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.2018年3月21日：9:567。
doi:10.3389/fimmu.2018.00567。 2018年eCollection。

AIRE在免疫中的作用白色念珠菌在人类巨噬细胞模型中

何塞·安东尼奥·塔瓦雷斯（Jose Antonio Tavares de Albuquerque） 1, Pinaki Prosad Banerjee公司 2 三, 安吉拉·卡斯托尔迪 1, 罗伊斯·马 2 三, 努里亚·本格拉·祖罗 1, Leandro Hideki Ynoue公司 1, 克里斯蒂娜·阿斯拉尼安 1, 玛丽娜·乌乔亚·沃尔·巴博萨·卡瓦略 1, 乔亚·艾米莉·德·梅内泽斯·科雷亚·德乌尔 4, 费尔南达·吉马朗斯·韦勒 4, Magnus Regios Dias-da-Silva公司 4, 玛丽斯·拉扎雷蒂-卡斯特罗 4, 路易斯·阿尔贝托·佩德罗扎 5, 尼尔斯·奥尔森·萨拉瓦·卡马拉 1, 艾米丽·梅斯 2 三, Jordan Scott橙色 2 三, 安东尼奥·康迪诺·内托 1 6
附属公司

AIRE在免疫中的作用白色念珠菌在人类巨噬细胞模型中

何塞·安东尼奥·塔瓦雷斯（Jose Antonio Tavares de Albuquerque）等。 前部免疫. .

摘要

自身免疫多内分泌病-念珠菌病-表皮营养不良症（APECED）是一种由自身免疫调节基因突变引起的原发性免疫缺陷(AIRE公司). AIRE突变患者易受白色念珠菌感染并伴有自身免疫性疾病。我们之前证明，细胞质AIRE调节Syk依赖的Dectin-1通路。在这项研究中，我们进一步评估了与真菌元素的直接接触、突触形成以及巨噬细胞样THP-1细胞对白色念珠菌确定AIRE对Dectin受体功能和信号传导的作用。我们检测了分化为巨噬细胞的野生型和AIRE敲除THP-1细胞以及APECED患者单核细胞源性巨噬细胞中真菌突触（FS）的形成。我们评估了菌丝刺激后Dectin-2受体信号传导、吞噬作用和细胞因子分泌。在巨噬细胞样THP-1细胞的菌丝刺激下，AIRE与Dectin-2和Syk在FS共同定位。AIRE敲低的巨噬细胞样THP-1细胞表现出较少的Dectin-1和Dectin-2受体积累，FS处的信号通路活性降低白色念珠菌吞噬作用，溶酶体形成较少。此外，与对照细胞相比，AIRE敲低巨噬细胞样THP-1细胞和AIRE缺乏患者巨噬细胞分泌的IL-1β、IL-6或TNF-α减少。我们的结果表明，AIRE调节FS形成和菌丝识别，并有助于协调针对白色念珠菌.

关键词：AIRE公司；APECED；白色念珠菌；Dectin受体；菌丝；巨噬细胞；受体招募。

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数字

图1
图1
真菌突触（FS）中Dectin-1和Dectin-2募集的动力学。（A）刺激巨噬细胞样THP-1细胞的典型共焦显微照片白色念珠菌菌丝10、20或30 min观察Dectin-1（绿色）和Dectin-2（红色）受体向FS的募集。（B–I）每个点表示用于所示测量的单元格。水平条表示平均值* 第页 < 0.05，由t吨-测试。（B、C）Dectin-1金额（B）和Dectin-2（C）在细胞表面。（D、E）总Dectin-1的相对百分比（D）和Dectin-2（E）与整个细胞的FS相比。（F，G）Dectin-1金额（F）和Dectin-2（G）在FS。（H，I）Dectin-1与Dectin-2的突触共定位（H）或Dectin-2与Dectin-1（一）.在3个独立实验中计数的30个细胞的典型共焦显微照片。比例尺 = 5 微米。
图2
图2
真菌突触（FS）的Dectin信号。（A）未刺激巨噬细胞样THP-1细胞的典型共焦显微照片（0 min）或刺激C、。 白色念珠菌菌丝10、20或30 min观察Dectin-2（绿色）、Syk（蓝色）和自身免疫调节器（AIRE）（红色）向FS的招募。（B–G）每个点代表一个用于所示测量的单元格。每列中的水平条表示平均值*第页 < 0.05，由t吨-测试。（B、C）AIRE金额（B）和Syk（C）在细胞表面。（D、E）AIRE金额（D）和Syk（E）FS（共轭-非共轭）。（F，G）AIRE与Syk的Synaptic联合定位（F）或Syk与AIRE（G）.（H）未经刺激（unt）或菌丝刺激10、20或30天的巨噬细胞样THP-1细胞细胞质和核组分中AIRE的Western blotting分析 min.（L）Ladder、GAPDH和Lamin B1用作负荷控制。（一）巨噬细胞样THP-1细胞的裂解物，未裂解或用菌丝刺激30 用AIRE（左图）或Dectin-2抗体（右图）和对照抗体（IgG）进行免疫沉淀。如图所示，对免疫沉淀产物进行AIRE、Dectin-2和Syk检测。在3个独立实验中计数的30个细胞的典型共焦显微照片。比例尺 = 5 微米。
图3
图3
AIRE介导Dectin受体向真菌突触（FS）的募集。（A）受刺激的野生型和AIRE敲低巨噬细胞样THP-1细胞的典型共焦显微照片白色念珠菌菌丝20或30 min观察Dectin-1（蓝色）和Dectin-2（红色）受体向FS的募集。（B–E）每个点代表一个用于所示测量的单元格。水平条表示平均值*第页 < 0.05，由t吨-测试。（B、C）占总Dectin-1的百分比（B）和Dectin-2（C）与整个细胞的FS相比。（D、E）Dectin-1金额（D）和Dectin-2（E）FS（结合未结合细胞）。（F，G）Dectin-1与Dectin-2的突触共定位（F）或Dectin-2与Dectin-1（G）.在3个独立实验中计数的30个细胞的典型共焦显微照片。比例尺 = 5 微米。
图4
图4
自身免疫调节器（AIRE）对真菌突触（FS）形成的影响。（A）受刺激的野生型和AIRE敲低巨噬细胞样THP-1细胞的典型共焦显微照片白色念珠菌菌丝20或30 min观察FS招募Dectin-2（红色）、Syk（绿色）和CARD9（蓝色）。（B–E）每个点代表一个用于所示测量的单元格。水平条表示平均值*第页 < 0.05，由t吨-测试。（B、D、F）占总Dectin-2的百分比（B），赛克（D）和（F）FS的CARD9与整个细胞的CARD9。（C、E、G）Dectin-2金额（C），西克（E），和CARD9（G）在FS（结合-非结合细胞）。在3个独立实验中计数的30个细胞的典型共焦显微照片。比例尺 = 5 微米。
图5
图5
野生型和AIRE敲低巨噬细胞样THP-1细胞中的念珠菌杀伤活性。用酵母刺激野生型和AIRE敲低的巨噬细胞样THP-1细胞[感染多重性（MOI 1:2）]（B）或菌丝（MOI 2:1）GFP白色念珠菌 （C）对于20或30 最小值。（A）巨噬细胞吞噬真菌的图像流分析。选择GFP荧光强度进行进一步分析。根据GFP最大像素数将细胞分为亚群。对与酵母或菌丝在4°C下培养的细胞进行内化门。每个点代表一个用于所示测量的独立实验。野生型（蓝色圆圈）和AIRE击倒巨噬细胞样THP-1细胞（红色方形）。（D、E）酵母（MOI 1:2）刺激的野生型和AIRE敲低的巨噬细胞样THP-1细胞中细胞质酸化的测量（D）或菌丝（MOI 2:1）（E）对于20或30 min通过图像流分析。显示了五个独立实验的代表性图像。（F）休眠细胞和过度刺激细胞上清液中IL-1β和TNF-α的分泌。用菌丝（MOI 2:1）刺激野生型（黑条）和AIRE敲除（灰条）巨噬细胞样THP-1细胞6 h.水平条表示平均值。三个独立实验的代表图*第页 < 0.05，由t吨-测试。
图6
图6
菌丝刺激后健康供体和自身免疫性多内分泌病-念珠菌病-表皮营养不良（APECED）患者巨噬细胞中Dectin-2的募集。（A）健康供体和AIRE缺乏患者巨噬细胞的典型共焦显微照片白色念珠菌菌丝30 min观察Dectin-2（红色）受体向真菌突触（FS）的募集。蓝色箭头表示FS。健康献血者和APECED患者的4个独立实验的代表性图像，每个样本采集10张图片。比例尺 = 5 微米。
图7
图7
自身免疫性多endoclindopathy念珠菌感染-外胚层营养不良（APCED）患者巨噬细胞中的真菌反应。（A）的代表性图像白色念珠菌30岁后健康供体和AIRE缺陷患者巨噬细胞的吞噬作用 用酵母或菌丝刺激min。箭头表示巨噬细胞吞噬真菌。右边的图像显示了巨噬细胞内酵母和菌丝的数量。（B）健康供体或AIRE缺乏患者巨噬细胞在未经菌丝刺激或刺激的细胞中分泌IL-6和TNF-α24 小时。（A、B）水平条表示平均值*第页 < 0.05，由t吨-测试。健康献血者和APECED患者的四个独立实验的代表性图像。
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