跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2018年4月6日9:331。
doi:10.3389/fphar.2018.00331。 2018年eCollection。

合成糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链肽抑制视网膜Müller细胞胶质增生

顾瑞平 1, 欣怡鼎 1, 文一堂 1, 博亚·雷 1, 陈江 1, 徐格志 1 2 三
附属公司

合成糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链肽抑制视网膜Müller细胞胶质增生

顾瑞平等人。 前沿药理学. .

摘要

目的：蛋白糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链（GILZ）具有抗炎活性体内和在体外在这里，我们检测了来源于GILZ亮氨酸拉链基序和富含脯氨酸区域的合成肽对抑制原代培养大鼠米勒细胞炎症反应的潜在作用。方法：肽选自GILZ蛋白（GILZ-p）的氨基酸98-134。固相肽合成用于产生细胞穿透肽TAT，该肽与GILZ-p的氨基末端结合。用脂多糖（LPS）单独或与不同浓度的GILZ-p联合刺激原代培养的视网膜Müller细胞，并观察GILZ-p与核因子（NF）的相互作用-用免疫印迹、免疫沉淀和免疫荧光法研究Müller细胞中的κB p65。Western Blotting法检测Müller细胞胶质增生标志物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、功能蛋白水通道蛋白（AQP）-4、炎症细胞因子白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）α、细胞间黏附分子（ICAM）-1和单核细胞趋化蛋白（MCP）-1的表达。采用酶联免疫吸附试验测定培养液中这些细胞因子的浓度。结果：合成的水溶性GILZ-p进入细胞并与NF-κB p65结合，抑制p65核转位。GILZ-p抑制LPS诱导的Müller细胞GFAP、IL-1β、TNFα、ICAM-1和MCP-1的表达，并阻止LPS诱导AQP4的下调。结论：这些结果表明GILZ-p与NF-κB p65相互作用，抑制p65核转位，从而抑制炎症细胞因子释放和Müller细胞胶质增生。

关键词：脂多糖；米勒细胞；NF-κB p65；胶质增生；合成糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链肽。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
异硫氰酸荧光素（FITC）标记的GILZ蛋白（GILZ-p）（10μM）分别刺激Müller细胞6小时和12小时。免疫荧光法检测GILZ-p在Müller细胞中的聚集性。绿色表示FITC标记的GILZ-p，蓝色表示4′6-二氨基-2-苯基吲哚（DAPI）染色的细胞核。比例尺：50μm。
图2
图2
用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）测定GILZ-p的细胞毒性。用不同浓度的GILZ-p处理24 h后，用CCK-8法测定Müller细胞的活性。与对照组相比，10、50、100和150μM GILZ-P均无明显毒性。曼·惠特尼U型-试验用于两组的比较。n个=每组6人。∗P（P）<0.05时，∗∗P（P）< 0.01.
图3
图3
GILZ蛋白抑制LPS诱导的视网膜Müller细胞NF-κB p65核移位。对磷酸盐缓冲液（PBS）+对照肽（control-p）、PBS+GILZ-p、脂多糖（LPS）+control-p和LPS+GIL Z-p组进行细胞溶质p65表达的western blot分析（A、B）和核p65表达（C、D）刺激后1h。β-肌动蛋白作为胞质p65的负载对照；拉明B被用作核p65的负荷控制。通过密度分析确定的定量分析结果表示为相对于负载控制。数据表示平均值±SE；曼·惠特尼U型-将两组进行比较时使用测试。n个=每组3人。∗P（P）<0.05时，∗∗P（P）< 0.01.
图4
图4
合成的GILZ-p与NF-κB p65相互作用。免疫沉淀和western blot分析显示NF-κB p65与His-tag-GILZ-p在视网膜Müller细胞中共同免疫沉淀。IgG-Co-IP作为阴性对照，输入作为阳性对照。
图5
图5
合成的GILZ-p抑制LPS诱导的Müller细胞NF-κB p65磷酸化。刺激后1 h，对PBS+Control-p、PBS+GILZ-p、LPS+Contral-p和LPS+GIL Z-p组的磷酸化p65（Ser536）进行Western blot分析。LPS:1000 ng/ml，GILZ-p:10μM；对照p:10μM。β-actin作为负荷对照。通过密度分析确定的定量分析结果表示为相对于β-肌动蛋白。数据表示平均值±SE；曼·惠特尼U型-测试用于两组之间的比较。n个=每组3人。∗P（P）<0.05时，∗∗P（P）< 0.01.
图6
图6
合成的GILZ-p抑制LPS诱导的Müller细胞胶质增生。Western blot分析测定胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的蛋白表达水平（A、B）和AQP4（C、D）用1000 ng/ml LPS和不同浓度GILZ-p（0.01、0.1、1和10μM）联合处理Müller细胞24 h，以β-肌动蛋白作为负荷对照。通过密度分析确定的定量分析结果表示为相对于β-肌动蛋白。数据表示平均值±SE；曼·惠特尼U型-测试用于两组之间的比较。n个=每组3个。∗P（P）<0.05时，∗∗P（P）< 0.01.
图7
图7
合成的GILZ-p抑制LPS诱导的Müller细胞炎症细胞因子的表达。Western blot分析测定前IL-1β的蛋白表达水平（A、B），MCP-1（C，D），肿瘤坏死因子-α（E、F）和ICAM-1（G、H）用1000 ng/ml LPS和不同浓度GILZ-p（0.01、0.1、1和10μM）联合处理Müller细胞24 h，以β-肌动蛋白作为负荷对照。通过密度分析确定的定量分析结果表示为相对于β-肌动蛋白。数据表示平均值±SE；曼-惠特尼U型-测试用于两组之间的比较。n个=每组3人。∗P（P）<0.05时，∗∗P（P）< 0.01. 肿瘤坏死因子α；细胞间粘附分子-1；MCP-1，单核细胞趋化蛋白-1。
图8
图8
合成的GILZ-p降低了Müller细胞培养液中LPS诱导的炎症细胞因子分泌。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定1000 ng/ml LPS联合不同浓度GILZ-p（0.01、0.1、1和10μM）处理24 h后Müller细胞中IL-1β、MCP-1、TNF-α和ICAM-1的蛋白表达水平。数据表示平均值±SE；曼·惠特尼U型-测试用于两组之间的比较。n个=每组6人。∗P（P）<0.05时，∗∗P（P）< 0.01.
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Ayroldi E.、Migliorati G.、Bruscoli S.、Marchetti C.、Zollo O.、Cannarile L.等人（2001年）。糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链因子通过抑制核因子kappaB调节T细胞活化。血液98 743–753。10.1182/血液。V98.3.743版-内政部-公共医学
    1. Ayroldi E.，Riccardi C.（2009年）。糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链（GILZ）：糖皮质激素作用的一种新的重要介质。FASEB期刊23 3649–3658。1096年10月10日/fj.09-134684-内政部-公共医学
    1. Bechara C.、Sagan S.（2013年）。细胞穿透肽：20年后，我们站在哪里？FEBS公司。莱特。587 1693–1702. 2016年10月10日/j.febslet.2013.04.031-内政部-公共医学
    1. Bringmann A.、Iandiev I.、Pannicke T.、Wurm A.、Hollborn M.、Wiedemann P.等人（2009年）。Muller细胞胶质增生症的细胞信号和相关因素：神经保护和有害影响。掠夺。视网膜。眼科研究28 423–451。10.1016/j.混凝土工.2009.07.001-内政部-公共医学
    1. Bringmann A.、Pannicke T.、Grosche J.、Francke M.、Wiedemann P.、Skatchkov S.N.等人（2006年）。健康和患病视网膜中的Muller细胞。掠夺。视网膜。眼科研究25 397–424。10.1016/j.混凝土层.2006.05.003-内政部-公共医学