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.2018 JUL;42(1):115~122。
DOI:1038 92/IJM.20183598。 EPUB 2018 3月29日。

雷公藤多甙对Upregulating Autophagy嘌呤霉素氨基核苷诱导足细胞损伤的保护作用

附属
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雷公藤多甙对Upregulating Autophagy嘌呤霉素氨基核苷诱导足细胞损伤的保护作用

龚建功等。 国际医学杂志. .
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摘要

雷公藤多甙(TG)是雷公藤多甙的有效成分,具有免疫抑制和抗炎作用。以前的研究表明,TG是一种潜在有效的治疗选择治疗肾病综合征。TG的治疗作用机制,包括它对足细胞损伤的自噬和凋亡的影响,还有待充分阐明。本研究旨在探讨TG对足细胞激活自噬和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)通路的保护作用。采用流式细胞术、Western blot分析、细胞计数试剂盒8检测和透射电镜分析,研究TG对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)诱导足细胞损伤的影响。氯喹(CQ),自噬抑制剂,被用来评估自噬在TG保护作用中的重要性。此外,LY2242,III类PI3K抑制剂,被用来识别哪些信号转导途径TG参与。PAN对足细胞有明显的凋亡作用,TG可显著拮抗足细胞凋亡。TG处理后微管相关蛋白1A/1b轻链3的表达和自噬体的出现显著增加,而p62和裂解的caspase-3表达水平明显降低。用TG处理足细胞时,足细胞凋亡明显低于PAN和PA+CQ处理组。TG处理组磷酸化AKT表达明显增加,Tyg对足细胞的抑制作用明显受到LY29 42的抑制。总之,TG保护PANK损伤的足细胞,其作用主要是通过PI3K依赖途径激活自噬。

数据

图1
图1
TG对体外培养足细胞的毒性作用(a)细胞计数KIT-8测定不同浓度TG后MPCs的检测结果。在2.5的Tg浓度下γ细胞存活率明显降低(P<0.01;红色箭头)。(b)不同浓度的TG处理后MPCs的凋亡率,如Annexin V/丙碘化物测定。TG浓度为2.5时,凋亡细胞百分率显著增加。γg/ml(P<0.001;红色箭头)。数据以平均±标准偏差(n=3)表示。**P<0.01***P<0.001 vs 0γg/ml组。MPCs,小鼠足细胞,TG,雷公藤多苷。
图2
图2
甘油三酯对PAN处理足细胞凋亡的保护作用(a)膜联蛋白V和碘化丙啶染色的流式细胞点图。(b)显示早期细胞凋亡百分比的条形图。(c)各组均表达Caspase-3和Caspase-3的Western印迹。(d)条形图显示caspase-3的相对表达。各组间无显著性差异。(E)条状图显示切割Caspase-3的相对表达。PAN组与对照组相比,Caspase-3表达明显增加,PAN+ 0.63显著降低。γG/ml TG组和PAN+1.25γG/ml TG组与PAN组比较。数据以平均±标准偏差(n=3)表示。***P<0.001与对照组比较;第七章P<0.01β1P<0.001 vs PAN组。TG,雷公藤多甙,潘,嘌呤霉素氨基核苷。
图3
图3
TG对足细胞自噬的影响用Western blot法检测自噬标志物水平。(a)单个组中LC3和P62的代表性带。条形图显示LC3II和p62的相对蛋白表达。(b)TG和CQ促进足细胞LC3II的表达。(c)PAN+TG组和PAN+CQ+TG组P62表达明显低于PAN组和PAN+CQ组。数据以平均±标准偏差(n=3)表示。*P<0.05***P<0.001 vs PAN组;β1PAN+CQ组P<0.001。雷公藤多苷,雷公藤多甙,平阳霉素,嘌呤霉素氨基核苷,CQ,氯喹。
图4
图4
TG通过自噬的上调保护足细胞免于凋亡。(a)膜联蛋白V和碘化丙啶染色的流式细胞点图。(b)条形图显示各组足细胞凋亡率。PAN+TG组和PAN+CQ+TG组足细胞凋亡率较PAN组和PAN+CQ组降低。数据以平均±标准偏差(n=3)表示。*P<0.05,**P<0.01***P<0.001 vs PAN组;γP<0.05,第七章P<0.01β1PAN+CQ组P<0.001。雷公藤多苷,雷公藤多甙,平阳霉素,嘌呤霉素氨基核苷,CQ,氯喹。
图5
图5
个体细胞足细胞的透射电镜观察自噬体。用透射电镜(放大倍数×20000)检测自噬体。(a)对照组足细胞胞浆中观察到大量自噬体。(b)与对照组相比,PAN处理足细胞自噬体的数量明显减少。(c)与对照组相比,TG处理后自噬体的数量明显增加。(d)与TANG组相比,TG处理后自噬体的数量增加。TG,雷公藤多甙,潘,嘌呤霉素氨基核苷。
图6
图6
TG促进足细胞损伤过程中PI3K信号通路的自噬激活。(a)AKT、P -AKT、LC3和P62蛋白在各个体中的代表性带。定量评价各组(B)-Akt、(c)Akt、(d)LC3和(E)P62的水平。LY24402对P- Akt的表达有明显的抑制作用。在TG+PAN和LY2442+TG+PAN组中,P- Akt的表达显著高于PAN组和LY2442+PAN组。TG促进了LC3II的表达,降低了p62的表达。(f)各组细胞凋亡率。数据以平均±标准偏差(n=3)表示。**P<0.01***P<0.001与对照组比较;γP<0.05,第七章P<0.01β1P<0.001 vs PAN组;&P<0.05& & &P<0.001与LY2442+PAN组比较。TG,雷公藤多甙;PAN,嘌呤霉素氨基核苷;PI3K,磷脂酰肌醇3-激酶;P,磷酸化;LC3,微管相关蛋白1A/1B轻链3。

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