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.2018年4月4日4:11:1833-1847。
doi:10.2147/OTT。第155716条。 2018年eCollection。

d-柠檬烯通过诱导肺癌自噬和凋亡而发挥抗肿瘤活性

小雨 # 1, 林红燕 # 1, Yu Wang（王宇） 1, 吕文文 1, 张硕 1, 应倩 1, 邓小平小贝 1, 南南丰 1, 赫伯特·余 2, 钱碧云 1
附属公司

d-柠檬烯通过诱导肺癌自噬和凋亡而发挥抗肿瘤活性

小雨等。 Onco目标Ther. .

摘要

目的：d-柠檬烯是一种应用广泛的植物提取物，最近有报道称其对癌细胞具有抗增殖和促凋亡作用。然而，d-柠檬烯实现这些作用的机制，尤其是在肺癌中，尚不完全清楚。因此，本研究的目的是检测d-柠檬烯对肺癌的作用并探讨其作用机制。

方法：我们通过描述d-柠檬烯对细胞凋亡和自噬途径的影响，来研究其对肺癌细胞和异种移植动物模型的治疗作用。使用细胞计数试剂盒-8测量细胞增殖，并通过流式细胞术分析确定细胞凋亡。通过激光扫描共聚焦显微镜分析自噬标记物LC3点的水平。通过实时定量聚合酶链反应和Western blot检测自噬和凋亡相关基因的表达。

结果：d-柠檬烯抑制肺癌细胞的生长，抑制裸鼠移植瘤的生长。d-柠檬烯治疗后肿瘤中凋亡和自噬相关基因的表达增加。此外，氯喹（一种自噬抑制剂）的使用和第5天基因，抑制d-柠檬烯诱导的细胞凋亡。

结论：d-柠檬烯可能对肺癌有治疗作用，因为它可以通过促进自噬诱导肺癌细胞凋亡。

关键词：细胞凋亡；自噬；d-柠檬烯；肺癌。

PubMed免责声明

利益冲突声明

披露作者报告在这项工作中没有利益冲突。

数字

图1
图1
d日-柠檬烯（DL）抑制肺癌细胞的增殖。笔记：肺癌细胞系A549和H1299用0.5和0.75mM DL处理24、48和72小时。使用细胞计数试剂盒-8检测细胞活力(A类). 500个细胞用d日-柠檬烯10天；用结晶紫对所得细胞集落进行染色，并比较三组集落的定量数据(B类). 数据来自三个独立的实验。每个时间点的数据通过单向方差分析和最小显著性差异法进行分析。数据表示为平均值±标准误差***P（P）< 0.001.
图2
图2
d日-柠檬烯在异种移植动物模型中抑制肿瘤生长。笔记： d日-柠檬烯（0、400或600mg/kg）给异种裸鼠注射4周。每4天测量一次肿瘤大小(A类). 切除肿瘤的照片(B类). 重量(C类)，抑制(天)苏木精和伊红染色(E类)肿瘤的数量。数据分析采用单向方差分析，其次采用最小显著性差异法。数据表示为平均值±标准误差*P（P）< 0.05, **P（P）<0.01，以及***P（P）< 0.001.
图3
图3
d日-柠檬烯（DL）促进肺癌细胞凋亡。笔记：DL（0.5和0.75 mM）用于处理A549和H1299细胞24小时。凋亡细胞用碘化丙啶（PI）和Annexin V染色，并用流式细胞仪检测（左）；分析了三组间凋亡细胞数量的差异（右）(A类). 用0.5和0.75 mM的DL处理细胞24小时，用罗丹明123染色，并用流式细胞仪进行分析。跨膜电位的降低表现为荧光峰向低水平的移动（左），低荧光类别的细胞百分比绘制在图表中（右）(B类). qRT-PCR检测凋亡相关基因和蛋白(C类)和Western blotting(天)用0.5 mM处理的细胞d日-柠檬烯。应用qRT-PCR分析异种移植瘤中的凋亡相关基因和蛋白(E类)和蛋白质印迹(F类)分别是。用免疫组织化学方法检测异种移植瘤中PARP的裂解，并在200倍放大镜下观察(G公司). 细胞实验数据来自三个独立的实验。数据采用单因素方差分析和最小显著性差异法进行分析。所有数据均表示为平均值±标准误差*P（P）< 0.05, **P（P）<0.01，以及***P（P）< 0.001.缩写：Con，控制。
图3
图3
d日-柠檬烯（DL）促进肺癌细胞凋亡。笔记：DL（0.5和0.75 mM）用于处理A549和H1299细胞24小时。凋亡细胞用碘化丙啶（PI）和Annexin V染色，并用流式细胞仪检测（左）；分析了三组之间凋亡细胞数量的差异（右）(A类). 用0.5和0.75 mM的DL处理细胞24小时，用罗丹明123染色，并用流式细胞仪进行分析。跨膜电位的降低表现为荧光峰向低水平的移动（左），低荧光类别的细胞百分比绘制在图表中（右）(B类). qRT-PCR检测凋亡相关基因和蛋白(C类)和Western blotting(天)用0.5 mM处理的细胞d日-柠檬烯。应用qRT-PCR分析异种移植瘤中的凋亡相关基因和蛋白(E类)和蛋白质印迹(F类)分别是。用免疫组织化学方法检测异种移植瘤中PARP的裂解，并在200倍放大镜下观察(G公司). 细胞实验数据来自三个独立的实验。数据采用单因素方差分析和最小显著性差异法进行分析。所有数据均表示为平均值±标准误差*P（P）< 0.05, **P（P）<0.01，以及***P（P）< 0.001.缩写：Con，控制。
图4
图4
d日-柠檬烯（DL）促进肺癌自噬。笔记：mRFP-GFP-LC3质粒转染的细胞用d日-柠檬烯，使用荧光共焦显微镜获得图像（左）；在三个研究组中对LC3点进行计数和比较（右）(A类). 用qRT-PCR分析自噬相关基因和蛋白质(B类)和Western blotting(C类)用0.5 mM处理的细胞d日-柠檬烯。用qRT-PCR分析异种移植瘤中的自噬相关基因和蛋白(天)和Western blotting(E类). 细胞实验数据来自三个独立的实验。使用学生的t吨-测试。所有数据均表示为平均值±标准误差*P（P）<0.05和**P（P）< 0.01.
图4
图4
d日-柠檬烯（DL）促进肺癌自噬。笔记：mRFP-GFP-LC3质粒转染的细胞用d日-柠檬烯，使用荧光共焦显微镜获得图像（左）；在三个研究组中对LC3点进行计数和比较（右）(A类). 用qRT-PCR分析自噬相关基因和蛋白质(B类)和蛋白质印迹(C类)用0.5 mM处理的细胞d日-柠檬烯。用qRT-PCR分析异种移植瘤中的自噬相关基因和蛋白(天)和Western blotting(E类). 细胞实验数据来自三个独立的实验。使用学生的t吨-测试。所有数据均表示为平均值±标准误差*P（P）<0.05和**P（P）< 0.01.
图5
图5
d日-柠檬烯（DL）诱导的细胞凋亡被氯喹（CQ）抑制。笔记：用0.5 mM处理细胞d日-柠檬烯或20μM氯喹24小时。通过细胞计数试剂盒-8测定细胞活力(A类). 用碘化丙啶（PI）和Annexin V染色检测细胞凋亡，然后用流式细胞仪（左）检测凋亡细胞数量，并分析四组之间的差异（右）(B类). 用蛋白质印迹法分析细胞凋亡和自噬相关蛋白(C类). 数据来自三个独立的实验。采用单因素方差分析和最小显著性差异法对数据进行分析。数据表示为平均值±标准误差*P（P）< 0.05, **P（P）<0.01，以及***P（P）< 0.001.
图6
图6
d日-柠檬烯（DL）诱导的细胞凋亡被si-atg5抑制。笔记：用0.5 mM处理细胞d日-柠檬烯转染si-atg5 24小时后。使用细胞计数试剂盒-8测定细胞活力(A类). 使用碘化丙啶（PI）和Annexin V染色测定细胞凋亡，然后使用流式细胞术(B类). 用Western blotting分析凋亡和自噬相关蛋白(C类). 数据来自三个独立的实验。采用单因素方差分析和最小显著性差异法对数据进行分析。数据表示为平均值±标准误差*P（P）< 0.05, **P（P）<0.01，以及***P（P）< 0.001.
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