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.2018年4月2日；37(1):73.
doi:10.1186/s13046-018-0743-1。

SGK1抑制诱导的自噬通过逆转EMT抑制前列腺癌转移

刘伟伟 1, 王旭初 1, 王依云（Yiyun Wang） 1, 戴一蓓 1, 谢义义 1, 英平 1, 尹彬彬 1, 潘瑜 1, 刘振平 1, 段秀芝 1, 廖兆平 2, 陈玉华 1, 刘春华 2, 向丽 1, 陶志华 三
附属公司

SGK1抑制诱导的自噬通过逆转EMT抑制前列腺癌转移

刘伟伟等。 实验临床癌症研究杂志. .

摘要

背景：尽管SGK1已被确定为一种促肿瘤基因，但SGK1参与肿瘤转移调控的功能和潜在机制尚未在癌症中进行研究。

方法：我们通过伤口愈合试验、迁移和侵袭试验、western blotting、免疫荧光和免疫组织化学研究了GSK650394治疗和SGK1沉默（或过度表达）对人前列腺癌（PCa）细胞株和PC3异种移植物的细胞反应。

结果：在本研究中，我们发现SGK1的表达与人类前列腺癌（PCa）的进展和转移呈正相关。我们发现SGK1的抑制在体内外均能显著减弱EMT和转移，而SGK1过度表达则能显著促进PCa细胞的侵袭和迁移。我们的进一步结果表明，SGK1抑制可诱导抗转移作用，至少部分是通过蜗牛的下调，通过自噬介导的EMT抑制。此外，SGK1的异位表达明显减弱了GSK650394诱导的自噬和抗转移作用。此外，mTOR和SGK1的双重抑制增强了自噬，并对PCa细胞产生协同抗转移作用。

结论：综上所述，本研究揭示了SGK1作为肿瘤转移基因发挥作用的一种新机制，并强调了共同靶向SGK1和自噬如何由于增强的抗转移作用而抑制癌症进展。

关键词：自噬；EMT；转移；前列腺癌；新加坡元1。

PubMed免责声明

利益冲突声明

道德批准和参与同意

在涉及人类参与者的研究中执行的所有程序均符合浙江大学医学院附属第二医院研究伦理委员会的伦理标准及其后来的修订。

出版同意书

不适用。

竞争性利益

作者声明，他们没有相互竞争的利益。

出版商备注

Springer Nature在公布的地图和机构关联中的管辖权主张方面保持中立。

数字

图1
图1
前列腺癌组织中SGK1的免疫组织化学分析。一SGK1在原发性非转移性前列腺癌（NmPCa）组织、原发性转移性前列腺瘤（mPCa。b条45例前列腺癌染色的定量分析
图2
图2
SGK1抑制在体外损害前列腺癌细胞的迁移和侵袭。一DMSO或40μM GSK650394处理的PC3细胞的伤口愈合分析。在刮伤后0、24和48小时分别获得了相控图像，并显示了三个独立实验的代表性图像。使用ImageJ软件分析伤口愈合面积，并在图中表示相对于0 h的相应数据(b条).c（c）对SGK1缺失的PC3和LNCaP细胞（shSGK1）以及对照细胞（LV2-Ctrl）进行细胞迁移分析。显示了膜上迁移细胞的代表性区域（放大倍数，× 200). 量化了每个字段的平均迁移单元数。d日Matrigel细胞侵袭检测按c（c）典型的图像显示了侵入基质凝胶的细胞。显示侵袭肿瘤细胞的代表性直方图，并量化侵袭肿瘤细胞数量。*表明与对照组有显著差异(*P（P） < 0.05，方差分析）
图3
图3
SGK1抑制可诱导自噬，从而有助于抑制转移。a-e公司用空慢病毒对照（LV2-Ctrl）或慢病毒SGK1-shRNA（LV2-shSGK1）感染PC3和LNCaP细胞，然后在用5 mM 3MA或PBS（对照）预处理之前培养24小时。AO染色测定自噬活性(一)并量化(b条)在LNCaP细胞中。c（c）PC3细胞的伤口愈合分析。使用ImageJ软件分析伤口愈合面积，并在图中表示相对于0 h的相应数据(d日).e（电子）对PC3和LNCaP细胞进行基质细胞侵袭试验。典型的图像显示了侵入基质凝胶的细胞。显示侵袭肿瘤细胞的代表性直方图，并量化侵袭肿瘤细胞数量。如果用空慢病毒对照（LV2-Ctrl）或慢病毒SGK1-shRNA（LV2-shSGK1）感染PC3和LNCaP细胞，然后在用5 mM 3MA或PBS（对照）预处理之前培养48小时。用Western blot检测SGK1、LC3-I、LC3-II、MMP3和MMP9的水平，并用GAPDH作为负荷对照。所有结果均代表三个实验，并表示为平均值 ± S.D.公司*P（P） < 0.05
图4
图4
SGK1过表达减弱自噬并促进细胞迁移和侵袭。a-c公司用含有SGK1（LV6-SGK1）表达质粒或空载体（LV6-Ctrl）的慢病毒感染PC3和22Rv1细胞，该空载体对嘌呤霉素产生耐药性。使用针对SGK1的western blot评估稳定过度表达SGK1或单独载体的PC3和22Rv1细胞(一)第6页 × 10422Rv1用于迁移，3 × 105入侵22Rv1(b条). 显示侵袭肿瘤细胞的代表性直方图，并量化侵袭肿瘤细胞数量(c（c）).d-f型用40μM GSK650394处理稳定过度表达SGK1或单独载体的PC3细胞24小时。进行细胞迁移分析和基质凝胶细胞侵袭分析。显示了膜上迁移和侵袭细胞的代表性区域（放大倍数，× 200) (d日). 并量化每个场的侵袭肿瘤细胞数量(e（电子）). 用40μM GSK650394处理48 h后收集总蛋白裂解物，用于LC3、p62、MMP3和MMP9的western blot，并用GAPDH作为负荷对照(如果). 所有结果均代表三个实验，并表示为平均值 ± S.D.公司*P（P） < 0.05
图5
图5
SGK1抑制诱导的自噬激活MET。(a-b公司)对SGK1缺失PC3和LNCaP细胞（shSGK1）以及对照细胞（LV2-Ctrl）中SGK1、蜗牛和纤维结合蛋白（FN1）mRNA表达进行定量RT-PCR分析。(c（c）)SGK1抑制诱导的自噬对EMT调节器的影响。用空慢病毒对照（LV2-Ctrl）或慢病毒SGK1-shRNA（LV2-shSGK1）感染PC3和LNCaP细胞，然后在用5 mM 3MA或PBS（对照）预处理之前培养48小时。Western blot检测LC3、E-cad、N-cad和Vimentin的水平，并使用GAPDH作为负荷控制。所有结果均代表三个实验，并表示为平均值 ± S.D.公司*P（P） < 0.05
图6
图6
mTOR和SGK1的双重抑制可增强自噬，并对PCa细胞产生协同抗转移作用。a-f型用二甲基亚砜或雷帕霉素（100 nM）处理PC3细胞，或感染shSGK1或两者联合处理24 h。AO染色测定自噬活性(一)并量化(b条). 进行细胞迁移分析和基质凝胶细胞侵袭分析。显示了膜上迁移和侵袭细胞的代表性区域（放大倍数，× 200) (c（c）). 并对每个领域的迁移和侵袭细胞数量进行了量化(d-e公司).如果PC3细胞按(一)48小时。使用针对指示抗原的蛋白质印迹法评估PC3细胞的总蛋白质裂解物。所有结果均代表三个实验，并表示为平均值 ± S.D.公司*P（P） < 0.05
图7
图7
下调SGK1抑制体内转移。简单地说，2 × 106PC3公司LV2-控制单元格或2 × 106PC3公司shSGK1型将悬浮在0.2 ml PBS中的细胞接种在每只小鼠的右侧皮下。当PC3的肿瘤LV2级组达到约500 mm三，所有小鼠均被牺牲以收集肿瘤。一通过IHC测定SGK1、LC3B、纤维结合蛋白（FN1）和MMP3水平。展示了具有代表性的图像。b条用Image Pro-Plus定量SGK1、LC3B、纤维结合蛋白（FN1）和MMP3的平均光密度。c（c）western blot检测肿瘤移植组织中SGK1、LC3B、E-cad、N-cad、Vimentin和MMP9的水平*P（P） < 0.05
图8
图8
下调SGK1抑制体内转移。简单地说，小鼠通过尾静脉注射1 × 106PC3公司LV2-控制单元格或1 × 106PC3公司shSGK1型细胞悬浮在0.1ml PBS中。小鼠在植入后8周被安乐死，获得并显示肺部(一).b条肺部用10%甲醛固定，苏木精-伊红（HE）染色检查转移性结节，红色箭头表示转移性结节。(c（c）)肺组织中PSA表达的典型免疫荧光图像。呈现代表性图像，比例尺，100μm
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