（%）。与相应对照组相比，Gadd45a表达的显著差异（P<0.05）用“*”表示。OXA处理的亲代细胞显著减少（P<0.05）用“**”表示，显著差异（P<0.001）用“†”表示。
图3
图3
sCLU和Gadd45a表达的调节增加了肝癌细胞对OXA的敏感性。（A） 对亲代SMMC7721和Bel7402细胞（对照），或转染Sc或pcDNA3.1-Gadd45a-His载体的细胞进行Western blot分析。（B） 测量（A）中每个带的密度，并将其归一化为GAPDH的密度。（C和D）将亲代Bel7402或SMMC7721细胞接种在96 well板中，并允许其生长过夜。第二天，用含有不同浓度奥沙利铂的相同培养基替换培养基。培养24小时和48小时后，使用CCK-8测定细胞活力。（E，F）父母Bel7402或SMMC7721细胞、转染CLU-4 shRNA载体的细胞或转染pcDNA3.1-Gadd45a-His载体的细胞在16nM OXA培养基中培养48 h，然后测定细胞活力。（G，H）父母Bel7402或SMMC7721细胞（对照）、转染CLU-4或pcDNA3.1-Gadd45a-His载体的细胞在无或有OXA（16 nM）的条件下培养48 H，然后测量细胞凋亡率（%）。与相应对照组相比，Gadd45a表达的显著差异（P<0.05）用“*”表示。OXA处理的亲代细胞显著减少（P<0.05）用“**”表示，显著差异（P<0.001）用“†”表示。
图4
图4
Gadd45a的过度表达增加了Bel7404-OR细胞对OXA的化疗敏感性。（A） 对亲代Bel7404或Bel7404-or细胞，或转染pIRES2-EGFP/sCLU载体或pcDNA3.1-Gadd45a-His载体的细胞进行Western blot分析。（B） 测量（A）中每个带的密度，并将其归一化为GAPDH的密度。（C，D）将亲本Bel7404、Bel7404 OR细胞或用pIRES2 EGFP/sCLU载体或pcDNA3.1-Gadd45a-His载体转染的细胞接种在96孔板中，并使其生长过夜。第二天，用含有不同浓度OXA的相同培养基替换培养基。培养48小时后，使用CCK-8测定细胞活力。（D） 上述细胞在含有16nM OXA的培养基中培养48小时，然后测量细胞活力。OXA处理的Bel7404或Bel7404-or细胞显著减少（P<0.05）用“*”表示，Gadd45a过度表达细胞显著减少用“**”表示，而Bel7440-or细胞中Gadd45a-过度表达的显著差异用“†”表示。
图5
图5
sCLU通过调节Gadd45a的表达来调节PI3K/AKT信号通路。（A，C）Bel7402、SMMC7721、Bel7404和Bel7404-OR细胞在含有Akt抑制剂（LY294002）的培养基中培养2h，然后在自然培养基中进行培养。用抗sCLU、抗Gadd45a、抗磷酸化Akt和抗Akt抗体进行蛋白质印迹分析以检测蛋白质表达。（E） 在培养基中培养Bel7402、SMMC7721和Bel7404-OR细胞，或转染pcDNA3.1-Gadd45a-His载体的细胞。Western blot分析检测其表达。（B，D，F）测量（A，C和E）中每个带的密度，并将其归一化为GAPDH的密度。与相应对照组相比，P-Akt活化的显著差异（P<0.05）用“*”表示，Bcl-2/Bax比率用“†”表示。
图5
图5
sCLU通过调节Gadd45a的表达来调节PI3K/AKT信号通路。（A，C）Bel7402、SMMC7721、Bel7404和Bel7404-OR细胞在含有Akt抑制剂（LY294002）的培养基中培养2h，然后在自然培养基中进行培养。用抗sCLU、抗Gadd45a、抗磷酸化Akt和抗Akt抗体进行蛋白质印迹分析以检测蛋白质表达。（E） 在培养基中培养Bel7402、SMMC7721和Bel7404-OR细胞，或转染pcDNA3.1-Gadd45a-His载体的细胞。Western blot分析检测其表达。（B，D，F）测量（A，C和E）中每个带的密度，并将其归一化为GAPDH的密度。与相应对照组相比，P-Akt活化的显著差异（P<0.05）用“*”表示，Bcl-2/Bax比率用“†”表示。
图6
图6
sCLU在肿瘤进展中的调控机制。sCLU启动子被治疗应激或细胞应激激活，然后，sCLU被Scr-MEK-ERK信号通路激活上调。sCLU下调抑制Gadd45a的表达，并进一步降低p-AKT水平。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

参考文献

    1. 陈伟，郑瑞，曾赫，张S。中国主要癌症的发病率和死亡率，2012年。中国癌症杂志。2016;35:73.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Torre LA、Bray F、Siegel RL、Ferlay J、Lortet Tiekunt J、Jemal A.全球癌症统计，2012年。CA：临床医生癌症杂志。2015;第65:87–108页。-公共医学
    1. Wilhelm S、Carter C、Lynch M、Lowinger T、Dumas J、Smith RA。索拉非尼：一种治疗癌症的多激酶抑制剂的发现和开发。《自然》杂志回顾药物发现。2006;5:835–44.-公共医学
    1. 谢波，王德华，Spechler SJ。索拉非尼治疗肝癌的系统评价。消化疾病与科学。2012;57:1122–9.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Xiu P，Dong XF，Li XP，Li J.Clusterin：肝细胞癌研究进展回顾与展望。世界胃肠病学杂志。2015;21:8262–70.-项目管理咨询公司-公共医学