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.2018;51（6）：e7061。
doi:10.1590/1414-431x20177061。 Epub 2018年4月19日。

穿心莲内酯通过促进自噬和S100B表达保护小鼠星形胶质细胞免受缺氧损伤

杜鹃（Juan Du） 1, 张春燕 1, 雪青娜 2, 李爱之 1, 张庆峰 1, 李克忠 1, 丁永波 1
附属公司

穿心莲内酯通过促进自噬和S100B表达保护小鼠星形胶质细胞免受缺氧损伤

杜鹃（Juan Du）等。 Braz医学生物研究杂志. 2018.

摘要

穿心莲内酯（ANDRO）具有免疫调节、抗炎和神经保护作用。由于脑缺氧是创伤性脑损伤后继发性脑损伤最常见的因素，我们利用缺氧损伤的星形胶质细胞研究了ANDRO在这一过程中的作用和可能的机制。将小鼠皮层星形胶质细胞C8-D1A（C57/BL6株星形胶质细胞Ⅰ型克隆）分别置于3%和21%的氧气中不同时间（0-12 h），建立体外星形胶质细胞缺氧损伤模型。缺氧和ANDRO给药后，用CCK-8和流式细胞仪检测细胞活力和凋亡的变化。western blot检测凋亡相关蛋白、自噬相关蛋白、JNK通路主要因子、ATG5和S100B的表达变化。缺氧显著损伤C8-D1A细胞，表现为细胞活力降低和凋亡诱导。缺氧还诱导S100B的自噬和过度生成。ANDRO减少细胞凋亡，促进细胞自噬和S100B表达。ANDRO给药后，自噬相关蛋白、S-100B、JNK途径蛋白和ATG5均上调，而当JNK途径被抑制或ATG5被敲除时，自噬者相关蛋白和s100b下调。ANDRO通过减少细胞凋亡、促进自噬和s100b表达，赋予缺氧损伤的星形胶质细胞生存优势。此外，ANDRO通过激活jnk通路和调节ATG5促进自噬和s100b表达。

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数字

图1。
图1。。A类，在不同时间测定对照组和缺氧组的细胞活力。B类测定缺氧后不同时间星形胶质细胞的凋亡率。C类western blot分析凋亡相关因子的蛋白免疫印迹。天，通过定量带强度测定凋亡相关因子的相对表达。E类自噬相关因子的蛋白质免疫印迹。F类，通过定量谱带强度获得自噬相关因子的相对表达。β-actin起到了内部控制的作用。数据报告为平均值±标准偏差*与0小时相比，P<0.05，**P<0.01，***P<0.001（方差分析）。
图2。
图2。。A类qRT-PCR检测缺氧星形胶质细胞不同时间S100B mRNA的表达。B类和C类Western blot检测不同时间缺氧星形胶质细胞S100B蛋白的表达。β-actin起到了内部控制的作用。数据报告为平均值±标准偏差*与0小时相比，P<0.05，**P<0.01（方差分析）。
图3。
图3。。A类，在有或没有穿心莲内酯（ANDRO）治疗的缺氧星形胶质细胞中测量细胞凋亡率。B类和C类Western blot检测缺氧星形胶质细胞在ANDRO治疗前后凋亡相关蛋白的表达水平。天和E类western blot检测自噬调节因子的蛋白表达。β-actin起到了内部控制的作用。数据报告为平均值±标准偏差*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001（方差分析）。
图4。
图4。。A类采用qRT-PCR方法检测穿心莲内酯（ANDRO）处理前后缺氧星形胶质细胞中S100B的mRNA表达。B类和C类Western blot检测缺氧星形胶质细胞中S100B的蛋白表达，并与ANDRO进行比较。β-actin起到了内部控制的作用。数据报告为平均值±标准偏差*P<0.05，**P<0.01（方差分析）。
图5。
图5。。A类、S100B蛋白免疫印迹和与JNK通路和自噬相关的蛋白，通过western blot在有或无穿心莲内酯（ANDRO）和SP600125治疗的缺氧星形胶质细胞中测量。B类，通过定量带强度研究JNK通路和自噬相关因子的相对表达。β-actin起到了内部控制的作用。数据报告为平均值±标准偏差*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001（方差分析）。
图6。
图6。。A类、ATG5、S100B蛋白免疫印迹和自噬相关蛋白，通过western blot在有或无si-ATG5转染和穿心莲内酯（ANDRO）治疗的缺氧星形胶质细胞中测量。B类，通过定量带强度测定ATG5、S100B和自噬相关蛋白的相对表达。β-actin起到了内部控制的作用。si-NC：非靶向siRNA。数据以平均值±标准差报告*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001（方差分析）。
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